Polyphenol Oxidase and Peroxidase in Luffa cylindrica
-
摘要: 应用分光光度法研究丝瓜多酚氧化酶及过氧化物酶酶学特性的影响因素,为丝瓜酶促褐变的研究提供基础。以普通丝瓜果肉为材料,PPO以邻苯二酚为底物,POD以愈创木酚为底物,研究分析反应温度、反应时间、pH及测量波长、底物的浓度、PPO提取酶液添加量对丝瓜PPO、POD活性的影响。丝瓜褐变相关酶提取和测定方法的优化:(1)PPO最佳反应体系:测定波长408 nm、反应温度是35℃、pH为6.0、酶液用量0.15 mL,最适底物为邻苯二酚,底物浓度为0.056 mol·L-1;(2)POD最佳反应体系:测定波长410 nm,反应温度为40℃,最佳pH为5.5,酶液用量0.1 mL,底物是愈创木酚,浓度为0.067 mol·L-1。Abstract: Factors affecting the properties of polyphenol oxidase (PPO) and peroxidase (POD) in luffa (Luffa cylindrica) were studied for information relating to enzymatic browning of the vegetable. The temperature, time duration, pH, and concentrations of the substrates, i.e., catechol for PPO activity and guaiacol for POD activity determinations, applied for the reaction as well as the wavelength used for the spectrophotometric color measurements were analyzed. The results indicated that (1) the optimum reaction system for PPO activity determination required the applications of wavelength at 408 nm for the spectrophotometry, a temperature at 35, a pH of 6.0, and an enzyme dosage of 0.15 mL with 0.056 moL·L-1 catechol; and, (2) the optimum reaction system for POD, wavelength at 410 nm, a temperature at 40, a pH of 5.5, an enzyme dosage of 0.1 mL with 0.067 moL·L-1 guaiacol.
-
Key words:
- Luffa cylindrica /
- enzymatic browning /
- PPO /
- POD /
- enzyme properties
-
表 1 供试材料
Table 1. Material applied
自编号 材料 栽培类型 1 5 有棱丝瓜 2 29 有棱丝瓜 3 38 有棱丝瓜 4 43 有棱丝瓜 5 45 有棱丝瓜 6 48 有棱丝瓜 7 60 有棱丝瓜 8 69 有棱丝瓜 9 77 有棱丝瓜 10 78 有棱丝瓜 11 80 有棱丝瓜 12 85 有棱丝瓜 13 87 有棱丝瓜 14 89 普通丝瓜 15 97 有棱丝瓜 16 110 有棱丝瓜 17 113 普通丝瓜 18 114 普通丝瓜 19 126 普通丝瓜 20 127 有棱丝瓜 21 128 有棱丝瓜 22 133 有棱丝瓜 23 142 普通丝瓜 24 144 有棱丝瓜 25 S151 有棱丝瓜 26 158 有棱丝瓜 27 黑10 普通丝瓜 28 黑13 普通丝瓜 29 黑12 普通丝瓜 30 6 有棱丝瓜 31 61 普通丝瓜 32 65 普通丝瓜 33 160 普通丝瓜 34 159 普通丝瓜 35 68 普通丝瓜 36 37 普通丝瓜 37 92 普通丝瓜 38 30 普通丝瓜 39 A2 普通丝瓜 40 A4 普通丝瓜 41 A1×A5 普通丝瓜 42 A5 普通丝瓜 43 A1 普通丝瓜 44 A1×A3 普通丝瓜 45 A6 普通丝瓜 46 12 普通丝瓜 47 8 普通丝瓜 48 LA1 普通丝瓜 49 Y3 普通丝瓜 50 L3 普通丝瓜 51 LA1×A3 普通丝瓜 52 YA1×A3 普通丝瓜 53 Y151 有棱丝瓜 54 Y89 普通丝瓜 55 L38 有棱丝瓜 56 L黑10 普通丝瓜 57 L89 普通丝瓜 58 L151 有棱丝瓜 59 S3 普通丝瓜 60 Y黑10 普通丝瓜 61 44 普通丝瓜 62 Y38 普通丝瓜 -
[1] 苏小俊, 徐海, 高军, 等.普通丝瓜果实性状的遗传分析[J].江苏农业报, 2009, 25(5):112-118. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-JSNB200905032.htm [2] 黄树苹, 谈太明, 徐长城, 等.丝瓜多酚氧化酶的酶学特性初步研究[J].中国蔬菜, 2009, (10):17-22. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGSC200910003.htm [3] 王成, 王辉, 娄丽娜, 等.普通丝瓜果肉褐变的鉴定方法[J].江苏农业科学, 2012, 40(11):137-138. doi: 10.3969/j.issn.1002-1302.2012.11.056 [4] 周向军, 高义霞, 袁毅君, 等.丝瓜过氧化物酶的特性和抑制作用研究[J].中国酿造, 2013, 29(19):103-106. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZNGZ201110024.htm [5] 花秀凤, 陈铣, 黄斌斌.普通丝瓜果肉褐变的变异及低褐变品种的筛选[J].中国农学通报, 2013, 29(19):103-106. doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.2013-0433 [6] 孙友位. 普通小麦籽粒多酚氧化酶及黄色素含量相关基因克隆与表达机理分析[D]. 北京: 中国农业科学院, 2012. http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-82101-1012415760.htm [7] THIPYAPONG P. Tomato polyphenol oxidase. Differential re-sponse of the polyphenol oxidase F promoter to injures and woundsignals[J]. Plant Physiology, 1997, 115:409. doi: 10.1104/pp.115.2.409 [8] SHAHAR T.The tomato 66.3-kD polyphenoloxidase gene:Molecular identification and developmental expression[J]. The Plant Cell, 1992, 4(2):135. doi: 10.1105/tpc.4.2.135 [9] SERRANO-MARTINEZ A, FORTEA M I, DELAMOR F M, et al.Kinetic characterisation and thermal inactivation study of partially purified red pepper(Capsicum anmum L.)Peroxidase[J]. Food Chemistry, 2008, 107(1):193-199. doi: 10.1016/j.foodchem.2007.08.028 [10] 叶梅.植物组织褐变的研究进展[J].重庆工商大学学报, 2005, 22(14):326-381. http://youxian.cnki.com.cn/yxdetail.aspx?filename=SPKJ2017080300G&dbname=CAPJ2015 [11] 李合生.植物生理生化试验原理与技术[M].北京:高等教育出版社, 2000. [12] 周向军, 高义霞, 袁毅君, 等.丝瓜过氧化物酶的特性和抑制作用研究[J].中国酿造, 2011, (10):81-85. doi: 10.3969/j.issn.0254-5071.2011.10.023 [13] 周俊辉, 周家容, 曾浩森, 等.园艺植物组织培养中的褐化现象及抗褐化研究进展[J].园艺学报, 2000, 27(S1):481-486, 201(10):81-85. [14] 代丽, 宫长荣, 史霖, 等.植物多酚氧化酶研究综述[J].植物生理学, 2007, 23(6):312-316. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZNTB200706068.htm [15] 黄树苹, 谈太明, 徐长城等.丝瓜多酚氧化酶的酶学特性初步研究[J].中国蔬菜, 2009, (10):17-22. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGSC200910003.htm [16] 秦卫东, 钱寿凤, 周瑞.仙人掌多酚氧化酶的特性及抑制研究[J].食品科学, 2004, 25(9):64-66. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SPKX200409014.htm [17] 郭蔼光.基础生物化学[M].北京:高等教育出版社, 2004:87.