Correlation between Single Nucleotide Polymorphism in 5' Regulation Region of IL-8 and Coccidiosis-Resistance of Jinghai Yellow Chicken
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摘要:目的 研究白介素8（IL-8）基因5′调控区单核苷酸突变对鸡柔嫩艾美耳球虫（E. tenella）抗性指标的影响。方法 本试验利用DNA直接测序技术，检测京海黄鸡IL-8基因5′调控区单核苷酸多态性（SNPs），并对5′调控区的SNPs突变前后的转录因子进行预测，然后分析SNPs与柔嫩艾美耳球虫抗性指标的关联性。结果 测序结果表明：IL-8基因5′调控区共检测到3个突变位点（T-550C、G-398T和T-360C），均形成了3种基因型，杂合度在0.436~0.471，PIC值在0.25~0.50，均属于中度多态，且3个突变位点均处于哈代-温伯格平衡状态。生物信息学分析表明：3个突变位点均改变了其原有的转录因子结合位点。关联分析显示：T-550C突变位点的TC型个体的IL-8表达量与TT型差异显著，TC型GSH-PX、CAT、IL-2、IL-6、IFN-γ指标均高于其他2种基因型，但差异不显著。G-398T突变位点的TT型个体SOD活性和GT型个体CAT活性均显著高于GG型；TT型个体NO含量与GG型差异极显著，与GT型差异显著；TT型IL-2表达量显著高于GT型。T-360C突变位点的TT型和TC型个体SOD活性与CC型差异极显著或差异显著；TT型和TC型个体的NO含量均显著高于CC型；TT型个体的IL-2、IL-8表达量均显著高于CC型。结论 G-398T和T-360C突变位点的TT型个体球虫抗性优于其他基因型个体，T-550C突变位点的杂合型个体球虫抗性优于纯合型个体，表明IL-8基因5′调控区的突变对球虫抗性指标有显著的调控作用，可作为球虫病抗性鸡新品种或新品系的育种参考依据。Abstract:Objective Correlation between the single nucleotide polymorphism (SNPs) in the 5' regulation region of IL-8 and the disease resistance to Eimeria tenella of chickens was studied.Method Direct DNA sequencing was performed to determine SNPs in IL-8 gene of Jinghai yellow chicken. Predicted transcription factors before and after mutation were analyzed to correlate between SNPs and coccidiosis-resistance of the birds.Result There were 3 SNPs at the mutation sites of T-550C, G-398T and T-360C detected in the target region that formed CT-, TT- and GG-genotypes with heterozygous degrees between 0.436 and 0.471 and PIC between 0.25 and 0.5. In a Hardy-Weinberg equilibrium state, SNPs were moderately polymorphic. A bioinformatics analysis confirmed that the original transcription factor binding sites in the genes had all been altered after the mutation. The expression of IL-8 of TC-genotype mutated at T-550C was significantly higher than that of TT-genotype. The coccidiosis-resistance indicators including GSH-PX, CAT, IL-2, IL-6 and IFN-γ in TC-genotype were higher than that in the other two genotypes, though not significantly. In genotypes mutated at G-398T, the SOD activity of TT-genotype and the CAT activity of GT-genotype were significantly higher than those of GG-genotype; the NO content of TT-genotype extremely significantly different from that of GG-genotype and significantly different from that of GT-genotype; and, the IL-2 expression of TT-genotype significantly higher than that of GT-genotype. Whereas, in the genotypes mutated at T-360C, the SOD activities of TT- and TC-genotypes were extremely significantly different or significantly different from that of CC-genotype; the NO contents of TT- and TC-genotypes significantly higher than that of the CC genotype; and, the IL-2
and IL-8 expressions of the TT genotype significantly higher than those of CC-genotypes. Conclusion It appeared that the TT-genotype with mutated G-398T or T-360C site would be more resistant to the parasitic attack by E. tenella than the other genotypes, and that hybrids of the genotypes carrying T-550C mutation would be more resistant than the homozygous counterparts. Thus, the significant regulation function of the polymorphism in the 5' regulation region of IL-8 gene could conceivably be targeted for breeding coccidiosis-resistant chickens. -
0. 引言
【研究意义】当前养猪生产面临着减少氮排放量和蛋白质饲料资源紧缺的挑战。低蛋白质饲粮通过降低饲粮蛋白质水平及平衡必需氨基酸来满足猪对蛋白质的需求，使用该类饲粮也是减少规模化猪场氮排放与节约蛋白质饲料资源的主要技术途径。【前人研究进展】诸多研究表明将饲粮粗蛋白质水平降低2～4个百分点，并补足主要的必需氨基酸，不会影响肥育猪的生长性能[1-3]。但是，降低饲粮蛋白质水平可能会影响肌肉蛋白质的沉积，导致肉品质下降[4-5]。研究表明，商品猪肌肉氨基酸含量和组成是评价肉品营养价值的重要指标[6]，肉类的食用品质、鲜味与肌肉中的氨基酸、脂肪酸含量密切相关[7-8]，肌内脂肪酸尤其是多不饱和脂肪酸是香味的重要前体物质[9]。【本研究切入点】目前低蛋白质饲粮在育肥猪上的研究大部分是针对其生长性能、胴体品质及血液生化指标等[2-3,10]，有关低蛋白质氨基酸平衡饲粮对猪肌肉氨基酸、脂肪酸组成与含量影响的研究比较少见。【拟解决的关键问题】本研究在商业化养猪生产背景下研究低蛋白质饲粮对杜长大肥育猪肌肉氨基酸和脂肪酸组成和含量的影响，旨在为低蛋白质饲粮的实际应用提供更多理论依据。
1. 材料与方法
1.1 试验动物的选择、分组和管理
2020年9月在某猪场开展饲养试验。选用90头体况相近、平均体重为（30.50±2.5）kg的杜长大三元杂交猪，采用性别相同、体重相近的原则分成3个处理组，每个处理组设置3个重复，每个重复（栏）含10头猪，其中公猪和母猪各5头，分组后每栏猪进行逐头称重，上耳牌标示。试验进行43 d的预试期，预饲期间所有猪只均饲喂同一种预饲饲粮，在平均个体重达（59.50±3.60）kg时开始试验期，试验期为40 d。试验猪饲养于一座双列式猪舍，水泥地面，每个猪栏约12 m2、配备1个圆形铸铁料桶和1个乳头式饮水器，自由采食粉料，自由饮水，栏舍每天清洁卫生2次，专人负责。
1.2 试验设计与试验饲粮
采用完全随机试验设计。组1为对照组，饲粮粗蛋白质（CP）水平为16.58%，组2、组3饲粮CP水平分别下调为14.58%和12.53%。试验饲粮参照美国NRC（2012）版猪饲养标准配制[11]，部分营养参数根据福建省规模养猪实际情况进行调整。低蛋白质饲粮按照标准可消化赖氨酸（Lys）：标准可消化蛋氨酸+胱氨酸（Met+Cys）∶标准可消化苏氨酸（Thr）∶标准可消化色氨酸（Trp）为100∶60∶65∶20的比例来补充合成的赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸，各组其他营养素含量均相同，能满足肥育猪的营养需要，试验饲粮配方和营养水平见表1。
表 1 饲粮组成及营养水平Table 1. Nutritional composition of pig forages项目
Items预饲饲粮
preparatory
feeding
diet1组
（CK）
Group
12组
Group
23组
Group
3饲粮组成 Diet composition 玉米 Corn/% 68.00 61.30 66.00 71.20 麦皮 Wheat bran/% 0.00 8.50 10.00 10.80 豆粕Soybean meal/% 28.00 24.00 18.00 12.00 磷酸氢钙 CaHPO4/% 1.10 0.66 0.72 0.77 石粉 CaCO3/% 0.60 0.99 1.01 1.00 沸石粉 Zeolite power/% 0.80 3.15 2.63 2.29 食盐 NaCl/% 0.40 0.40 0.40 0.40 预混料1） Premix 1.00 1.00 1.00 1.00 78%赖氨酸盐酸盐 Lys. HCl/% 0.10 0.00 0.16 0.32 98.5%苏氨酸 Thr/% 0.00 0.00 0.02 0.09 99%蛋氨酸 Met/% 0.00 0.00 0.03 0.08 98.5%色氨酸 Try/% 0.00 0.00 0.00 0.03 营养水平2） Nutrient levels DE/（kcal·kg−1） 13.28 12.78 12.78 12.78 CP/% 17.45 16.58 14.58 12.53 Lys/% 0.93 0.82 0.82 0.82 DLys/% 0.81 0.71 0.71 0.71 DMet/% 0.25 0.22 0.23 0.25 (DMet+DCys)/% 0.49 0.45 0.43 0.43 DThr/% 0.57 0.52 0.46 0.46 DTrp/% 0.17 0.16 0.14 0.14 注：1）为预混料向每千克试验饲粮提供:VA 6000IU，VD 1500IU，VE 35.00 mg，VK3 1.50 mg，VB1 2.50 mg，VB2 8.00 mg，D-泛酸 13.50 mg，烟酸 26.00 mg，VB6 2.00 mg，叶酸 0.25 mg，VB12 0.02 mg，生物素 0.25 mg，氯化胆碱 350.00 mg，Fe 80.00 mg，Cu 20.00 mg，Zn 80.00 mg，Mn 20.00 mg，I 0.30 mg，Se 0.25 mg；2）上表中试验饲粮CP为实际测定值，其他营养指标是根据美国研究委员会（NRC，2012）中的饲料原料可消化系数进行计算所得。
Notes: ①The premix provided the following per kg of diets: VA 6000 IU, VD 1500IU, VE 35.00 mg, VK3 1.50 mg, VB1 2.50 mg; VB2 8.00 mg, D-pantothenic acid 13.50 mg, Nicotinic acid 26.00 mg, VB6 2.00 mg, Folic acid 0.25 mg, VB120.02 mg, Biotin 0.25 mg, Choline chloride 350.00 mg, Fe 80.00 mg, Cu 20.00 mg, Zn 80.00 mg, Mn 20.00 mg, I 0.30 mg, Se 0.25 mg；② CP was a measured value, while the others were calculated values according to the digestible coefficient of feed ingredients of the American Research Council (NRC, 2012).1.3 测定指标与方法
1.3.1 生长性能
在预饲期及试验期结束前猪只禁喂16 h（只给饮水）后于第2天上午进行逐头称重，称量每个重复（栏）剩余饲料量，统计试验期各栏喂料量，计算试验猪平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。
1.3.2 屠宰试验
试验个体称重后，每个重复选取2头猪（1公1母），空腹16 h，屠宰方法依据NY/T 822—2004种猪生产性能测定技术规范进行屠宰[12]。
1.3.3 样品采集
屠宰后，取左侧胴体倒数第二、三肋处背最长肌500 g，−20 ℃ 保存，待测肌肉氨基酸和脂肪酸含量。
1.3.4 肌肉氨基酸、脂肪酸组成及含量测定
肌肉样品解冻后，修剪去除结缔组织和脂肪组织，捣碎，制成风干样。风干样品在110 ℃下用6 moL·L−1盐酸水解24 h，再在0 ℃条件下用过甲酸氧化16 h后，经盐酸水解24 h，定容，采用氨基酸自动分析仪（日本日立 L-8800型）测定肌肉氨基酸，上机前根据样品浓度调整稀释倍数。肌肉脂肪酸测定参照国家标准GB/T 17376—2008和ISO 5509：2000推荐的酯交换法[13]，采用气相色谱仪（日本岛津 GC-2010型）测定肌肉脂肪酸。本试验测定的氨基酸酸、脂肪酸组成及含量为风干样样品。
1.4 数据统计分析
所有试验数据采用Excel软件处理后，采用统计软件（SPSS 13.0）进行方差分析，用Duncan法进行差异显著性检验并进行多重比较。
2. 结果与分析
2.1 低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪生长性能的影响
低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪生产性能的影响结果见表2。由表2可知，2组日增重分别比1、2组提高3.34%、2.48%，3组比1组提高0.84%，组间差异均不显著（P＞0.05）；料重比、日均采食量组间差异不显著（P＞0.05）。说明低蛋白质饲粮不影响肥育猪的生长性能。
表 2 低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪生产性能的影响Table 2. Effect of reduced-protein-lysine-added diet on growth of pigs at finishing stage项目Item 1组
Group 12组
Group 23组
Group 3初始体重 Initial body weight/kg 59.50±2.05 59.78±2.06 59.12±2.00 结束体重 Final body weight/kg 95.11±4.15 96.58±3.98 95.03±3.34 平均日增重 Average daily gain/g 890.25±71.28 920.00±67.38 897.75±60.43 日均采食量 Average daily feed intake/kg 2.72±0.20 2.78±0.16 2.70±0.23 料重比 Feed gain ratio 3.06±0.18 3.02±0.19 3.01±0.22 2.2 低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪背最长肌氨基酸含量的影响
低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪背最长肌氨基酸含量的影响结果见表3。从表3可知，猪背最长肌氨基酸含量组间差异不显著（P＞0.05），必需氨基酸含量（Lys、Met、Thr、Val、Ile、Leu、Phe）、总氨基酸含量及鲜味氨基酸（Lys、Val、Ile、Leu、Asp、Ser、Glu、Gly、Ala、Arg、Pro）含量组间差异均不显著（P＞0.05）。说明与高蛋白质饲粮相比，低蛋白质氨基酸平衡饲粮不影响猪肉氨基酸的含量和组成。
表 3 低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪背最长肌氨基酸含量的影响Table 3. Effect of reduced-protein-lysine-added diet on amino acid content and composition in longissimus muscles of finisher pigs 单位：mg·mL−1项目
Item1组
Group 12组
Group 23组
Group 3赖氨酸 Lys 1.90±0.07 1.71±0.13 1.90±0.15 蛋氨酸 Me 0.56±0.03 0.53±0.05 0.56±0.06 苏氨酸 Thr 0.98±0.03 0.90±0.08 0.98±0.08 亮氨酸 Leu 1.77±0.07 1.63±0.11 1.76±0.13 异亮氨酸 Ile 1.04±0.04 0.95±0.07 1.02±0.09 苯丙氨酸 Phe 1.22±0.06 0.79±0.23 1.06±0.24 缬氨酸 Val 1.15±0.04 1.06±0.06 1.14±0.08 组氨酸 His 1.04±0.05 0.92±0.10 1.00±0.07 精氨酸 Arg 1.44±0.07 1.34±0.12 1.45±0.04 天冬氨酸 Asp 2.04±0.07 1.88±0.14 2.03±0.13 丝氨酸 Ser 0.83±0.03 0.77±0.07 0.84±0.04 谷氨酸 Glu 2.69±0.12 2.50±0.22 2.72±0.21 甘氨酸 Gly 0.99±0.02 1.00±0.05 1.05±0.10 丙氨酸 Ala 1.25±0.04 1.17±0.08 1.28±0.06 胱氨酸 Cys 0.14±0.02 0.14±0.02 0.16±0.03 酪氨酸 Tyr 0.76±0.04 0.68±0.06 0.74±0.05 脯氨酸 Pro 0.81±0.01 0.79±0.04 0.84±0.03 总氨基酸 Total amino acid 20.62±0.75 18.74±1.31 20.54±1.01 鲜味氨基酸 Umami amino acid 15.91±0.55 14.79±1.05 16.05±0.81 必需氨基酸 Essential amino acid 8.62±0.32 7.56±0.50 8.53±0.69 鲜味氨基酸占总氨基酸比例
Ratio of umami amino acids to
total amino acids77.18±0.16 78.92±0.59 78.14±0.85 必需氨基酸占总氨基酸比例
Ratio of essential amino acids to
total amino acids41.83±0.15 40.37±0.60 41.49±1.38 2.3 低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪背最长肌脂肪酸酸含量的影响
低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪背最长肌脂肪酸含量的影响结果见表4。从表4可知，猪背最长肌脂肪酸含量组间差异不显著（P＞0.05），饱和脂肪酸含量、不饱和脂肪酸含量、单不饱和脂肪酸含量、多不饱和脂肪酸及脂肪酸总量组间差异均不显著（P＞0.05）。说明与高蛋白质饲粮相比，低蛋白质氨基酸平衡饲粮不影响猪肉脂肪酸组成与含量。
表 4 饲粮不同蛋白质水平对肥育猪背最长肌脂肪酸含量的影响Table 4. Effect of reduced-protein-lysine-added diet on fatty acid content and composition in longissimus muscles of finisher pigs 单位：%项目
Item1组
Group 12组
Group 23组
Group 3月桂酸 Lauric acidC12:0 0.10±0.00 0.10±0.00 0.10±0.00 豆蔻酸 Myristic acid C14:0 1.17±0.12 1.13±0.06 1.10±0.10 棕榈酸 Palmitic acidC16:0 24.80±0.46 25.17±0.91 24.60±1.23 棕榈油酸 Palmitoleic acid C16:1 2.33±0.51 2.57±0.45 2.60±0.35 硬脂酸 Stearic acidC18:0 14.57±1.07 14.60±1.15 13.33±1.50 油酸 Oleic acidC18:1 44.17±3.06 46.27±0.95 46.10±1.50 亚油酸 Linoleic acidC18:2 9.17±1.90 7.17±1.76 8.95±1.61 亚麻酸 Linolenic acidC18:3 0.23±0.06 0.17±0.06 0.13±0.06 花生酸 Arachidic acid C20:0 0.23±0.06 0.30±0.08 0.37±0.21 花生四烯酸 Arachidonic acid C20:4 1.27±0.75 0.67±0.51 0.90±0.36 花生五烯酸
Eicosapentaenonic acid C20:50.51±0.11 0.49±0.09 0.53±0.12 二十二碳五烯酸
Docosapentaenoic acid C22:50.67±0.13 0.63±0.15 0.71±0.15 脂肪酸总量 Total fatty acids 99.22±0.93 99.57±0.85 99.42±0.83 饱和脂肪酸 SFA 40.87±1.72 41.30±1.03 39.50±1.12 不饱和脂肪酸 UFA 58.35±2.12 58.27±1.94 59.92±2.06 单不饱和脂肪酸
Monounsaturated fatty acids46.50±2.37 48.84±2.45 48.70±2.09 多不饱和脂肪酸
Polyunsaturated fatty acids11.85±0.41 9.13±0.49 11.22±0.42 3. 讨论
3.1 低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪生长性能的影响
生产中配制的玉米－豆粕型饲粮在满足肥育猪蛋白质营养需要时，则饲粮中多数需氨基酸存在不同程度的过量，研究表明饲粮粗蛋白质水平降低幅度在4个百分点以内，并强化相关合成必需氨基酸的添加，不影响商品猪的生长性能[3,10,14]，本试验结果亦证明，饲粮粗蛋白质水平比对照组降低2个和4个百分点，保持可消化赖氨酸水平不变，各组间猪只的增重和料重比水平无显著差异，这与相关研究结果相同。说明按总氨基酸配制的肥育猪饲粮已造成部分氨基酸的浪费，在不影响肥育猪生长性能的前提下，饲粮粗蛋白质水平可以降低12.53%。
3.2 低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪背肌氨基酸含量的影响
研究表明，氨基酸是肉类鲜味的主要来源，氨基酸种类、含量和比例是评价猪肉质性状的重要指标[15]。Rote等[4]认为降低饲粮蛋白质水平影响肌肉蛋白质的沉积，并导致肉品质下降。张兴等[16]试验表明，前期粗饲粮蛋白质为14.53%、后期粗蛋白质为13.53%，能显著提高湘沙猪背肌丝氨酸、丙氨酸、亮氨酸、脯氨酸、甘氨酸、缬氨酸、风味氨基酸含量，有助于改善猪肉风味。左晓红等[17]试验也显示，饲粮不同蛋白质水平对大巴沙猪肌肉中氨基酸组成有一定影响。郭建凤等[18]测定了不同品种猪肌肉氨基酸组成，得出长白猪的背最长肌氨基酸总量、鲜味氨基酸含量、必需氨基酸含最、必需氨基酸占总氨基酸的比率高于杜洛克猪和大白猪。分析上述结果不同的原因，可能与试验猪的品种、试验饲粮的能量水平和氨基酸平衡性等因素有关。本研究通过测定背最长肌肌肉的氨基酸组成和含量，来分析饲粮蛋白质水平与猪肉蛋白质量与质的关系，结果表明，在对照组基础上，降低饲粮粗蛋白质水平2个和4个百分点，保持饲粮赖氨酸水平不变且平衡饲粮中重要的必需氨基酸比例，对猪肉氨基酸组成和含量均没有影响，说明降低饲粮蛋白质水平并平衡重要必需氨基酸不影响猪肉蛋白质的氨基酸组成与含量。
3.3 低蛋白质氨基酸平衡饲粮对肥育猪背肌脂肪酸含量的影响
肌肉脂肪酸组成与猪肉嫩度、多汁性和风味密切相关[19]。有研究表明饲料蛋白质对肌间脂肪的发育和沉积有影响[19]，Teye等[20]报道，低蛋白质饲粮比高蛋白质饲粮肌内脂肪含量从17 g·kg−1极显著增加到29 g·kg−1。Tous等[21]的研究也显示，降低饲粮蛋白质水平，保持赖氨酸水平不变，显著增加背最长肌肌内脂肪含量，对背最长肌单不饱和脂肪酸含量无影响。张兴等[16]试验表明，中等粗蛋白质水平饲粮（前期为14.53%、后期13.53%）能显著提高湘沙猪肌肉中亚油酸、γ-亚麻酸、二高-γ-亚麻酸、花生四烯酸、多不饱和脂肪酸含量。左晓红等[17]试验认为，除神经氨酸外，饲粮不同蛋白质水平对肌肉中脂肪酸含量的影响组间差异不显著。而汤文杰等[22]研究表明饲粮蛋白质水平对同一品种背最长肌肌内脂肪含量和脂肪酸组成无显著影响。本试验结果表明，降低饲粮蛋白质水平，维持赖氨酸水平不变且平衡饲粮中重要的必需氨基酸比例，对杜长大三元杂交猪背肌脂肪酸含量、饱和脂肪酸含量、不饱和脂肪酸含量、单不饱和脂肪酸含量、多不饱和脂肪酸含量均无影响，与相关研究结果不一致。NRC（2012）[11]指出，脂肪的沉积与猪的肌肉生长潜能和饲粮蛋白质（氨基酸）与能量之比存在一定的关系，因此，出现上述不同的研究结果，可能与本试验采用杜长大三元杂交高瘦肉率猪品种，以及氨基酸的平衡性等因素有关。
4. 结论
在本试验背景下，保持饲粮赖氨酸水平不变，并平衡饲粮中重要必需氨基酸的比例，饲粮粗蛋白质水平从16.58%降低至12.53%，对肥育猪的生长性能无影响，对背最长肌氨基酸、脂肪酸组成和含量亦无显著影响。
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图 1 IL-8基因位点位点峰图及序列比对
注：A：T-550C位点峰图比对；B：G-398T位点峰图比对；C：T-360C位点峰图比对；D：T-550C位点序列比对图；E：G-398T位点序列比对图；F：T-360C位点序列比对图
Figure 1. Peak and sequence alignments of IL-8
Note： A: T-550C peak alignment; B: G-398T peak alignment; C: T-360C peak alignment; D: T-550C sequence alignment; E: G-398T sequence alignment; F: T-360C sequence alignment.
表 1 引物序列信息
Table 1 Information on primer sequence
引物 Primer 引物序列（5′→3′）Primers sequence(5′→3′) 退火温度 Annealing temperature/℃ 长度 Length/bp P1 F: TTCCATTCGCATAAGTCATC 51 638 R: AAAGTTGATTTGGGGATACC P2 F: TGTAATTGGGAATTCAAGGGGGA 58 708 R: CCCATTTGGTGTGTGATAAGATGA P3 F: AGTCCACAGACCACAAAGCA 58 693 R: TCGCAATATAAGTTTCTGATGGCTT P4 F: AAACCAGCAACACAAAGTC 60 574 R: CATCTCAGCAAGTGCCAAG 
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表 2 IL-8基因5′调控区单核苷酸突变位点信息
Table 2 Information on SNPs in 5′ regulation region of IL-8
序号 Site number 染色体位置 Chromosome position 序列号 Serial number 单核苷酸多态性 SNP 1 51282560 rs740065165 T-550C 2 51282712 rs731947764 G-398T 3 51282750 rs16409254 T-360C 注：A：T-550C位点峰图比对；B：G-398T位点峰图比对；C：T-360C位点峰图比对；D：T-550C位点序列比对图；E：G-398T位点序列比对图；F：T-360C位点序列比对图
Note： A: T-550C peak alignment; B: G-398T peak alignment; C: T-360C peak alignment; D: T-550C sequence alignment; E: G-398T sequence alignment; F: T-360C sequence alignment.
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表 3 IL-8基因5′调控区SNPs突变前后转录因子变化预测结果
Table 3 Predicted transcription factors before and after mutation of IL-8 in 5' regulation region
突变位点
Mutation site碱基
Base转录因子
Transcription factor转录因子结合位点碱基序列
Transcription factor binding site base sequence转录因子位置
Transcription factor position−550 bp T Oct-1 GTTGCATTTG −551~−542 bp C −398 bp G C/EBPalp GAAATAAATA −398~−389 bp T Pit-1a TAAATAAATA −398~−389 bp C/EBPalp ACATAAATAA −401~−392 bp −360 bp T NF-1 AGCCAGTTAT −362~−353 bp C 注：图中下划线标注为突变碱基。
Note: The underline in the figure is the mutant base.
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表 4 IL-8基因5′调控区多态性
Table 4 SNPs in 5′ regulation region of IL-8
突变位点
Mutation site基因型
Genotype数量
Number基因型频率
Genotype frequency等位基因
Allelic gene等位基因频率
Allele frequencyχ2值
χ2 valueP值
P value杂合度 H 有效等位
基因数 Ne多态信息含量
PICT-550C TT 40 0.435 T 0.679 1.390 0.500 0.436 1.772 0.341 CC 7 0.076 C 0.321 TC 45 0.489 G-398T GG 13 0.141 G 0.380 0.023 0.990 0.471 1.892 0.360 TT 35 0.381 T 0.720 GT 44 0.478 T-360C TT 40 0.435 T 0.674 0.725 0.699 0.440 1.784 0.343 CC 8 0.087 C 0.326 TC 44 0.478 注：PIC＞0.50为高度多态；0.25＜PIC＜0.50为中度多态；PIC＜0.25为低度多态[15]。
Note: PIC＞0.50 is highly polymorphic; 0.25＜PIC＜0.50 is moderately polymorphic; PIC＜0.25 means low polymorphism[15].
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表 5 IL-8基因T-550C突变位点各基因型与鸡球虫抗性指标关联分析
Table 5 Correlation between genotypes mutated at T-550C in IL-8 and coccidiosis-resistance indicators
指标
Indices基因型 Genotype TT（40） TC（45） CC（7） 超氧化物歧化酶（SOD）/（U·mL−1） 750.63±88.37 720.62±78.91 723.95±67.57 丙二醛（MDA）/（nmol·mL−1） 3.66±0.40 3.74±1.26 4.16±1.03 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）/（U·mL−1） 151.77±16.94 152.22±17.53 150.83±22.52 过氧化氢酶（CAT）/（U·mL−1） 0.87±0.17 1.01±0.16 0.95±0.19 一氧化氮（NO）/（μmol·L−1） 52.35±5.25 A 49.62±3.79 AB 32.12±3.69 B 白介素1-β（IL-1β）/（ng·L−1） 20.54±2.00 19.75±3.04 20.22±1.19 白介素2（IL-2）/（ng·L−1） 14.78±2.66 15.82±2.04 15.18±2.69 白介素6（IL-6）/（ng·L−1） 69.93±3.55 72.40±8.64 67.81±4.29 白介素8（IL-8）/（ng·L−1） 90.87±7.63 b 119.11±10.42 a 109.06±11.76 ab 干扰素-γ（IFN-γ）/（ng·mL−1） 189.47±15.25 201.21±13.67 195.58±16.06 注：同行数据后不同大写字母表示差异极显著（P＜0.01），不同小写字母表示差异显著（P＜0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P＞0.05），表6～7同。
Note: Different uppercase letters on a same row indicate significant differences (P<0.01); different lowercase letters, significant differences (P<0.05); and, same or no letter, no significant differences (P>0.05). Same for Tables 6–7.
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表 6 IL-8基因G-398T突变位点各基因型与鸡球虫抗性指标关联分析
Table 6 Correlation between genotypes mutated at G-398T in IL-8 and coccidiosis-resistance indicators
指标
Indices基因型 Genotype GG（13） GT（44） TT（35） 超氧化物歧化酶（SOD）/（U·mL−1） 631.43±50.73 b 667.21±27.41 ab 724.97±87.91 a 丙二醛（MDA）/（nmol·mL−1） 3.66±0.40 3.63±0.39 3.19±0.73 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）/（U·mL−1） 164.04±21.41 155.20±20.63 158.58±19.50 过氧化氢酶（CAT）/（U·mL−1） 0.84±0.10 b 1.05±0.15 a 0.91±0.18 一氧化氮（NO）/（μmol·L−1） 24.18±4.26 Bab 32.67±9.88 ABb 45.89±11.63 Aa 白介素1-β（IL-1β）/（ng·L−1） 20.45±1.70 22.51±1.30 23.17±1.65 白介素2（IL-2）/（ng·L−1） 15.17±2.54 ab 13.66±1.38 b 16.51±3.10 a 白介素6（IL-6）/（ng·L−1） 65.66±6.05 71.01±7.81 68.40±7.30 白介素8（IL-8）/（ng·L−1） 94.31±9.86 104.24±7.70 105.89±13.30 干扰素-γ（IFN-γ）/（ng·mL−1） 183.25±17.99 179.94±15.83 175.99±17.26
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表 7 IL-8基因T-360C突变位点各基因型与鸡球虫抗性指标关联分析
Table 7 Correlation between genotypes mutated at T-360C in IL-8 and coccidiosis-resistance indicators
指标 Indices 基因型 Genotype TT（40） TC（44） CC（8） 超氧化物歧化酶（SOD）/（U·mL−1） 781.29±76.94 Aab 706.31±72.85 ABa 652.43±44.92 Bb 丙二醛（MDA）/（nmol·mL−1） 4.01±1.20 3.91±0.49 4.23±0.79 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）/（U·mL−1） 124.34±11.73 117.17±13.46 116.68±14.53 过氧化氢酶（CAT）/（U·mL−1） 0.77±0.16 0.86±0.30 0.74±0.14 一氧化氮（NO）/（μmol·L−1） 46.91±11.24 a 45.50±9.28 a 35.03±8.11 b 白介素1-β（IL-1β）/（ng·L−1） 20.11±1.03 20.65±1.84 21.55±2.73 白介素2（IL-2）/（ng·L−1） 15.82±2.04 a 13.82±1.84 ab 12.46±1.55 b 白介素6（IL-6）/（ng·L−1） 62.74±10.21 60.80±9.47 57.92±9.38 白介素8（IL-8）/（ng·L−1） 103.19±14.94 a 91.30±13.82 ab 83.15±13.01 b 干扰素-γ（IFN-γ）/（ng·mL−1） 163.28±13.49 b 168.75±15.29 b 193.31±16.32 a
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1. 杨敏馨. 低蛋白日粮对猪肉品质影响的研究进展. 福建畜牧兽医. 2022(06): 41-43 . 
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