Establishment and Validation of Allometric Growth Models for Tachypleus tridentatus
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摘要: 为研究室温条件下中国鲎早期幼鲎的生长发育情况，于2014-2016年开展了中国鲎人工育苗及其早期幼鲎的培育研究，测定1~6龄期中国鲎幼鲎湿重、头胸部长、头胸部宽、腹部长、腹部宽、剑尾长和全长等生长指标，利用回归分析法获得了1~5龄期中国鲎幂函数回归方程，同时对湿重、头胸部长、头胸部宽、腹部长、腹部宽、剑尾长和全长等生长指标进行对数处理，获得了线性回归方程。除腹部长与头胸部宽回归方程的决定系数R2值为0.875外，其他均大于0.900，显著性均小于0.01，说明获得的回归方程拟合度较高。1~5龄期中国鲎湿重、剑尾长、全长与头胸部宽呈正生长关系，腹部宽与头胸部宽呈等速生长关系，头胸部长、腹部长和头胸部宽呈负生长关系。利用2015年人工育苗新获得的1龄期和2龄期幼鲎测定值对异速生长方程的拟合性进行了校验，同时利用新蜕壳发育成的6龄期幼鲎的测定值对异速生长方程的外推测能力进行了校验，校验结果表明：本研究获得的异速生长方程具有很好的拟合性和外推测性。Abstract: Growth of the early juvenile Tachypleus tridentatus was studied. At room temperature, T. tridentatus were artificially bred and cultivated from 2014 till 2016.The growth indices, including wet body weight, prosomal length and width, opisthosoma length and width as well as telson and whole lengths, of the fish were measured to establish power function models for the T. tridentatus of 1st to 5th instar age by regression analysis. The converted logarithmic growth indices were used to obtain linear regression equations, which showed a correlation coefficient, R2, for all except that of opisthosoma length vs. prosomal width, was greater than 0.900 at P < 0.01. The wet body weight and telson and whole lengths were positively allometric with the prosomal width; while the opisthosoma width, isometric with the prosomal width; and, the prosomal and opisthosoma lengths, negatively allometric with the prosomal width. Subsequently, separately measured data on T. tridentatus of 1st to 5th instar age as well as those of 6th instar age were entered the equations for validation. The results indicated all models fitted well with data and were highly extrapolatable.
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Keywords:
- Tachypleus tridentatus /
- allometric growth /
- regression analysis
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0. 引言
【研究意义】蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质。蜂蜜含有200多种物质[1]，水和糖类所占比例较大，维生素、氨基酸、酶、多酚和黄酮类物质等含量虽低，却是重要的生物功能活性成分[2, 3]。蜂蜜的组成与其植物种类和地理来源[4]、加工方式[5]、储存条件等有关，并对其品质、风味及生物活性起决定作用[6]。除抗氧化[7]、抗菌[8]、抗炎等作用外，一些含有特定有效成分的植物花蜜酿成的蜂蜜，往往具有独特的药用价值[9]。麦卢卡蜂蜜（Manuka honey）是世界范围内特种蜂蜜研究的典型代表，来源于新西兰桃金娘科（Myrtaceae Juss.）的麦卢卡树。它具有天然抗菌活性物质甲基乙二醛（Methylglyoxal，MGO）[10]，并表现出了强大的抗菌和抗氧化能力，是临床中被用于清除感染、促进创伤愈合的医用级蜂蜜[11]。因此，特种蜂蜜通常来自于单一的天然药用植物，具有采集难、产量低、品质优、价格高的特点，区别于洋槐、枣花等常见蜂蜜而备受消费者青睐。因此，对特种蜂蜜的生物活性进行研究具有重要意义。【前人研究进展】特种蜂蜜的生物活性及质量控制已受到广泛关注，诸多学者进行了研究。Wang等[12]研究表明夏枯草蜂蜜（Prunella honey）在急性结肠炎大鼠模型中抑制结肠病理变化，具有胃肠道保护活性；红花蜂蜜（Safflower honey）提取物被报道可通过调节NF-κB信号通路实现体外抗炎活性[13]，特征标志性物质红花素A的发现为红花蜂蜜鉴定作出贡献[14]。此外，抗氧化和抗菌活性的研究仍是热点。众所周知，氧化应激会导致细胞和组织的损伤，并与许多疾病的发生发展相关，如癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等[15, 16]。抗生素滥用导致的“超级细菌”问题也给公共卫生和医疗带来了巨大挑战[17]。大量研究表明蜂蜜可以清除自由基并减少氧化应激[18]，维持机体健康，其广谱抗菌活性[19]也可以作为应对微生物的耐药性一种方法。例如，荞麦蜂蜜（Buckwheat honey）对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）展现出与麦卢卡蜂蜜相当的体外抗菌活性，且具有更高的抗氧化能力[20]；临床试验证明了蜂蜜可以杀死耐药菌株，并使被试皮肤表面的细菌定殖减少[21]。蜂蜜还可以与抗生素共同使用，发挥协同作用，恢复微生物对抗生素的敏感性[22]。【本研究切入点】中国蜜源植物资源丰富。据统计，蜜源植物种植面积达0.3亿hm2，有近万种已被利用[23]。许多特种蜂蜜的功能活性尚未被报道，已有报道则多聚焦于单一花蜜的功能活性，鲜少有研究进行多样品对比分析。【拟解决的关键问题】本研究收集了来自全国12个省的不同植物来源的特种蜂蜜共计33种，对其理化指标和抗氧化、抗菌活性进行检测分析，以期找到具有优异生物活性的中国特种蜂蜜，为蜂蜜在医学和保健领域的应用提供科学依据。
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 样品与试剂
33种不同植物来源蜂蜜样品取自中国12个省、市、自治区，委托各地蜂农在盛花期的中间阶段进行收样，蜂蜜来源为单一植物，样品邮寄至实验室后在−20 ℃冰箱内避光保存，详见表1。
表 1 蜂蜜样品信息Table 1. Information on honey samples样品名称
Sample name植物来源
Plant origin地理来源
Geographical origin采样时间
Sampling time板栗蜜 板栗 Castanea mollissima Blume 浙江 2022年 柽柳蜜 柽柳 Tamarix chinensis Lour . 西藏 2020年 鹅掌柴蜜 鹅掌柴 Schefflera octophylla (Linn.) Frodin 湖北 2021年 枸杞蜜 枸杞 Lycium chinense Miller 西藏 2020年 红柳蜜 多枝柽柳 Tamarix ramosissima Ledeb. 新疆 2018年 黄芪蜜 黄芪 Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge 甘肃 2020年 黄芩蜜 黄芩 Scutellaria baicalensis Georgi 甘肃 2020年 茴香蜜 茴香 Foeniculum vulgare Mill. 甘肃 2020年 火炭母蜜 火炭母 Persicaria chinensis (L.) H. Gross 重庆 2021年 藿香蜜 藿香 Agastache rugosa (Fisch. & C. A. Mey.) Kuntze 重庆 2021年 九龙藤蜜 龙须藤 Phanera championii Benth. 广西 2021年 桔梗蜜 桔梗 Platycodon grandiflorus (Jacq.) A. DC. 安徽 2020年 咖啡蜜 咖啡树 Coffea arabica 云南 2021年 柯树蜜 柯树 Lithocarpus glaber (Thunb.) Nakai 浙江 2021年 苦丁茶蜜 大叶冬青 Ilex latifolia Thunb. 浙江 2021年 狼牙刺蜜 白刺花 Sophora davidii Kom. ex Pavol. 西藏 2021年 罗布麻蜜 罗布麻 Apocynum venetum L. 新疆 2020年 米团蜜 米团花 Leucosceptrum canum Sm. 云南 2021年 木通蜜 木通 Akebia quinata (Houtt.) Decne. 重庆 2021年 枇杷蜜 枇杷 Eriobotrya japonica (Thunb.) Lindl. 浙江 2021年 苹果蜜 苹果 Malus pumila Mill. 甘肃 2020年 蒲公英蜜 蒲公英 Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz. 新疆 2019年 沙枣蜜 沙枣 Elaeagnus angustifolia L. 新疆 2020年 苕子蜜 苕子Vicia dasycarpa Ten. 云南 2021年 石榴蜜 石榴 Punica granatum L. 安徽 2020年 五倍子蜜 盐肤木 Rhus chinensis Mill. 重庆 2021年 夏枯草蜜 夏枯草 Prunella vulgaris L. 河南 2019年 玄参蜜 玄参 Scrophularia ningpoensis Hemsl. 重庆 2021年 薰衣草蜜 薰衣草 Lavandula angustifolia Mill. 新疆 2020年 野桂花蜜 野桂花 Osmanthus yunnanensis (Franch.) P. S. Green 江西 2021年 野黄柏蜜 川黄檗 Phellodendron chinense Schneid. 重庆 2019年 益母草蜜 益母草 Leonurus japonicus Houtt. 云南 2019年 益智花蜜 益智 Alpinia oxyphylla Miq. 广东 2019年 主要试剂：福林酚购自上海麦克林生化科技有限公司；1,1-二苯基-2-苦基肼（1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl radical, DPPH）、水溶性维生素E（Trolox）购自默克生命科学技术有限公司；总抗氧化能力检测试剂盒（FRAP法）购自上海碧云天生物技术有限公司；没食子酸、槲皮素、过氧化氢酶购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；胰蛋白胨大豆肉汤培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基购自北京索莱宝科技有限公司；金黄色葡萄球菌（S. aureus ATCC 29213）、大肠杆菌（Escherichia coli ATCC
25922 ）购自上海北诺生物科技有限公司；碳酸钠、无水乙醇、苯酚等其他化学试剂购自国药集团化学试剂有限公司。1.1.2 仪器与设备
Synergy HTX多功能酶标仪，美国伯腾仪器有限公司； SW-CJ-1FD型单人单面净化工作台超净台，上海沪净医疗器械有限公司；恒温振荡器，上海博迅实业有限公司；UV-2550 岛津分光光度计，日本岛津有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1 基本理化指标
采用SN/T 0852-2012规定的方法对蜂蜜水分、色度值、淀粉酶值进行测定；采用GB 5009.8—2016规定的方法对蜂蜜中果糖、葡萄糖的含量进行测定，并计算果葡比；采用GB/T 18932.18—2003规定的方法对蜂蜜中5-羟甲基糠醛（5-Hydroxymethylfurfural, HMF）的含量进行测定。采用GB/T 18932.15—2003规定的方法对蜂蜜电导率进行测定。
1.2.2 总酚含量
采用福林酚（Folin-Ciocalteu）法对蜂蜜样品总酚含量进行测定，参考Wilczynska的方法[24]并作适当修改。配置2 mg·mL−1没食子酸溶液，按照梯度进行稀释用以制作标准曲线。将50 μL 0.2 mol·L−1福林酚溶液与10 μL 0.2 g·mL−1蜂蜜样品溶液混合均匀，静置5 min后加入40 μL 0.075 g·mL−1 碳酸钠溶液和100 μL蒸馏水。避光反应2 h后在760 nm波长下测定吸光度，结果以每克蜂蜜中没食子酸当量（Gallic acid equivalent, GAE）表示，单位为µg·g−1。
1.2.3 抗氧化能力测定
（1）总抗氧化能力测定（铁离子还原/抗氧化能力法，Ferric ion reducing antioxidant power assay）。使用总抗氧化能力检测试剂盒（FRAP法）对蜂蜜样品抗氧化能力进行检测，配制不同浓度梯度FeSO4溶液制作标准曲线。取180 μL FRAP工作液（现配现用）与20 μL 0.2 g·mL−1蜂蜜样品溶液混合，在37 ℃培养箱中孵育5 min，使用酶标仪在593 nm波长下测定吸光度。蜂蜜样品的总抗氧化能力以每克蜂蜜中FeSO4当量（FeSO4 equivalent, FE）进行表示，单位为mmol·g−1。
（2）DPPH自由基清除能力测定。参考Bueno-Costa的方法[25]并作适当修改。取100 μL 0.2 g·mL−1蜂蜜样品溶液与100 μL 0.08 mg·mL−1 DPPH乙醇溶液（现配现用）混合，记作A1；100 μL蜂蜜样品溶液与100 μL无水乙醇混合，记作A0；100 μL DPPH工作液与100 μL蒸馏水混合，记作A；室温下避光反应30 min，使用酶标仪在517 nm波长下测定吸光度。配制不同浓度梯度Trolox溶液制作标准曲线，蜂蜜样品的DPPH自由基清除能力以每千克蜂蜜中Trolox当量（Trolox equivalent, TE）进行表示，单位为mmol·kg−1。
DPPH自由基清除率计算公式为：
清除率/%=(1−A0−A1A)×100 1.2.4 抗菌能力测定
（1）总抗菌能力测定。采用琼脂扩散法对蜂蜜样品抗大肠杆菌及金黄色葡萄球菌能力进行测定[26]。使用胰蛋白胨大豆肉汤培养基对冷冻保存的菌种进行活化培养，摇床过夜后测定吸光度，稀释至1×107 CFU·mL−1备用。取胰蛋白胨大豆琼脂培养基倒平板，待其冷却凝固后涂布菌悬液，并用直径8 mm打孔器在培养基上打孔。制备50%（m/V）蜂蜜样品溶液、50%（m/V）蜂蜜样品＋H2O2酶溶液，分别取100 μL加入孔中，并设置10%苯酚溶液阳性对照及蒸馏水阴性对照，置于37 ℃恒温培养箱中培养（金黄色葡萄球菌16 h；大肠杆菌12 h），最后使用游标卡尺测量抑菌圈直径大小。
（2）最小抑菌浓度（Minimal inhibit concentration, MIC）测定。采用肉汤微量稀释法对蜂蜜样品最小抑菌浓度进行测定，参考Jahan[27]的方法并稍作修改。使用胰蛋白胨大豆肉汤培养基制备浓度分别为50%、25%、20%、12.5%、10%、6.25%、5%、3.125%、2.5%、1.25%（m/V）的蜂蜜样品溶液，预稀释菌悬液浓度为1×107 CFU·mL−1。将被测蜂蜜溶液与菌悬液按照9∶1混合，设置无蜂蜜有菌阳性对照和无菌有蜂蜜阴性对照，置于37 ℃恒温培养箱中培养（金黄色葡萄球菌16 h；大肠杆菌12 h）。蜂蜜抑制微生物生长的最低浓度即为 MIC。
（3）最小杀菌浓度（Minimum bactericidal concentration, MBC）测定。最小抑菌浓度测定试验后，取无明显微生物生长的不同蜂蜜浓度菌液20 μL ，滴加在琼脂培养基上，在37 ℃下培养24 h，没有菌落生长的最低浓度为MBC。
1.3 数据处理
所有蜂蜜样品试验均设置3次重复，结果以平均值±标准差（Mean±SD）表示。蜂蜜样品之间的差异性分析采用Tukey检验进行（P＜0.01）。各项指标之间的相关性通过 Pearson 检验得到，在P＜0.01水平上使用双尾检验评估显著性。
2. 结果与分析
2.1 特种蜂蜜理化指标分析
33种蜂蜜样品的基本理化参数见表2。根据行业标准GH/T 18796-2012，除部分特殊蜂蜜外，一级品含水量应低于20%，二级品低于24%。蜂蜜含水量与环境、季节、酿造时间、储存条件等有关[28]。本研究中样品含水量在15.98%～23.96%，属于合格范畴。蜂蜜的颜色是除了滋味和香气之外指示植物来源的特征之一[29]，大量研究表明蜂蜜的颜色与其中的酚类物质含量呈正相关，且深色蜂蜜具有更好的抗氧化活性[30]。本研究中米团蜜的颜色最深，呈接近黑色的暗褐色；狼牙刺蜜则基本呈水白色，色度值仅为4.00 mm。果糖、葡萄糖和蔗糖是蜂蜜中最主要的3种糖，相比于单一糖类摄入具有更高的吸收利用率[31]。蜂蜜的果葡比越高，其升糖指数越低。5-羟甲基糠醛由蜂蜜储存或加工过程中的美拉德反应产生[32]，并与生产季节、运输条件、植物来源等因素有关，国家标准规定其含量应低于40 mg·kg−1。淀粉酶值也可以用于判定蜂蜜的新鲜度，除荔枝（Litchi chinensis Sonn.）、龙眼（Dimocarpus longan Lour.）、柑橘（Citrus reticulata Blanco ）和鹅掌柴蜂蜜天然含量较低外，其他应高于4 mL·g−1·h−1。以上两项指标在本研究33种蜂蜜样品中均符合相关标准规定。
表 2 不同特种蜂蜜样品理化参数Table 2. Physicochemical parameters of honey样品
Sample水分
Hydration/%色度值
Chrominance value/
mm果葡比
Fructoglucose
ratio5-羟甲基糠醛
5-hydroxymethylfurfural/
(mg·kg−1)淀粉酶值
Amylase value/
(mL·g−1·h−1)电导率
Conductivity/
(μs·cm−1)板栗蜜 16.97±0.09 150.00±0.77 1.00±0.00 16.86±0.08 4.13±0.68 676.00±9.64 柽柳蜜 20.95±0.18 38.00±0.00 1.15±0.02 0.63±0.03 40.00±2.01 647.30±5.42 鹅掌柴蜜 20.63±0.10 23.00±0.00 1.02±0.00 0.33±0.03 10.00±0.79 207.60±4.17 枸杞蜜 18.41±0.08 22.00±0.00 1.17±0.00 0.38±0.01 30.00±1.47 284.00±2.35 红柳蜜 17.62±0.18 42.00±0.00 1.05±0.00 11.42±0.05 6.67±0.06 1067.00 ±5.50黄芪蜜 18.41±0.18 25.00±0.00 1.10±0.01 0.44±0.05 42.86±1.51 323.20±2.49 黄芩蜜 19.19±0.03 22.00±0.00 1.13±0.00 0.51±0.03 33.33±1.17 278.10±0.77 茴香蜜 19.11±0.08 88.00±0.00 1.57±0.00 0.94±0.03 50.00±2.01 587.30±0.35 火炭母蜜 23.96±0.04 71.00±1.41 1.18±0.00 0.92±0.04 30.00±1.69 587.40±1.37 藿香蜜 20.28±0.11 67.00±1.41 1.44±0.01 4.10±0.16 37.5±0.85 374.00±0.28 九龙藤蜜 21.41±0.06 64.00±1.15 1.68±0.01 13.36±0.03 6.98±0.61 402.00±0.21 桔梗蜜 23.89±0.28 31.00±0.00 1.14±0.04 1.51±0.03 17.65±1.36 336.10±4.11 咖啡蜜 15.98±0.16 28.00±0.00 1.12±0.00 5.42±0.01 11.11±0.08 225.80±1.58 柯树蜜 21.14±0.01 75.00±2.83 1.23±0.00 1.23±0.01 8.57±0.94 940.00±3.82 苦丁茶蜜 19.11±0.08 83.00±1.41 1.58±0.01 8.71±0.03 6.32±0.22 758.80±3.28 狼牙刺蜜 17.23±0.15 4.00±0.00 1.13±0.01 0.60±0.04 33.33±1.87 141.20±1.14 罗布麻蜜 20.75±0.12 38.00±0.00 0.96±0.00 5.23±0.01 20.00±0.50 865.60±5.57 米团蜜 19.15±0.00 150.00±2.08 1.27±0.02 2.68±0.02 16.60±2.16 1722.00 ±6.49木通蜜 19.34±0.31 32.00±0.00 1.00±0.01 0.34±0.03 9.52±1.40 219.00±1.38 枇杷蜜 22.27±0.36 19.00±0.00 1.12±0.01 0.48±0.04 9.38±0.64 237.80±4.42 苹果蜜 18.08±0.22 72.00±0.00 1.08±0.00 0.69±0.01 23.08±0.93 252.90±2.21 蒲公英蜜 16.65±0.17 34.00±1.73 1.17±0.00 1.05±0.01 14.29±0.12 314.40±0.86 沙枣蜜 21.06±0.09 37.00±0.00 1.04±0.00 2.03±0.03 25.00±1.32 320.30±2.71 苕子蜜 19.34±0.28 11.00±0.00 1.10±0.01 2.80±0.05 23.00±2.19 179.40±0.42 石榴蜜 22.04±0.04 20.00±0.00 1.24±0.00 0.40±0.01 30.00±1.34 245.40±3.49 五倍子蜜 23.73±0.03 41.00±0.00 0.92±0.01 0.84±0.03 4.76±0.03 315.60±2.46 夏枯草蜜 23.91±0.04 48.00±0.71 1.58±0.00 1.51±0.03 25.00±1.05 269.80±1.78 玄参蜜 20.67±0.01 79.00±0.00 1.19±0.00 0.70±0.03 9.09±0.45 487.70±0.28 薰衣草蜜 17.62±0.06 9.00±0.00 1.14±0.01 1.68±0.01 23.08±2.01 153.70±0.87 野桂花蜜 21.41±0.18 31.00±0.00 1.13±0.00 0.53±0.03 8.57±0.11 302.80±0.42 野黄柏蜜 19.97±0.07 30.00±0.00 0.99±0.00 2.39±0.02 4.23±0.48 299.40±3.16 益母草蜜 17.55±0.11 75.00±2.65 1.10±0.00 1.26±0.03 60.00±2.31 826.10±4.64 益智花蜜 19.11±0.05 70.00±0.71 1.10±0.01 6.18±0.02 8.57±1.04 503.20±2.21 2.2 特种蜂蜜抗氧化活性分析
2.2.1 抗氧化活性检测
蜂蜜样品的抗氧化能力指标测定结果如表3所示。33种蜂蜜中，总酚含量排名前8位的由高至低依次为米团蜜、板栗蜜、茴香蜜、咖啡蜜、藿香蜜、苦丁茶蜜、益母草蜜、夏枯草蜜，3种蜂蜜的总酚含量高于麦卢卡蜂蜜（UMF 20＋，835.40 µg·g−1）[33]。米团蜜总酚含量为（
1346.09 ±108.6） µg·g−1，而狼牙刺蜜与之相差近十倍，在所有样品中含量最低，仅为（125.07±11.39） µg·g−1，表明不同植物来源蜂蜜中总酚含量差异很大。表 3 蜂蜜样品的抗氧化活性Table 3. Antioxidative activities of honeys样品名称
Sample name总酚含量
Total phenolic content/
(µg·g−1)总抗氧化能力（FRAP法）
Total antioxidant capacity/
(mmol·g−1)DPPH自由基清除能力
DPPH radical scavenging capacity/
(mmol·kg−1)板栗蜜 1050.16 ±213.67ab7.53±1.42a 2.73±0.95b 柽柳蜜 357.84±131.10fghi 1.69±0.66a 0.67±0.05ef 鹅掌柴蜜 323.94±25.32hi 7.65±0.42fg 0.26±0.04ef 枸杞蜜 183.16±8.23fghi 0.94±0.33cdefg 0.27±0.04def 红柳蜜 315.08±47.77fghi 1.65±0.30cdefg 1.61±0.15c 黄芪蜜 287.13±78.18ghi 1.18±0.35efg 0.30±0.02ef 黄芩蜜 275.58±91.77ghi 0.88±0.32fg 0.27±0.02ef 茴香蜜 982.35±231.54bc 3.03±0.68cde 1.08±0.06cd 火炭母蜜 327.85±62.54fghi 1.47±0.26defg 0.53±0.08def 藿香蜜 676.83±170.85cde 3.37±0.91bcd 0.69±0.33def 九龙藤蜜 406.29±18.48efghi 1.98±0.71cdefg 0.69±0.06def 桔梗蜜 353.32±34.21fghi 0.94±0.32fg 0.28±0.02ef 咖啡蜜 722.86±134.11cd 0.83±0.21fg 0.33±0.05ef 柯树蜜 413.71±24.46efghi 2.27±0.72cdefg 0.70±0.04def 苦丁茶蜜 616.91±22.68def 2.35±0.17cdefg 0.86±0.04de 狼牙刺蜜 125.07±11.39i 0.69±0.38fg 0.16±0.03ef 罗布麻蜜 332.50±53.77fghi 2.02±0.41cdefg 1.64±0.19c 米团蜜 1346.09 ±108.60a9.07±1.36a 4.66±0.35a 木通蜜 263.84±21.02ghi 5.06±0.68b 0.23±0.04ef 枇杷蜜 152.58±48.86hi 0.46±0.19g 0.18±0.04ef 苹果蜜 340.77±50.61fghi 1.92±0.16cdefg 0.55±0.06def 蒲公英蜜 242.99±36.30ghi 1.00±0.21fg 0.31±0.05ef 沙枣蜜 256.78±40.65ghi 1.19±0.34efg 0.37±0.09def 苕子蜜 147.26±47.40i 0.63±0.44g 0.19±0.04ef 石榴蜜 234.48±43.94ghi 0.72±0.28fg 0.23±0.03ef 五倍子蜜 164.90±20.37hi 0.82±0.28fg 0.30±0.04ef 夏枯草蜜 519.92±49.41defg 3.55±0.26bc 0.75±0.07def 玄参蜜 294.20±29.87ghi 1.59±0.41cdefg 0.48±0.10def 薰衣草蜜 347.18±82.62fghi 0.58±0.44g 0.12±0.02f 野桂花蜜 252.93±3.70ghi 1.45±0.36defg 0.36±0.06def 野黄柏蜜 255.80±30.11ghi 1.14±0.18efg 0.31±0.03ef 益母草蜜 538.64±45.45defg 2.68±0.44cdef 0.88±0.05de 益智花蜜 457.65±40.73defgh 1.87±0.34cdefg 0.65±0.08def 同列数据后不同小写字母表示在0.01水平差异显著。表5同。
Data with different lowercase letters on same column indicate significant difference at 0.01 level. Same for Table 5.蜂蜜成分复杂，抗氧化活性物质种类丰富。由于不同物质发挥作用的功能基团不同。一种方法不可能检测到所有具有抗氧化活性的成分[34]，因此本研究选择了FRAP总抗氧化能力检测和DPPH自由基清除能力检测两种方法进行评估，当量值越大表示抗氧化能力越强。FRAP总抗氧化能力排名前8位的依次为米团蜜＞鹅掌柴蜜＞板栗蜜＞木通蜜＞夏枯草蜜＞藿香蜜＞茴香蜜＞益母草蜜；DPPH自由基清除能力排名前8位的依次为米团蜜＞板栗蜜＞罗布麻蜜＞红柳蜜＞茴香蜜＞藿香蜜＞益母草蜜＞苦丁茶蜜；薰衣草蜜、枇杷蜜、狼牙刺蜜和苕子蜜的总抗氧化能力及自由基清除能力均较差。
2.2.2 抗氧化指标相关性分析
蜂蜜样品3项抗氧化活性指标之间的相关性分析结果如表4所示，结果表明，总酚含量、FRAP总抗氧化能力与DPPH自由基清除能力两两之间均呈极显著正相关（P＜0.01）。Gheldof等[35]的研究表明，蜂蜜的抗氧化能力似乎更多取决于组分中化合物的丰度，而非特定化合物，总酚含量和抗氧化能力之间存在很强的相关性这一结论也多次得到证实[36]。虽然没有单一的测定方法可以准确地反映所有的抗氧化剂，但所采用的两种检测方法得出了良好的结果相关性数值（r=0.712，P＜0.01）。
表 4 抗氧化指标的相关性分析Table 4. Correlation between antioxidant indexes指标
Index总酚含量
Total phenolic contentFRAP总
抗氧化能力
Total antioxidant capacityDPPH自由基
清除能力
DPPH radical scavenging
capacity总酚含量
Total phenolic content1.000 0.695** 0.801** FRAP总抗氧化能力
Total antioxidant capacity0.695** 1.000 0.712** DPPH自由基清除能力
DPPH radical scavenging capacity0.801** 0.712** 1.000 **表示在0.01级别（双尾）相关性显著。表6同。
** indicates significance at 0.01 level (two-tailed). Same for Table 6.2.3 特种蜂蜜抗菌活性分析
2.3.1 总抗菌能力分析
33种蜂蜜样品对金黄色葡萄球菌（S. aureus）和大肠杆菌（E. coli）的琼脂扩散试验产生的抑菌圈直径见表5。有19种蜂蜜表现出对金黄色葡萄球菌的抗菌活性，而仅有4种蜂蜜表现出对大肠杆菌的抗菌活性。这表明不同类型蜂蜜的抗菌效力存在相当大的差异，且多数对革兰氏阳性菌株具有更强的作用。Goslinski等的研究[37]也得到了相同结论。茴香蜜、藿香蜜和苹果蜜对两种菌均产生了抑菌圈，与麦卢卡蜂蜜的表现相同[38]。在19种对金黄色葡萄球菌表现出抗菌活性的蜂蜜中，黄芪蜜、黄芩蜜、茴香蜜、藿香蜜、苹果蜜、益母草蜜的抗菌能力相较于大部分蜂蜜好，茴香蜜的抑菌圈直径为（25.51±1.04）mm，效果最佳。4种对大肠杆菌表现出抗菌活性的蜂蜜产生的抑菌圈大小无显著差异。
表 5 蜂蜜样品对微生物的抑菌圈直径（琼脂扩散法）Table 5. Microbial inhibition zone of honeys (diameters on agar diffusion medium)样品名称
Sample name抑菌圈直径
Inhibition zone/mm金黄色葡萄球菌
S. aureus大肠杆菌
E. coli阳性对照（10%苯酚） 30.30±1.07a 29.99±0.62a 阴性对照（蒸馏水） — — 柽柳蜜 14.74±0.98fg nd 枸杞蜜 — 11.35±0.43b 黄芪蜜 24.33±1.21bc — 黄芩蜜 20.04±0.59de — 茴香蜜 25.51±1.04b 12.82±0.48b 火炭母蜜 14.47±1.36fg — 藿香蜜 23.74±1.06bcd 12.83±0.97b 九龙藤蜜 12.89±0.44g — 罗布麻蜜 13.66±1.73ef — 苹果蜜 21.06±1.18cde 10.51±0.70b 蒲公英蜜 15.07±1.16fg — 沙枣蜜 14.44±1.27fg — 苕子蜜 19.32±1.13e — 石榴蜜 17.47±2.02ef — 五倍子蜜 14.72±1.11fg — 薰衣草蜜 13.14±1.16g — 野桂花蜜 13.53±0.37fg — 野黄柏蜜 13.44±0.59fg — 益母草蜜 24.69±0.4bc — 益智花蜜 12.82±1.36g — “—”表示未检出＞8 mm的抑菌圈。
"—" indicates absence of inhibition zone larger than 8 mm in diameter.为了探究蜂蜜中发挥抗菌活性的主要成分，配制加入过氧化氢酶的50%蜂蜜样品溶液并进行相同的琼脂扩散试验。然而所有试验组均未出现抑菌圈，表明33个特种蜂蜜样品的主要抗菌活性成分为过氧化氢。
2.3.2 抗菌活性相关性分析
为了探究两种生物活性之间的相互关系，对蜂蜜的抗菌活性指标（抑菌圈大小）和抗氧化活性指标进行了相关性分析。结果（表6）表明，蜂蜜对不同菌种的抗菌活性表现为相关性不显著，而抗菌活性与抗氧化活性的各项指标之间也无显著相关性。
表 6 抗菌活性与抗氧化活性之间的相关性Table 6. Correlation between antibacterial and antioxidative activities of honey指标
Index对金黄色葡萄球菌
抗菌能力
Antibacterial
activity against
S. aureus对大肠杆菌
抗菌能力
Antibacterial
activity against
E. coli总酚含量
Total phenolic content−0.089 0.213 FRAP总抗氧化能力
Total antioxidant capacity−0.306 0.023 DPPH自由基清除能力
DPPH radical scavenging capacity−0.212 −0.023 对金黄色葡萄球菌的抗菌能力
Antibacterial activity against S. sureus1 0.321 对大肠杆菌的抗菌能力
Antibacterial activity against E. coil0.321 1 2.3.3 MIC和MBC分析
为了进一步探究各蜂蜜的抗菌能力，本研究对在琼脂扩散试验中产生抑菌圈的蜂蜜进行了最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定。在液体环境下，抗菌物质与微生物的直接接触使微量肉汤稀释法准确性较高[39]，适合用作对比分析。对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑菌效果的蜂蜜样品的MIC和MBC区间见表7。在对金黄色葡萄球菌具有抑制作用的蜂蜜中，茴香蜜的MIC和MBC区间均为1.25%～2.50%，这是本研究的最低稀释区间，实际值可能更低，表明茴香蜜具有优良的抗菌性能，在排序中依旧位列第一。其他蜂蜜样品的排序略有调整，但未发生明显变化。益智花蜜的MIC和MBC区间分别为12.50%～20.00%和25.00%～50.00%，与九龙藤蜜的结果一致，在19种样品中位列最末。茴香蜜对大肠杆菌的抑菌能力弱于其对金黄色葡萄球菌，且相对于枸杞蜜（6.25%～10.00%）需要更高浓度才能完全杀死大肠杆菌。藿香蜜对金黄色葡萄球菌的抗菌活性弱于茴香蜜，但二者对大肠杆菌的MIC和MBC区间相同，并优于苹果蜜。
表 7 蜂蜜样品对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC和MBCTable 7. MIC and MBC ranges of honeys against S. aureus and E. coli样品名称
Sample
name金黄色葡萄球菌
S. aureus大肠杆菌
E. coli最小抑菌浓度
MIC/%最小杀菌浓度
MBC/%最小抑菌浓度
MIC/%最小杀菌浓度
MBC/%枸杞蜜 — — 6.25～10.00 6.25～10.00 茴香蜜 1.25～2.50 1.25～2.50 6.25～10.00 10.00～12.50 益母草蜜 1.25～2.50 2.50～3.13 — — 藿香蜜 3.13～5.00 2.50～3.13 6.25～10.00 10.00～12.50 苹果蜜 3.13～5.00 3.13～5.00 10.00～12.50 12.50～20.00 黄芪蜜 3.13～5.00 3.13～5.00 柽柳蜜 3.13～5.00 3.13～5.00 — — 苕子蜜 5.00～6.25 5.00～6.25 — — 黄芩蜜 6.25～10.00 6.25～10.00 — — 石榴蜜 6.25～10.00 6.25～10.00 — — 沙枣蜜 6.25～10.00 6.25～10.00 — — 蒲公英蜜 6.25～10.00 10.00～12.50 — 罗布麻蜜 6.25～10.00 12.50～20.00 — — 野桂花蜜 6.25～10.00 12.50～20.00 — — 野黄柏蜜 6.25～10.00 12.50～20.00 — — 五倍子蜜 10.00～12.50 12.50～20.00 — — 薰衣草蜜 12.50～20.00 12.50～20.00 — — 火炭母蜜 12.50～20.00 20.00～25.00 — — 九龙藤蜜 12.50～20.00 25.00～50.00 — — 益智花蜜 12.50～20.00 25.00～50.00 — — 3. 讨论
近年来，研究人员愈加关注特种蜂蜜的生物活性，抗氧化和抗菌能力被认为是决定蜂蜜品质和价值的重要因素。蜂蜜的抗氧化活性主要是酚类化合物发挥作用，它们可以清除自由基，并通过供氢、单线态氧猝灭、金属离子螯合、参与级联反应等多种机制减少氧化应激发生[18]。有多项研究已经证实了板栗蜂蜜的高抗氧化能力[6, 34, 40]。本研究结果显示，鹅掌柴蜜（7.65±0.42 mmol·g−1）的总抗氧化能力与板栗蜜（7.53±1.42 mmol·g−1）相近，差异不显著；米团蜜的总抗氧化能力（9.07±1.36 mmol·g−1）、DPPH自由基清除能力（4.66±0.35 mmol·kg−1）均高于板栗蜜（7.53±1.42 mmol·g−1、2.73±0.95 mmol·kg−1），自由基清除能力差异显著；在Bodó等[40]的研究中，茴香蜜的抗氧化活性强于板栗蜜，与本研究结果并不一致，这可能与蜂蜜样品的地理来源有关。此外，在各项抗氧化指标强相关的前提下，本研究中也有新的发现。鹅掌柴蜜的总酚含量和DPPH自由基清除能力在33种蜂蜜的排序中分别位列18和25位，然而它的FRAP总抗氧化能力则位列第2位；与之相反的是，薰衣草蜂蜜的总酚含量位列14位，其两项抗氧化活性指标却均为倒数。事实上，酚类物质化学结构的差异（芳香化合物中的OH和CH3O基团的数量、位置和侧链的结构）对酚酸的抗氧化活性起着关键作用[41]，总酚含量本身并不足以确定抗氧化活性。不同蜂蜜在酚类物质种类或数量上的差异往往被用作区分植物来源的常用指标之一。此外，非酚成分如酶、维生素、有机酸、蛋白质等发挥作用也会影响蜂蜜的抗氧化活性表现[30]。
蜂蜜的抗菌活性与其高酸度（低pH）、高渗透性和抗菌成分的存在密切相关[4, 42]，其机制是阻止细胞分裂和膜、壁形成，从而起到抑菌作用[43]。因此，蜂蜜对革兰氏阳性和阴性菌的抑制效果存在差异。过氧化氢是葡萄糖氧化酶对葡萄糖进行酶促氧化反应的副产物，是蜂蜜抗菌活性的主要作用成分[44]，已被广泛报道。由于酶活性受温度影响较大，蜂蜜热处理加工、运输储存不当等因素均会影响葡萄糖氧化酶水平[27]，从而导致抗菌性能下降。有研究表明，蜂蜜非过氧化氢抗菌成分中最重要的是酚酮类物质[45]，许多酚类成分如对羟基苯甲酸、咖啡酸、对香豆酸[46]和芦丁等也被证实具有抗菌活性。Pelaez-Acero等[47]的研究表明部分蜂蜜的酚酮类化合物与抗菌活性之间存在显著相关性，然而，Fyfe等[48]发现总酚含量或抗氧化能力与抗菌活性无关，这与本研究结果一致，可能是由于总酚含量低而不足以发挥抗菌作用。有研究对过氧化氢酶处理藿香蜜前后的MIC值进行了对比，处理后的细菌抑制作用仅下降了10%，表明过氧化氢具有一定的抗菌贡献，更揭示了其他抗菌物质的存在[49]。在本研究中，藿香蜜被过氧化氢酶处理后表现为抗菌活性消失，这或与其地理来源有关：土壤类型会影响蜂蜜的物质构成，并对矿物元素的种类和含量起决定作用[50]。实际上，并非所有麦卢卡蜂蜜都具有抗菌活性，只有在特定地区，特别是新西兰北岛东开普省生产的麦卢卡蜂蜜才被报道有高抗菌活性[51]，可以解释藿香蜜不同的抗菌成分表现。本研究预试验中也进行了相同植物不同地理来源蜂蜜的检测，同植物来源样品表现出的理化性质和生物活性基本相似，但仍存在一定差异。不同地理来源特种蜂蜜的差异研究可以作为下一步的方向，有潜力发掘出具有地区标识的优质蜂蜜。
4. 结论
本研究中33种不同植物来源特种蜂蜜的基本理化指标均符合国家标准规定。所有蜂蜜均表现出了抗氧化活性，其中米团蜂蜜的总酚含量及抗氧化能力在所有样品之中位列第一，板栗蜜、茴香蜜和藿香蜜也表现较优。总酚含量、FRAP总抗氧化能力与DPPH自由基清除能力两两之间均呈极显著正相关。在抗菌活性检测的琼脂扩散试验中，19种蜂蜜表现出了对金黄色葡萄球菌的抗菌活性，仅有4种蜂蜜表现出了对大肠杆菌的抗菌活性；茴香蜜、藿香蜜和苹果蜜对两种菌均产生了抑菌圈。茴香蜜对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC值达到了最低稀释区间，枸杞蜜对大肠杆菌表现出更强的抗菌活性。蜂蜜对不同菌种的抗菌活性表现、抗菌活性与抗氧化活性的各项指标之间无显著相关性。上述性能优良的几种特种蜂蜜可以根据其理化性质、生物活性等相关参数进行表征，为质量控制提供理论支持；也可进一步开发利用，推动蜂蜜在医学和保健领域的应用。
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图 1 1~5龄期中国鲎湿重与头胸部宽及其对数关系
Figure 1. Correlation between wet body weight and prosomal width from 1st to 5th instar age of T. tridentatus in arithmetic and logarithmic functions
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图 2 1~5龄期中国鲎头胸部长与头胸部宽及其对数关系
Figure 2. Correlation between prosomal length and width from 1st to 5th instar age of T. tridentatus in arithmetic and logarithmic functions
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图 3 1~5龄期中国鲎腹部长与头胸部宽及其对数关系
Figure 3. Correlation between opisthosoma length and prosomal width from 1st to 5th instar age of T. tridentatus in arithmetic and logarithmic functions
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图 4 1~5龄期中国鲎腹部宽与头胸部宽及其对数关系
Figure 4. Correlation between opisthosoma width and prosomal width from 1st to 5th instar age of T. tridentatus in arithmetic and logarithmic functions
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图 5 1~5龄期中国鲎剑尾长与头胸部宽及其对数关系
Figure 5. Correlation between telson length and prosomal width from 1st to 5th instar age of T. tridentatus in arithmetic and logarithmic functions
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图 6 1~5龄期中国鲎全长与头胸部宽及其对数关系
Figure 6. Correlation between whole length and prosomal width from 1st to 5th instar age of T. tridentatus in arithmetic and logarithmic functions
表 1 1~5龄期中国鲎各项生长指标测定值(平均值±标准差)
Table 1 Body size (mean±SD) of T. tridentatus from 1st to 5th instar age
龄期 湿重
/g头胸部长
/mm头胸部宽
/mm腹部长
/mm腹部宽
/mm剑尾长
/mm全长
/mm1 0.023±0.002 3.41±0.19 6.13±0.23 3.21±0.17 4.98±0.25 - 6.61±0.25 2 0.038±0.003 4.53±0.26 8.02±0.31 3.17±0.15 6.53±0.27 2.56±0.29 10.27±0.47 3 0.096±0.011 5.37±0.57 10.62±0.62 4.61±0.41 8.51±0.51 6.90±0.71 16.86±1.19 4 0.222±0.029 7.58±0.61 15.44±0.65 5.93±0.70 12.65±0.62 12.16±0.94 25.51±1.78 5 0.476±0.038 9.43±1.59 19.98±0.77 7.76±1.35 15.20±0.95 17.51±1.09 34.98±1.71 注：“-”表示无测量值，因1龄期中国鲎无剑尾。 
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表 2 中国鲎1~5龄期异速生长方程
Table 2 Allometric growth models for T. tridentatus from 1st to 5th instar age
项目 幂函数曲线方程 线性方程* 决定系数R2 显著分析 湿重与头胸部宽 y=0.000205x2.567 y=-3.687+2.567x 0.986 ＜0.01 头胸部长与头胸部宽 y=0.759x0.838 y=-0.120+0.838x 0.932 ＜0.01 腹部长与头胸部宽 y=0.729x0.769 y=-0.137+0.769x 0.875 ＜0.01 腹部宽与头胸部宽 y=0.858x0.973 y=-0.067+0.973x 0.991 ＜0.01 剑尾长与头胸部宽 y=0.041x2.067 y=-1.385+2.067x 0.933 ＜0.01 全长与头胸部宽 y=0.547x1.407 y=-0.262+1.407x 0.982 ＜0.01 注：“*”为各生长指标测量值转换成对数(lg)值后的线性回归分析。
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表 3 1龄期、2龄期和6龄期中国鲎测量值及预测区间
Table 3 Measured value and prediction interval of 1st, 2nd and 6th instar age of T. tridentatus
龄期 头胸部宽测定值/mm 湿重/g 头胸部长/mm 腹部长/mm 腹部宽/mm 剑尾长/mm 全长/mm 测定值 预测区间 测定值 预测区间 测定值 预测区间 测定值 预测区间 测定值 预测区间 测定值 预测区间 1 5.71 0.023 0.014~0.024 3.72 2.78~3.97 3.04 2.23~3.53 4.90 4.13~5.29 - - 6.76 5.49~7.46 5.78 0.022 0.015~0.025 3.38 2.81~4.00 3.08 2.25~3.56 5.04 4.18~5.35 - - 6.44 5.58~7.59 5.80 0.019 0.015~0.025 3.31 2.82~4.02 2.79 2.25~3.57 4.86 4.19~5.37 - - 6.09 5.61~7.63 6.21 0.023 0.018~0.030 3.84 2.98~4.25 3.32 2.37~3.76 5.01 4.48~5.74 - - 7.15 6.17~8.39 5.63 0.022 0.014~0.023 3.37 2.75~3.92 3.13 2.20~3.49 4.82 4.07~5.22 - - 6.50 5.38~7.32 5.89 0.022 0.015~0.026 3.35 2.86~4.07 2.91 2.28~3.61 4.86 4.25~5.45 - - 6.27 5.73~7.79 5.54 0.022 0.013~0.022 3.77 2.72~3.87 2.90 2.17~3.45 4.70 4.01~5.13 - - 6.65 5.26~7.15 5.68 0.023 0.014~0.024 3.49 2.77~3.95 3.16 2.22~3.52 4.84 4.11~5.26 - - 6.62 5.45~7.41 5.58 0.021 0.013~0.023 3.35 2.73~3.89 2.95 2.19~3.47 4.65 4.04~5.17 - - 6.29 5.31~7.23 5.78 0.022 0.015~0.025 3.53 2.81~4.00 3.03 2.25~3.56 4.82 4.18~5.35 - - 6.57 5.58~7.59 2 7.97 0.044 0.033~0.056 4.45 3.66~5.21 3.38 2.87~4.54 6.72 5.71~7.31 2.88 2.03~4.26 10.67 8.76~11.89 8.62 0.045 0.041~0.068 4.69 3.91~5.55 3.31 3.04~4.81 6.75 6.16~7.88 2.91 2.39~5.01 10.94 9.77~13.27 8.43 0.050 0.038~0.064 4.71 3.84~5.45 3.58 2.99~4.73 7.12 6.03~7.72 3.15 2.28~4.78 11.42 9.47~12.86 7.64 0.040 0.030~0.050 4.63 3.54~5.03 3.88 2.78~4.40 6.26 5.48~7.01 2.27 1.85~3.90 10.59 8.25~11.21 7.91 0.035 0.033~0.055 4.32 3.64~5.18 3.13 2.85~4.51 6.34 5.67~7.25 2.32 1.99~4.19 9.75 8.66~11.77 8.15 0.042 0.035~0.059 4.54 3.73~5.31 3.41 2.92~4.62 6.55 5.84~7.47 2.41 2.12~4.46 10.36 9.03~12.27 8.40 0.046 0.038~0.064 4.87 3.83~5.44 3.32 2.98~4.72 6.54 6.01~7.69 2.93 2.26~4.75 11.09 9.42~12.80 8.30 0.044 0.037~0.062 4.72 3.79~5.39 3.46 2.96~4.68 7.02 5.94~7.60 2.92 2.21~4.63 11.10 9.27~12.59 6.94 0.032 0.023~0.039 4.11 3.27~4.65 3.15 2.58~4.09 6.02 4.99~6.39 2.34 1.51~3.19 9.63 7.21~9.80 7.63 0.038 0.030~0.050 4.46 3.54~5.03 3.36 2.77~4.39 6.36 5.47~7.00 2.68 1.85~3.89 10.54 8.24~11.19 6 26.40 1.055 0.713~1.198 13.60 9.87~14.31 10.02 7.17~11.63 20.00 19.20~22.42 24.40 23.51~51.14 47.50 46.22~63.83 23.50 0.769 0.529~0.887 11.20 8.95~12.96 9.91 6.55~10.61 19.52 17.15~20.02 22.80 18.59~40.26 43.60 39.30~54.20 注：预测区间为95%置信区间。“-”表示无数据，因1龄期中国鲎无剑尾。
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[1] 廖永岩, 李晓梅.中国海域鲎资源现状及保护策略[J].资源科学, 2001, 23(2):53-57. DOI: 10.3321/j.issn:1007-7588.2001.02.012 [2] 李琼珍.中国鲎保育工作研究进展[J].生物学杂志, 2010, 27(4):71-74. DOI: 10.3969/j.issn.1008-9632.2010.04.071 [3] 洪水根.中国鲎生物学研究[M].厦门:厦门大学出版社, 2011. [4] CHEN Y, LAU C W, CHEUNG S G, et al. Enhanced growth of juvenile Tachypleus tridentatus (Chelicerata:Xiphosura) in the laboratory:a step towards population restocking for conservation of the species[J]. Aquatic biology, 2010(11):37-46.
[5] SEKIGUCHI K, SESHIMO H, SUGITA H. Post-embryonic development of the horseshoe crab[J]. Biological Bulletin, 1988, 174:337-345. DOI: 10.2307/1541959
[6] CHATTERJI A, ABIDI SAH. The indian horseshoe crab-a living fossil[J]. Journal of Indian Ocean Studies, 1993(1):43-48. http://www.researchgate.net/publication/27669521_The_Indian_horseshoe_crab_A_living_fossil
[7] 廖永岩, 洪水根.中国鲎(Tachypleus tridentatus)人工授精育苗的初步研究[J].湛江海洋大学学报, 1997, 17(2):23-26. http://www.wanfangdata.com.cn/details/detail.do?_type=perio&id=QK199700474624 [8] 洪水根, 李祺福, 陈美华, 等.中国鲎胚胎发育研究[J].厦门大学学报(自然科学版), 2002, 41(2):239-246. DOI: 10.3321/j.issn:0438-0479.2002.02.026 [9] 王德祥, 苏永全, 王军, 等.几种因子对中国鲎胚胎和幼体发育的影响[J].中国水产科学, 2001, 8(3):10-14. DOI: 10.3321/j.issn:1005-8737.2001.03.003 [10] 程鹏, 周爱娜, 霍爱娜, 等.中国鲎人工培育的幼体对不同环境适应性的研究[J].厦门大学学报(自然科学版), 2006, 45(3):404-408. DOI: 10.3321/j.issn:0438-0479.2006.03.025 [11] HU M, WANG Y, CHEUNG S G, et al. Comparison of different frozen natural foods on survival and growth of juvenile Chinese horseshoe crab Tachypleus tridentatus, (Leach, 1819):implications on laboratory culture[J]. Aquaculture Research, 2013, 44(4):567-573. DOI: 10.1111/are.2013.44.issue-4
[12] 李春萍, 李刚, 肖春旺.异速生长关系在陆地生态系统生物量估测中的应用[J].世界科技研究与发展, 2007, 29(2):51-57. DOI: 10.3969/j.issn.1006-6055.2007.02.010 [13] 张瑞昌, 岳明.异速生长模型及其应用概述[J].生物学通报, 2011, 46(8):6-9. DOI: 10.3969/j.issn.0006-3193.2011.08.002 [14] 韩文轩, 方精云.幂指数异速生长机制模型综述[J].植物生态学报, 2008, 32(4):951-960. DOI: 10.3773/j.issn.1005-264x.2008.04.025 [15] SHUSTER J C N. Study these, the story of the horseshoe crab[J]. Staff Reporter, Wilmington Public Schools, Delaware, 1958(10):4-5.
[16] CHEE H Y. Morphometric Variations and Population Size of Horseshoe Crab (T.gigas) in Teluk Senangin, Perak, Malaysia[J]. American Journal of Emergency Medicine, 2015, 3(4):379. http://www.researchgate.net/publication/280088007_Morphometric_Variations_and_Population_Size_of_Horseshoe_Crab_Tgigas_in_Teluk_Senangin_Perak_Malaysia
[17] LEE C N, MORTON B. Experimentally derived estimates of growth by juvenile Tachypleus tridentatus and Carcinoscorpius rotundicauda (Xiphosura) from nursery beaches in Hong Kong[J]. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 2005, 318:39-49. DOI: 10.1016/j.jembe.2004.12.010
[18] 刘伟茹.广西北部湾地区圆尾鲎与中国鲎生物学研究[D].南宁: 广西大学, 2014. http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10593-1014378841.htm [19] ZADEH S S, CHRISTIANUS A, SAAD C R, et al. Comparisons in Prosomal Width and Body Weight Among Early Instar Stages of Malaysian Horseshoe Crabs, Carcinoscorpius rotundicauda, and Tachypleus gigas, in the Laboratory[M]. Biology and Conservation of Horseshoe Crabs. Springer US, 2009: 267-274.
[20] 魏小平, 赵长明, 王根轩, 等.民勤荒漠绿洲过渡带优势植物地上和地下生物量的估测模型[J].植物生态学报, 2005, 29(6):878-883. DOI: 10.3321/j.issn:1005-264X.2005.06.002 [21] CHIYENDA S S, KOZAK A. Some comments on choosing regression modes for biomass prediction equations[J]. Forestry Chronicle, 1982, 58:203-204. http://europepmc.org/abstract/AGR/IND83031249
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