Differentiation between Reciprocal-crossed Hybrids of Dendrobium officinale and D.huoshanense Using SSR Markers
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摘要: 以铁皮石斛与霍山石斛的正、反交F1代共63株为试验材料，利用SSR标记鉴定杂种真实性。结果表明，在21对石斛基因组引物中，筛选出双亲多态性引物3对，多态性引物占比为14.3%。用此3对引物可鉴定出铁皮石斛×霍山石斛杂交苗中25株真杂种，比例为78.1%，可鉴定出霍山石斛×铁皮石斛杂交苗中28株真杂种，比例为90.3%。Abstract: The authenticity of hybrids created by reciprocal crossing between Dendrobium officinale and D. huoshanense was not always apparent. To resolve the confusion, this study applied SSR markers to differentiate them among 63 F1 generation of the hybrids. Three out of 21 pairs of the SSR primers were found to have polymorphic bands, i.e., 14.3% of all, in the parental lines. By using these 3 pairs of primers, 25 out of 32 known (D. officinale×D. huoshanense) hybrids were correctly identified rendering a positive identification rate of 78.1%; while, 28 out of 31 known (D. huoshanense×D. officinale) hybrids were positively identified with a rate of 90.3%.
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Key words:
- Dendrobium officinale /
- Dendrobium huoshanense /
- reciprocal cross /
- SSR /
- hybrid identification
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图 1 引物DM199对霍山石斛×铁皮石斛杂种苗扩增结果
注：M为Mark; ♀为霍山石斛; ♂为铁皮石斛; 1~32为杂交实生苗。图 2同。
Figure 1. Amplification of primer DM199 in F1 (D. huoshanense×D. officinale) hybrid
图 2 引物DM186对铁皮石斛×霍山石斛杂种苗扩增结果
Figure 2. Amplification of primer DM199 in F1 (D. officinale×D. huoshanense)hybrid
表 1 用于SSR标记的引物序列
Table 1. Sequences of SSR primers
引物名称 上游引物
(5′-3′)下游引物
(5′-3′)目标片段长度
/bpDR31 AGAGGGAGAGTGCAAGAG CGCTATTTCCATCCCTCC 219~230 OA07 CCTATCCGAGGAGAACCATAA AAGCTTTGAGATTCTTTTGTGACT 160~174 OA08 AGGCAAAATATAACATACCTCAAT AATCAAGCCATTTATCTCCTCT 166~180 OA12 GCATTCTTTTGCCTAATTCAGGAA TCCACCCTTTCATCCAAATACTTC 163~287 OA15 ACAGCGTTAACATAAACCATAAGC CTGCCCGCAGATTCAGC 221~277 OA18 GGAACGGAGAAGATTAAGACAACC TGCCCTCACATGCCGTATT 179~217 OA20 CATATATTAGCCACTTCACTCTC ATGTCCACCTCCCTAAAATAGTA 222~266 OA24 GAGCAACGGGAGGGATAGAGATAT ACCTCTGTCTCCCTCTTGTCCATC 313~351 OA25 GGAAGGGCCTAAGTGGATG GCGTACCATGCTTAACATTCA 139~181 S122 GTGACTCGAGCCTTGGAATACG ACGCCGGTGAAAGAAGAAGAG 187~205 S130 CTCATGCATAAATTTAGGGTAGA ACAACACGAACAAGTAGTCATC 310~328 DM2 GAGTCGTAAGAGGCGAGTTGT AATGGATGGTATCTATGTCCGTAT 276~310 DM3 CTCCGGCGCTAGCTGTTGC TCACTTGCGGATGGGGAGC 178~200 DM88 AGCATTTTGAGATGGGATGATC ATTGTCCTCGCCGATATGAGTA 190~230 DM81 CTCCAATACCGATATGCTG TCGGCTACAGGTAAGTGG 100~115 DM123 ATAGTGGGATAAAGGCTTG ATCAGTATCCACAACATTTA 180~210 DM137 CTGACTGAGGTGCAGAGGTTTG CCTGATGATGAGTATGAAGAGCC 130~160 DM178 TCCTCCAGCTTAACACCATCA CGCCACCCTACACTAAGAAAA 290~310 DM186 GCCTTCTACAGCACGGGTCT GGAATCTGAAACCAGGAGGC 180~280 DM198 AAAAGCACTCAAAGACAAAATCAA GATGAGTGAGGGATGGGTGC 210~270 DM199 GTGTCTGCCCGAGTAAAAGC AGCTCACGGTTACCAGGTCT 216~235 
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表 2 可扩增具有父本特征SSR引物
Table 2. SSR markers with special bands from male parent
杂交组合 引物 总株数 具有父本特征的株数 真杂种率/% 霍山石斛铁×皮石斛 DM178 32 14 43.8 Dendrobium huoshanense×Dendrobium officinale DM186 32 12 37.5 DM199 32 23 71.9 小计 32 25 78.1 铁皮石斛×霍山石斛 DM178 31 15 48.4 Dendrobium officinale×Dendrobium huoshanense DM186 31 12 38.7 DM199 31 23 74.2 小计 31 28 90.3
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