嗜水气单胞菌外膜蛋白基因DNA疫苗载体的构建及分析

李盼; 李素一; 吴唯维; 林天龙; 林晨韬; 陈叙

doi:10.19303/j.issn.1008-0384.2013.09.002

嗜水气单胞菌外膜蛋白基因DNA疫苗载体的构建及分析

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2013.09.002

1. 福建农林大学，福建福州 350002;
2. 福建省农业科学院生物技术研究所，福建福州 350003;
3. 福建师范大学，福建福州 350007

基金项目:

福建省农业科学院引进海外人才科研启动基金项目 (HWRC2011-03)

福建省农业科学院博士科研启动基金项目 (2010BS-4)

福建省自然科学基金项目 (2011J05055)

国家自然科学基金项目 (31100658)

详细信息

作者简介:
李盼 (1986-), 男, 硕士研究生, 主要从事预防兽医学研究 (E-mail:lipanxy2@163.com);陈叙 (1978-), 女, 博士, 副研究员, 主要从事水产疫苗学研究 (E-mail:chenxu97@hotmail.com)

中图分类号: S941
计量
- 文章访问数: 229
- HTML全文浏览量: 48
- PDF下载量: 2
- 被引次数: 0
出版历程
- 收稿日期: 2013-07-14
- 刊出日期: 2013-09-18

Construction and Characterization of DNA Vaccine for Major Outer Membrane Protein Gene of Aeromonas hydrophila

1. Fujian Agriculture and Forestry University;
2. Institute of Biotechnology,Fujian Academy of Agricultural Sciences;
3. Fujian Normal University

摘要

摘要: 为构建嗜水气单胞菌的DNA疫苗载体, 根据已发表的该菌外膜蛋白基因momp的核苷酸序列设计一对特异性引物, 应用PCR技术, 扩增到嗜水气单胞菌L316的主要外膜蛋白基因, 并插入到真核表达载体pcDNA3上, 构建成DNA疫苗, 命名为pcDNA3-POMP。以纯化的原核表达蛋白GST-POMP免疫SD大鼠制备抗血清, 用ELISA测定抗体效价达到1∶100 000以上;用pcDNA3-POMP质粒转染293细胞, 转染48h后收集细胞, 提取细胞的RNA进行RT-PCR, 检测到外源基因的表达。至此, 初步完成嗜水气单胞菌DNA疫苗表达载体的构建, 为进一步疫苗免疫和效价的检测奠定基础。
- 嗜水气单胞菌 /
- DNA疫苗 /
- 外膜蛋白
Abstract: For constructing the DNA vaccine, apair of specific PCR primers were designed according to the nucleotide sequence of Aeromonas hydrophila major outer membrane protein gene published by our lab previously. The PCR products were inserted into the eukaryotic expression vector pcDNA3 to construct a DNA vaccine named pcDNA3-POMP.SD rats were immunized with purified prokaryotic-expressed protein GST-POMP to make antiserum, whose antibody titer, measured by ELISA, was over 1∶100 000.293cells were transfected with pcDNA3-POMP, 48hours after transfection, the cells were collected for total RNA extraction and RT-PCR, and the expression of exogenous momp were detected.Therefore, we have constructed a plasmid of DNA vaccine for Aeromonas hydrophila, vaccination and evaluation of this DNA vaccine will be studied in the future.
- Aeromonas hydrophila /
- DNA vaccine /
- outer membrane protein

HTML全文

参考文献(12)

[1]	董传甫, 林天龙, 龚晖, 等.嗜水气单胞菌主要外膜蛋白对欧洲鳗鲡的免疫保护试验[J].水生生物学报, 2005, 29 (3) :285-290.
[2]	韩一凡, 鄢庆枇, 高天翔, 等.鱼类DNA疫苗的研究进展[J].海洋科学, 2005, 29 (3) :64-70.
[3]	ANDERSON, E D, MOURICH D V, LEONG J A.Gene expression in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) following intramuscular injection of DNA[J].Mol Mar Biol Biotechnol, 1996, 5 (2) :105-113.
[4]	ANDERSON E D, MOURICH D V, FAHRENKRUG S C, et al.Genetic immunization of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) against infectious hematopoietic necrosis virus[J].Mol Mar Biol Biotechnol, 1996, 5 (2) :114-122.
[5]	LORENZEN N, LORENZEN E, EINER-JENSEN K, et al.Immunity induced shortly after DNA vaccination of rainbow trout against rhabdoviruses protects against heterologous virus but not against bacterial pathogens[J].Dev Comp Immunol, 2002, 26 (2) :173-179.
[6]	PASNIK D J, SMITH S A.Immunogenic and protective effects of a DNA vaccine for Mycobacterium marinum in fish[J].Vet Immunol Immunopathol, 2005, 103 (3-4) :195-206.
[7]	MIKALSEN A B, TORGERSEN J, ALESTR M P, et al.Protection of atlantic salmon Salmo salar against infectious pancreatic necrosis after DNA vaccination[J].Dis Aquat Organ, 2004, 60 (1) :11-20.
[8]	LUTWYCHE P, EXNER M M, HANCOCK R E, et al.A conserved Aeromonas salmonicida porin provides protective immunity to rainbow trout[J].Infect&Immun, 1995, 63 (8) :3137-3142.
[9]	RAHMAN M H, KAWAI K.Outer membrane proteins of Aeromonas hydrophila induce protective immunity in goldfish[J].Fish Shellfish Immunol, 2000, 10 (4) :379-382.
[10]	李碧华.革兰氏阴性菌外膜蛋白结构、功能及遗传学[J].国外遗传学:微生物学分册, 1991, 14 (5) :193-196.
[11]	欧阳岁东, 林天龙, 龚晖, 等.鳗源嗜水气单胞菌L316主要外膜蛋白基因克隆和序列分析[J].福建农业学报, 2005, 20 (3) :180-184.
[12]	董传甫, 林天龙, 俞伏松, 等.嗜水气单胞菌细胞外膜蛋白及S层蛋白分析[J].中国水产科学, 2003, 10 (3) :201-205.

施引文献

资源附件(0)

访问统计

点击查看大图

计量

文章访问数: 229
HTML全文浏览量: 48
PDF下载量: 2
被引次数: 0

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

留言板

嗜水气单胞菌外膜蛋白基因DNA疫苗载体的构建及分析

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2013.09.002

作者简介:
李盼 (1986-), 男, 硕士研究生, 主要从事预防兽医学研究 (E-mail:lipanxy2@163.com);陈叙 (1978-), 女, 博士, 副研究员, 主要从事水产疫苗学研究 (E-mail:chenxu97@hotmail.com)

计量

Construction and Characterization of DNA Vaccine for Major Outer Membrane Protein Gene of Aeromonas hydrophila

计量

目录

留言板

嗜水气单胞菌外膜蛋白基因DNA疫苗载体的构建及分析

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2013.09.002

作者简介: 李盼 (1986-), 男, 硕士研究生, 主要从事预防兽医学研究 (E-mail:lipanxy2@163.com);陈叙 (1978-), 女, 博士, 副研究员, 主要从事水产疫苗学研究 (E-mail:chenxu97@hotmail.com)

计量

出版历程

Construction and Characterization of DNA Vaccine for Major Outer Membrane Protein Gene of Aeromonas hydrophila

计量

出版历程

目录

作者简介:
李盼 (1986-), 男, 硕士研究生, 主要从事预防兽医学研究 (E-mail:lipanxy2@163.com);陈叙 (1978-), 女, 博士, 副研究员, 主要从事水产疫苗学研究 (E-mail:chenxu97@hotmail.com)