Antibacterial and Insecticidal Activities of Ethanol Plant Extracts
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摘要:目的 研究5种植物乙醇提取物的抑菌杀虫活性，并对杀蝗活性最高的闹羊花提取物进行活性物质的分离，为进一步研究其杀蝗活性物质的结构和其作用机理提供参考。方法 筛选铁棒锤Aconitum Pendulum、肉豆蔻Myristica fragrans Houtt、（紫丱子）紫铆Butea monosperma（Lan.）Kuntze、翼首草Pterocephalus hookeri和闹羊花Rhododendron mole 5种植物乙醇提取物，分别测定其对植物病原真菌的抑制活性，对蚜虫和东亚飞蝗的毒力；采用连续分级萃取法和柱层析法分离闹羊花的杀蝗活性物质。结果 肉豆蔻提取物在1 000 mg·L-1质量浓度下对番茄绵腐病菌、苹果轮纹病菌和水稻纹枯病菌的抑制率分别为75.23%、77.78%和88.85%；48 h后闹羊花提取物在2 000 mg·L-1质量浓度下对蚜虫的致死率为55.38%，10 000 mg·L-1下的致死率为100%；闹羊花提取物在10 000 mg·L-1质量浓度下，24 h后对蝗虫的致死率为44.83%，96 h后的致死率为86.96%。从闹羊花提取物中分离得到的活性物质流分Ⅲ-2-2，在1 000 mg·L-1质量浓度下，24 h后对蝗虫的致死率为53.57%，120 h后的致死率为90.48%。结论 肉豆蔻提取物的抑菌活性最高；闹羊花提取物对蚜虫和蝗虫的毒杀活性最高；闹羊花提取物中杀蝗活性物质集中在石油醚萃取物和二氯甲烷萃取物，从二氯甲烷萃取物中分离得到对蝗虫毒杀活性最高的流分Ⅲ-2-2。Abstract:Objective Ethanol extracts of 5 species of plants were analyzed for possible antibacterial and/or insecticidal applications in disease control.Method Aconitum Pendulum, nutmeg (Myristica fragrans Houtt), Butea monosperma (Lan.) Kuntze, Pterocephalus hookeri, and Rhododendron molle were selected for the extraction. The inhibitory activities of the extracts against plant pathogenic fungi as well as the virulence to aphids and locusts were determined. Subsequently, the greatest locust-killing capacity demonstrated by the R. molle extract was subjected to a step-wise fractional extraction and column separations to isolate active substances.Result The nutmeg extract applied at 1 000 mg·L-1 level inhibited the growth of Pythium aphanidermatum, Physalospora berengeriana and Rhizoctonia solani at 75.23%, 77.78% and 88.85%, respectively. The R. molle extract showed the lethality on aphids at a rate of 55.38% with the dosage of 2 000 mg·L-1 and 100% with 10 000 mg·L-1in 48h; while that on locusts, 44.83% in 24h and 86.96% in 96h with 10 000 mg·L-1. At 1 000 mg·L-1 dosage, the active fraction, Ⅲ-2-2, isolated from the extract rendered the lethal rates on locusts of 53.57% in 24h and 90.48% in 120h.Conclusion The antibacterial activity of nutmeg extract was the highest among all extracts; the R. molle extract displayed the highest toxicity on aphids and locusts; most of the active substances in the extracts were petroleum ether and dichloromethane soluble; and, Ⅲ-2-2 obtained from the dichloromethane fraction had the highest potency toward locusts.
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0. 引言
【研究意义】东亚飞蝗隶属于昆虫纲、直翅目、斑翅蝗科，是一种杂食性昆虫，其分布范围十分广泛，危害着我国的农牧业。从自然界发掘有害生物的克生生物因子(微生物源、植物源、动物源)对病虫害进行综合防治，是目前生物技术领域研究的热点之一[1]；植物源农药的有效成分是植物体中的次生代谢产物，如生物碱类、黄酮类、萜烯类、酚类等，具有环境友好、对非靶标生物安全、不易产生抗药性、作用方式特异、促进作物生长并提高抗病性、种类多、开发途径多等特点[2]，从植物中分离纯化具有农药活性的新物质，以此先导化合物为结构模板，进行结构的多级优化，创制高效低毒新农药是植物农药的研究重点。【前人研究进展】闹羊花[3]Rhododendron molle为杜鹃花科、杜鹃花属、羊踯躅亚属的落叶灌木，通常称之为黄杜鹃，又名羊踯躅，是中国特有的一种有毒植物，其杀虫活性已有很多研究[4-6]，例如对黏虫、菜青虫、稻飞虱、小菜蛾、二化螟等均有一定的活性。【本研究切入点】闹羊花对蝗虫的活性研究未有报道。【拟解决的关键问题】为了筛选出有应用价值的植物源农药，本研究先将5种植物乙醇提取物对植物病原真菌的抑制活性、对蚜虫和东亚飞蝗的毒杀活性进行初步筛选，确定闹羊花乙醇提取物为研究对象，对其进行分离及活性跟踪，以期得到效果好的杀蝗虫活性物质。
1. 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试植物材料
供试植物为：铁棒锤Aconitum Pendulum(毛茛科，供试部位为根)、肉豆蔻Myristica fragrans Houtt(肉豆蔻科，供试部位为种子)、(紫丱子)紫铆Butea monosperma(Lan.)Kuntze(豆科，供试部位为种子)、翼首草Pterocephalus hookeri(川续断科，供试部位为地上部分)、闹羊花Rhododendron molle(杜鹃花科，供试部位为花)。
1.1.2 供试病原真菌
供试病原真菌为水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani、小麦赤霉病菌Gibberella zeae、苹果轮纹病菌Physalospora berengeriana、玉米小斑病菌Helminthosporium maydis、棉花枯萎病菌Fusarium oxysporumf.sp. vasinfectum、马铃薯晚疫病菌Phytopthora infestans、番茄绵腐病菌Pythium aphanidermatum，以上病原菌种均来自四川省农业科学院。
1.1.3 供试昆虫
棉蚜Aphis gossypii Glover，采自成都近郊大豆苗田，试验当天采取。东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis Meyen三龄若虫，购于云南省昆明市蝗虫养殖基地；试虫置于大饲养笼，在室内温度(25±2)℃、相对湿度(70±10)%的条件下，用新鲜竹叶饲喂，试验前进行饥饿处理24 h。
1.2 方法
1.2.1 乙醇提取物的制备
乙醇浸提[7]：植物样品阴干后用打粉机粉碎，采用浸提法将样品粉末按照1:10(W:V)的比例用95%乙醇水溶液浸泡，恒温40℃下搅拌24 h，重复3次后将提取液合并，减压浓缩后得到浸膏状提取物，置于4℃冰箱保存备用。
1.2.2 闹羊花提取物的4种萃取物制备
闹羊花的乙醇提取物拌以适量硅藻土，混合均匀后于室内阴干，依次按石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯及乙醇的顺序萃取完全，减压浓缩萃取液，得到的4种浸膏置于4℃冰箱保存备用。
1.2.3 闹羊花杀蝗虫活性成分的分离
硅胶H用作固定相，均采用湿法装柱，干法上样，薄层色谱检测合并Rf值相同的流分, 用紫外灯和碘显标记。第一次柱层析分离：柱径为50 mm，粗分二氯甲烷萃取物，分别用正己烷:乙酸乙酯(2:1、1:1、1:2、1:3)及纯乙酸乙酯进行梯度洗脱，最后用无水乙醇洗脱极性大的部分，收集成4段，分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。蝗虫毒力测定后，对活性最高的第Ⅲ段进行再分析。第二次柱层析分离：柱径为25 mm，分别用正己烷:乙酸乙酯(1:1、1:2、1:3)及纯乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集成3段，分别为Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3。蝗虫毒力测定后，对活性最高的第Ⅲ-2段进行再分析。第三次柱层析：柱径为2.0 mm，分别用正己烷:乙酸乙酯(1:2、1:3)进行梯度洗脱，收集成2段，分别为Ⅲ-2-1、Ⅲ-2-2。蝗虫活性测定后，对活性最高的第Ⅲ-2-2段进行去杂纯化。薄层色谱制备纯化：Ⅲ-2-2段在层析板显示主成分周围有少量Rf值接近的杂质谱带，因此利用薄层色谱制备法纯化；硅胶GF254厚度1 mm、薄板规格10 cm×20 cm，将Ⅲ-2-2段溶液均匀平铺至薄层制备板上，以二氯甲烷:甲醇(10:1)为展开剂，待主成分与其他色谱带较明显分开后，刮板浸提得到单一色谱带物质。
1.3 生物活性测定
抑菌活性的测定[8]：采用生长速率法；分别称取不用植物乙醇提取物50 mg溶于1 mL丙酮，在无菌操作台上与已灭菌的1‰的吐温水(Tween-80)4 mL混合，取混液1 mL于49 mL的PDA培养基，摇匀得到质量浓度为1 000 mg·L-1的药液；均匀铺平板，待培养基凝固后，在平板中央接上菌饼，菌饼直径为0.8 cm，菌丝面向下，置于28℃恒温真菌培养箱内培养；空白对照为不含药物的丙酮，每种药液3组重复，当空白对照菌落直径长到6.0 cm左右，十字交叉法测量平板的菌落直径，计算平均相对抑菌率和标准误差。
相对抑菌率(%)=[(空白组菌落平均直径-处理组菌落平均直径)/(空白组菌落平均直径-0.8 cm)]×100%
蚜虫毒力测定：采用直接浸液法测定毒力[9-10]；称取适量不同植物乙醇提取物与等量吐温-80混匀，加少量蒸馏水充分乳化后，再用蒸馏水梯度稀释至2 000、5 000、10 000 mg·L-1；空白对照为不含药物的试液，挑除部分病弱个体，选取大小适中的健康无翅成蚜，将等大的叶片浸入药液2~3 s后取出沥干，将带虫面向上置于铺有滤纸的培养皿中，用穿孔的保鲜膜包住防止蚜虫爬失，置于室温(25℃)下48 h后观察结果；每组30只蚜虫，每种药液3组重复，计算平均校正死亡率和标准误差。
平均死亡率(%)=(死亡虫数/供试总虫数)×100%
校正死亡率(%)=[(处理组平均死亡率-对照组平均死亡率)/(1-空白组平均死亡率)]×100%
蝗虫毒力测定：采用浸虫浸叶法测定[11-12]；称取适量药物溶解于1 mL二甲基亚砜(DMSO)，用1‰的吐温水(Tween-80)稀释为所需浓度的药液50 mL；将新鲜竹叶完全浸入药液，取出沥干水，放入蝗虫笼，再将蝗虫浸入药液，1~2 s后取出立即置于笼内，每个笼子内15只蝗虫，空白对照为不含药物的试液，每种药液3组重复，每天喂食一次新鲜竹叶，在空白组无异常死亡的条件下，每隔24 h观察蝗虫的死亡状况，计算平均校正死亡率和标准误差。
平均死亡率(%)=(死亡虫数/供试总虫数)×100%
校正死亡率(%)=[(处理组平均死亡率-对照组平均死亡率)/(1-空白组平均死亡率)]×100%
1.4 数据处理
试验数据用Excel、DPS软件进行统计和分析，采用Duncan′s新复极差法分析不同处理间差异显著性。
2. 结果与分析
2.1 不同植物乙醇提取物抑菌杀虫活性筛选
2.1.1 不同植物乙醇提取物对病原真菌的抑制活性
分别对各植物乙醇提取物进行抑菌活性测定，结果如表 1所示。
表 1 不同植物乙醇提取物的相对抑菌率Table 1. Antibacterial activity of extracts(单位/%) 植物乙醇提取物
Ethanol extract小麦赤霉
Gibberella zeae苹果轮纹
Physalospora berengeriana棉花枯萎
Fusarium oxysporum玉米小斑
Helminthosporium maydis番茄绵腐
Pythium aphanidermatum马铃薯晚疫
Phytopthora infestans水稻纹枯
Rhizoctonia solani铁棒锤Aconitum Pendulum 2.59±0.17c 14.59±0.53c 10.02±0.60c 4.72±0.84c 24.77±1.54bc 3.46±0.73c 28.53±1.66bc 肉豆蔻 Myristica fragrans Houtt 52.78±2.03a 77.78±1.81a 65.49±2.67a 48.76±1.90a 75.23±2.71a 53.05±2.11a 88.85±2.83a 紫丱子 Butea monosperma(Lan.)Kuntze 10.00±1.90bc - 8.9±0.82c 4.72±0.23c 7.85±0.45d 7.08±0.32c 26.00±2.11c 翼首草 Pterocephalus hookeri 14.37±1.66b 34.5±2.47b 23.25±2.26b 15.67±1.03b 32.29±1.84b 19.38±2.23b 38.07±3.04b 闹羊花 Rhododendron molle 5.67±1.49c 15.78±1.56c 7.83±2.38c 20.00±1.60b 21.27±0.75c 12.49±1.88bc 11.78±1.91d 注：①“-”表示负数；②表内数据系3次重复的统计结果，供试药物质量浓度为1000 mg·L-1，同列数据后不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)。表 2~7同。
Note:①“-”means negative；② The data was the statistical result of three repetitions, the concentration was 1 000 mg·L-1, different lower-case letters after the same column of data showed significant difference (P < 0.05).The same Table 2-7.表 2 乙醇提取物对蚜虫的致死率Table 2. Lethality of ethanol extracts on aphids(单位/%) 植物乙醇提取物
Ethanol extract质量浓度Concentration 2000 mg·L-1 5000 mg·L-1 10000 mg·L-1 铁棒锤 Aconitum Pendulum 29.74±3.54d 39.71±4.47cd 67.79±7.45c 肉豆蔻 Myristica fragrans Houtt 6.64±2.38e 42.79±6.81c 80.15±5.65b 紫丱子 Butea monosperma(Lan.)Kuntze 39.81±4.71c 38.46±4.37cd 39.14±5.54d 翼首草 Pterocephalus hookeri 10.33±3.23e 31.19±5.38d 46.67±5.02d 闹羊花 Rhododendron molle 55.38±7.26b 78.25±6.83b 100a 阳性对照Positive control 100a 100a 100a 注：阳性对照为质量浓度100 mg·L-1的氯虫菊酯。
Note: The positive control was permethrin with 100 mg·L-1.表 3 乙醇提取物对蝗虫的致死率Table 3. 3 Lethality of ethanol extracts on locusts(单位/%) 植物乙醇提取物
Ethanol extract校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h 铁棒锤 Aconitum Pendulum 24.14±2.53b 48.15±2.78b 60±3.54c 65.22±2.60c 肉豆蔻 Myristica fragrans Houtt 10.34±2.14c 29.63±2.43c 44±1.71d 47.83±3.14d 紫丱子 Butea monosperma(Lan.)Kuntze 17.24±1.37bc 33.33±2.32c 36±2.61d 39.13±2.38d 翼首草 Pterocephalus hookeri 13.79±1.64c 25.92±1.37c 40±2.87d 43.48±1.54d 闹羊花 Rhododendron molle 44.83±2.72a 74.07±3.49a 84±2.11b 86.96±2.66b 阳性对照Positive control 44.83±2.13a 81.48±3.02a 100a 100a 注：供试药物质量浓度为10 000 mg·L-1，阳性对照为40 mg·L-1的氟虫腈。
Note: The concentration was 10 000 mg·L-1, the positive control was fipronil with 40 mg·L-1.表 4 4种萃取物对蝗虫的致死率Table 4. Lethality of extracts on locusts(单位/%) 供试药物
Test drug校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h 石油醚萃取物Petroleum etherfraction 40.00±2.54c 55.17±3.32b 67.86±2.83b 70.37±2.71b 二氯甲烷萃取物Dichloromethanefraction 66.67±3.14a 86.21±2.32a 85.71±2.67a 88.98±2.65a 乙酸乙酯萃取物Ethyl acetate fraction 13.33±2.74d 13.79±2.75c 10.71±1.32d 14.81±2.04c 乙醇萃取物Ethanol fraction 3.33±1.60e 3.33±1.60d 7.14±2.56d 14.81±1.92c 提取物Extract 50.00±1.92b 51.72±2.23b 53.57±1.49c 70.37±3.78b 注：供试药物质量浓度为4 000 mg·L-1。
Note: The concentration was 4 000 mg·L-1.表 5 第一次柱层析各流分对蝗虫的致死率Table 5. Lethality on locusts of substance separated from 1st column chromatography(单位/%) 供试药物
Test drug校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h Ⅰ 3.33±1.03c 10.71±1.78c 17.86±2.32c 23.03±1.90c Ⅱ 13.33±1.73b 17.24±2.23c 23.08±2.14c 29.17±1.45c Ⅲ 40.00±2.11a 65.52±3.56a 88.46±2.81a 95.83±2.66a Ⅳ 3.33±0.54c 27.59±2.47b 34.62±1.91b 45.83±3.04b 注：供试药物质量浓度为2 000 mg·L-1。表 6同。
Note: The concentration was 2 000 mg·L-1.The same as Table 6.表 6 第二次柱层析各流分对蝗虫的致死活性Table 6. Lethality on locusts of substance separated from 2nd column chromatography(单位/%) 供试药物
Test drug校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h Ⅲ-1 0c 13.64±2.53b 23.08±2.65b 29.17±2.75c Ⅲ-2 76.67±2.53a 96.55±2.88a 100.00a 100.00a Ⅲ-3 9.33±1.26b 10.34±2.49b 30.77±2.32b 54.17±2.83b 表 7 第三次柱层析杀蝗活性验证结果Table 7. Lethality on locusts of substance separated from 3rd column chromatography(单位/%) 供试药物
Test drug校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h Ⅲ-2-1 3.57±1.71b 33.33±2.38b 32±2.26b 30.43±2.84b 33.33±1.83b Ⅲ-2-2 53.57±2.71a 70.37±2.53a 72±2.81a 82.61±3.65a 90.48±2.49a 注：供试药物质量浓度为1 000 mg·L-1。
Note: The concentration was 1 000 mg·L-1.由表 1可见，肉豆蔻乙醇提取物比其他4种植物对7种植物病原真菌有更显著的抑制效果。1 000 mg·L-1质量浓度下，肉豆蔻乙醇提取物对病原真菌的抑制率较高，对番茄绵腐病菌、苹果轮纹病菌和水稻纹枯病菌的抑制率分别达到了75.23%、77.78%和88.85%，闹羊花等植物乙醇提取物也对部分病原真菌有一定的抑制活性。
2.1.2 不同植物乙醇提取物对蚜虫的毒力测定
分别对5种植物乙醇提取物进行蚜虫毒力测定，结果如表 2所示。
由表 2可知，5种植物乙醇提取物对蚜虫都具有一定的毒杀活性，闹羊花乙醇提取物的杀蚜活性最高，48 h后在2 000 mg·L-1的质量浓度下致死率为55.38%，在10 000 mg·L-1下对蚜虫的致死率达到100%。
2.1.3 不同植物乙醇提取物对蝗虫的毒力测定结果
分别对5种植物乙醇提取物进行蝗虫毒力测定，结果如表 3所示。
由表 3可知，闹羊花乙醇提取物对蝗虫的毒杀活性最高，在供试质量浓度为10 000 mg·L-1时，24 h后对蝗虫的致死率为44.83%，96 h后的致死率为86.96%，因此选择闹羊花提取物进行杀蝗活性成分的分离及追踪研究。
2.2 闹羊花杀蝗虫活性物质的分离及活性测定
2.2.1 不同极性萃取物对蝗虫的毒力
分别对闹羊花乙醇提取物的4种不同极性萃取物进行蝗虫毒力测定，结果如表 4所示。4种萃取物对蝗虫毒力测定结果如表 4所示，乙酸乙酯萃取物和乙醇萃取物的毒杀活性偏低，二氯甲烷萃取物和石油醚萃取物对蝗虫的毒杀活性较高；且二氯甲烷萃取物高于石油醚萃取物，在4 000 mg·L-1质量浓度下，96 h后对蝗虫的致死率分别为88.98%和70.37%，因此选择二氯甲烷萃取物作为接下来的分离对象。
2.2.2 柱层析分离各流分对蝗虫的毒力
闹羊花乙醇提取物的二氯甲烷萃取物经过三次硅胶柱层析分离得到不同极性的流分，对各流分进行蝗虫毒力测定，结果如表 5~7所示。
由表 5可知，第一次柱层析分离得到4段流分，第Ⅲ段对蝗虫的致死率对比其他3段有显著差异，毒杀活性最高，2 000 mg·L-1的质量浓度下，24 h和96 h后对蝗虫的致死率分别为40%、95.83%。
由表 6可知，第二次柱层析分离所得3段流分Ⅲ-1、Ⅲ-2和Ⅲ-3，对蝗虫毒杀活性最高的为Ⅲ-2，2 000 mg·L-1的质量浓度下24 h后对蝗虫的致死率为76.67%，72 h后的致死率达到100%。
由表 7可知，第三次柱层析分离所得两段流分Ⅲ-2-1和Ⅲ-2-2，对蝗虫致死率高的是Ⅲ-2-2，1 000 mg·L-1的质量浓度下24 h后对蝗虫的致死率为53.57%，120 h后的致死率达到90.48%。
3. 讨论与结论
肉豆蔻抑制真菌活性的有关研究很少，涉及农药方面的只有肉豆蔻甲醇提取物中分离肉豆蔻木酚素的一篇报道[13]，因此本研究抑菌活性试验结果发现肉豆蔻对植物病原真菌方面的防治功效有一定深入研究价值。闹羊花作为杀虫植物很早就在我国使用，其提取物对很多农、林、牧及卫生害虫有明显的胃毒、触杀等作用，目前的研究表明闹羊花杀虫的活性成分多为四环二萜类化合物，闹羊花素-Ⅲ是主要的活性成分之一，闹羊花对斜纹夜蛾、小菜蛾、马铃薯甲虫等的活性研究有很多[14-16]，但是却没有对蝗虫毒杀活性的相关报道。在许多具有杀虫活性的植物中，同一种植物对不同害虫的毒性有差异，某种植物对特定的害虫具有特异的作用效果，所以研究闹羊花对直翅目的蝗虫活性以及活性物质的分离有一定的意义。
本研究对5种植物的乙醇提取物进行了初步的抑菌杀虫活性筛选，测定其对7种病原真菌的抑制活性，结果显示肉豆蔻乙醇提取物对7种病原真菌的抑制率明显较高，1 000 mg·L-1质量浓度下对水稻纹枯病菌的抑制率达到了88.85%；对蚜虫的毒力测定结果显示闹羊花乙醇提取物的杀蚜活性很高，在2 000 mg·L-1的质量浓度下48 h后致死率为55.38%，在10 000 mg·L-1下48 h后的致死率达到100%；浸虫浸叶法测定了对东亚飞蝗的毒杀活性，结果显示在质量浓度为10 000 mg·L-1时，闹羊花提取物24 h后对蝗虫的致死率为44.83%，96 h后致死率为86.96%，对蝗虫具有较高的毒杀活性。接着对闹羊花乙醇提取物连续分步萃取得到4种萃取产物，蝗虫毒力测定结果显示其活性物质主要集中在石油醚萃取物和二氯甲烷萃取物中，因二氯甲烷萃取物活性更高，对二氯甲烷萃取物进行柱层析分离，并且跟踪检测不同流分杀蝗活性，得到的Ⅲ-2-2段活性物质在1 000 mg·L-1质量浓度下对蝗虫的致死率24 h为53.57%，120 h后为90.48%。
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表 1 不同植物乙醇提取物的相对抑菌率
Table 1 Antibacterial activity of extracts
(单位/%) 植物乙醇提取物
Ethanol extract小麦赤霉
Gibberella zeae苹果轮纹
Physalospora berengeriana棉花枯萎
Fusarium oxysporum玉米小斑
Helminthosporium maydis番茄绵腐
Pythium aphanidermatum马铃薯晚疫
Phytopthora infestans水稻纹枯
Rhizoctonia solani铁棒锤Aconitum Pendulum 2.59±0.17c 14.59±0.53c 10.02±0.60c 4.72±0.84c 24.77±1.54bc 3.46±0.73c 28.53±1.66bc 肉豆蔻 Myristica fragrans Houtt 52.78±2.03a 77.78±1.81a 65.49±2.67a 48.76±1.90a 75.23±2.71a 53.05±2.11a 88.85±2.83a 紫丱子 Butea monosperma(Lan.)Kuntze 10.00±1.90bc - 8.9±0.82c 4.72±0.23c 7.85±0.45d 7.08±0.32c 26.00±2.11c 翼首草 Pterocephalus hookeri 14.37±1.66b 34.5±2.47b 23.25±2.26b 15.67±1.03b 32.29±1.84b 19.38±2.23b 38.07±3.04b 闹羊花 Rhododendron molle 5.67±1.49c 15.78±1.56c 7.83±2.38c 20.00±1.60b 21.27±0.75c 12.49±1.88bc 11.78±1.91d 注：①“-”表示负数；②表内数据系3次重复的统计结果，供试药物质量浓度为1000 mg·L-1，同列数据后不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)。表 2~7同。
Note:①“-”means negative；② The data was the statistical result of three repetitions, the concentration was 1 000 mg·L-1, different lower-case letters after the same column of data showed significant difference (P < 0.05).The same Table 2-7.
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表 2 乙醇提取物对蚜虫的致死率
Table 2 Lethality of ethanol extracts on aphids
(单位/%) 植物乙醇提取物
Ethanol extract质量浓度Concentration 2000 mg·L-1 5000 mg·L-1 10000 mg·L-1 铁棒锤 Aconitum Pendulum 29.74±3.54d 39.71±4.47cd 67.79±7.45c 肉豆蔻 Myristica fragrans Houtt 6.64±2.38e 42.79±6.81c 80.15±5.65b 紫丱子 Butea monosperma(Lan.)Kuntze 39.81±4.71c 38.46±4.37cd 39.14±5.54d 翼首草 Pterocephalus hookeri 10.33±3.23e 31.19±5.38d 46.67±5.02d 闹羊花 Rhododendron molle 55.38±7.26b 78.25±6.83b 100a 阳性对照Positive control 100a 100a 100a 注：阳性对照为质量浓度100 mg·L-1的氯虫菊酯。
Note: The positive control was permethrin with 100 mg·L-1.
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表 3 乙醇提取物对蝗虫的致死率
Table 3 3 Lethality of ethanol extracts on locusts
(单位/%) 植物乙醇提取物
Ethanol extract校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h 铁棒锤 Aconitum Pendulum 24.14±2.53b 48.15±2.78b 60±3.54c 65.22±2.60c 肉豆蔻 Myristica fragrans Houtt 10.34±2.14c 29.63±2.43c 44±1.71d 47.83±3.14d 紫丱子 Butea monosperma(Lan.)Kuntze 17.24±1.37bc 33.33±2.32c 36±2.61d 39.13±2.38d 翼首草 Pterocephalus hookeri 13.79±1.64c 25.92±1.37c 40±2.87d 43.48±1.54d 闹羊花 Rhododendron molle 44.83±2.72a 74.07±3.49a 84±2.11b 86.96±2.66b 阳性对照Positive control 44.83±2.13a 81.48±3.02a 100a 100a 注：供试药物质量浓度为10 000 mg·L-1，阳性对照为40 mg·L-1的氟虫腈。
Note: The concentration was 10 000 mg·L-1, the positive control was fipronil with 40 mg·L-1.
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表 4 4种萃取物对蝗虫的致死率
Table 4 Lethality of extracts on locusts
(单位/%) 供试药物
Test drug校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h 石油醚萃取物Petroleum etherfraction 40.00±2.54c 55.17±3.32b 67.86±2.83b 70.37±2.71b 二氯甲烷萃取物Dichloromethanefraction 66.67±3.14a 86.21±2.32a 85.71±2.67a 88.98±2.65a 乙酸乙酯萃取物Ethyl acetate fraction 13.33±2.74d 13.79±2.75c 10.71±1.32d 14.81±2.04c 乙醇萃取物Ethanol fraction 3.33±1.60e 3.33±1.60d 7.14±2.56d 14.81±1.92c 提取物Extract 50.00±1.92b 51.72±2.23b 53.57±1.49c 70.37±3.78b 注：供试药物质量浓度为4 000 mg·L-1。
Note: The concentration was 4 000 mg·L-1.
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表 5 第一次柱层析各流分对蝗虫的致死率
Table 5 Lethality on locusts of substance separated from 1st column chromatography
(单位/%) 供试药物
Test drug校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h Ⅰ 3.33±1.03c 10.71±1.78c 17.86±2.32c 23.03±1.90c Ⅱ 13.33±1.73b 17.24±2.23c 23.08±2.14c 29.17±1.45c Ⅲ 40.00±2.11a 65.52±3.56a 88.46±2.81a 95.83±2.66a Ⅳ 3.33±0.54c 27.59±2.47b 34.62±1.91b 45.83±3.04b 注：供试药物质量浓度为2 000 mg·L-1。表 6同。
Note: The concentration was 2 000 mg·L-1.The same as Table 6.
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表 6 第二次柱层析各流分对蝗虫的致死活性
Table 6 Lethality on locusts of substance separated from 2nd column chromatography
(单位/%) 供试药物
Test drug校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h Ⅲ-1 0c 13.64±2.53b 23.08±2.65b 29.17±2.75c Ⅲ-2 76.67±2.53a 96.55±2.88a 100.00a 100.00a Ⅲ-3 9.33±1.26b 10.34±2.49b 30.77±2.32b 54.17±2.83b
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表 7 第三次柱层析杀蝗活性验证结果
Table 7 Lethality on locusts of substance separated from 3rd column chromatography
(单位/%) 供试药物
Test drug校正死亡率Corrected mortality 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h Ⅲ-2-1 3.57±1.71b 33.33±2.38b 32±2.26b 30.43±2.84b 33.33±1.83b Ⅲ-2-2 53.57±2.71a 70.37±2.53a 72±2.81a 82.61±3.65a 90.48±2.49a 注：供试药物质量浓度为1 000 mg·L-1。
Note: The concentration was 1 000 mg·L-1.
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