Growth and Development of Leptocybe invasa as Affected by Environmental Temperature
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摘要:目的 致瘿性昆虫—桉树枝瘿姬小蜂（Leptocybe invasa）的生长发育、繁殖及分布主要受到温度的影响，而探明温度对桉树枝瘿姬小蜂生长发育的影响，可为该害虫的虫情监测和预测预报提供科学依据。方法 采用室内恒温接种、饲养的方法，测定了桉树枝瘿姬小蜂在19、22、25、28、31℃下各虫态的发育历期和发育速率，利用直线回归（图测法）、线性回归和 Logistic 回归方程分析了温度与各虫态发育速率的关系，并用直线回归方程求得各虫态发育起点温度和有效积温。结果 温度对桉树枝瘿姬小蜂卵至蛹各虫态、全世代的发育历期及成虫寿命均有显著影响，在19～31℃范围内，各虫态发育历期均随温度升高而逐渐缩短，发育速率与温度呈显著正相关。图测法直线回归方程更能准确拟合桉树枝瘿姬小蜂各虫态发育速率与温度之间的关系。桉树枝瘿姬小蜂卵、幼虫、蛹、成虫（存活）及全世代的发育起点温度分别为10.78、10.29、14.64、14.73和12.68℃，有效积温分别为86.96、588.24、92.59、104.17和712.34 d·℃，发育最适温度分别为25.68、25.65、24.58、26.42和23.84℃，发育适宜温区为12.21～35.48℃。2017—2019年，该害虫在江西赣南发生世代数理论值为4.27代，与实际观察结果一致。结论 温度是影响桉树枝瘿姬小蜂生长发育的重要因素，本研究结果可为预测该蜂的发育历期、发生区域、发生期和发生代数提供科学依据和技术支撑，尤其对该蜂成虫发生期预测预报和有效防控具有重要的指导意义。Abstract:Objective Correlations between the growth, reproduction, and distribution of Leptocybe invasa, an insect that causes galls in plants, and the surrounding temperature were studied to facilitate the monitoring and controlling the spread of the pest wasp.Method Duration and speed of each development state of the wasp were measured by inoculating and feeding the larvae indoor at 19, 22, 25, 28 and 31℃. Graphic, linear, and logistic regression analyses were applied to establish the correlations. Threshold and effective temperatures for the emergences of various stages of the insect were obtained using a linear regression model.Result Temperature was found to significantly affect not only at the stage from egg to pupa, but also the entire development and adult life of the insect. The increasing temperature hastened the insect development process. The graphic linear regression model seemed to more accurately describe their correlation than the other models. In Gannan, Jiangxi, the threshold emergence temperature of the eggs was found to be 10.78℃; that of the larva, 10.29℃; that of the pupa, 14.64℃; the adult survival threshold temperature, 14.73℃; and, the temperature for the development of an entire generation, 12.68℃. The accumulated effective temperature for the eggs was found to be 86.96℃; that for the larva, 588.24℃; that for the pupa, 92.59℃; that for the adult survival, 104.17℃; and, that for the development of an entire generation, 712.34 d·℃. And, the optimum temperature for the egg development, 25.68℃; for the larvae, 25.65℃; for the pupa, 24.58℃; for the adult survival, 26.42℃; and, for the development of an entire generation, 23.84℃ with a range between 12.21℃ and 35.48℃. The model estimated 4.27 generations of L. invasa had taken place between 2017 and 2019 which was in agreement with what was observed in the field.Conclusion Temperature was critical for the development of L. invasa. Understanding the correlation would aid in predicting the development, infestation time and area, and emerging generations of L. invasa for effective control of the pest.
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0. 引言
【研究意义】银耳（Tremella fuciformis Berk）是主产于我国的特色食药兼用真菌，富含多糖、矿物质元素等，具有抗氧化和提高人体免疫力等多种保健功效，备受消费者青睐[1-2]。银耳的产量和品质主要受栽培过程中菇蚊、螨虫、链孢霉、绿色木霉等霉菌及病虫害影响[3-4]。合理使用农药既不影响消费者健康，又能确保农作物产量[5]。但与莲雾等小宗作物类似，银耳栽培缺乏登记农药和农药最大残留限量标准以供参考[6-7]。其中，农药残留限量值（MRL）是法律允许的施用农药后农产品中农药最高残留水平，是农产品质量安全监测重要的参考依据[5]。因此，在病虫害防控时，菇农常因无法科学地使用农药而导致银耳农药残留。不仅严重影响银耳产业的发展，且对消费者的健康存有潜在威胁[5, 8]。【前人研究进展】近年来，关于银耳农药使用及质量安全的研究主要包括：农药残留检测方法[9]、农药及代谢物消解规律[10-11]、膳食暴露风险评估[12-13]、烘干工艺[2, 14]等。然而尚未见有关银耳农药残留全膳食暴露风险评估和最大残留限量值建议的研究报道。【本研究切入点】为了避免银耳产品中的农药残留引起的消费者膳食暴露健康风险，应科学开展银耳中农药残留水平监测和潜在膳食暴露风险评估。【拟解决的关键问题】银耳Tr21是我国银耳主栽品种之一，具有朵形美、耳片白、产量高、品质好等优点[3]。本文以其为试验对象，根据银耳栽培实际选择8组10种常用农药，研究其对银耳子实体生长的影响，分析农药和其代谢物残留规律并开展长期膳食和全膳食暴露风险评估，建议银耳中农药合理使用模式和农药MRL值，为完善银耳良好农业规范（GAP）栽培和消除消费者银耳膳食疑虑提供参考依据。
1. 材料与方法
1.1 材料与试剂
银耳菌株Tr21，由古田县建宏农业开发有限公司提供。供试农药信息详见表1。正己烷、乙腈等农药检测分析用有机试剂，色谱纯，购自美国赛默飞世尔科技有限公司；其他试剂为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；固相萃取填料，购自Agilent公司和Welch Material公司；农药标准品购自农业农村部环境保护科研监测所；气相色谱柱：SH-Rxi-5Sil MS（30.0 m×0.250 mm×0.25 µm），购自日本岛津公司；液相色谱柱：Phenomenex Luna C8（150 mm×2.0 mm×3.0 µm），购自美国菲罗门公司。
表 1 供试农药、剂型及其生产企业Table 1. Formulation and manufacturers of pesticides tested处理
Group农药
Pesticide生产企业
Manufacturing enterpriseA 6%（3%+3%）联苯菊酯、啶虫脒微乳剂
Bifenthrin, acetamiprid micro-emulsion青岛正道药业有限公司
Qingdao Zhengdao Pharma Co., Ltd.B 5%阿维菌素乳油
Abamectinemulsifiable concentrate山东金锐特生物科技有限公司
Shandong Jinruite Bio-technology Co., Ltd.C 30%乙酰甲胺磷乳油
Acephateemulsifiable concentrate重庆农药化工（集团）有限公司
Chongqing Pesticide Chemical Co., Ltd.D 45%咪鲜胺乳油
Prochlorazemulsifiable concentrate德国奥利恩作物保护有限公司
Germany Aolien Crop Protection Co., Ltd.E 10%吡虫啉粉剂
Imidaclopriddustpowder济南一农化工有限公司
Jinan Yinong Chemical Industry Co., Ltd.F 20%异丙威乳油
Isoprocarbemulsifiable concentrate江苏辉胜农药有限公司
Jiangsu Huisheng Pesticide Co., Ltd.G 10%（5%+5%）哒螨灵、啶虫脒微乳剂
Pyridaben, acetamiprid micro-emulsion深圳诺普信农化股份有限公司
Shenzhen Noposion International Investment Co., Ltd.H 5%（1%+4%）丁硫克百威、毒死蜱颗粒剂
Carbosulfan, chlorpyrifos granules西安瑞邦化工有限公司
Xi’an Ruibang Chemical Industry Co., Ltd.1.2 仪器与设备
气相色谱仪（GC-2010 plus）-三重四极杆质谱（TSQ8040），岛津公司；高效液相色谱仪（Agilent 1200）-三重四极杆质谱（Agilent 6460），安捷伦科技有限公司；吹氮浓缩仪（Reati-ThermⅢ HRATING/STIRRING MODMLE）, PIERCE公司；超声仪（KD-500DE），昆山市超声仪器有限公司；涡旋混合器，德国IKA公司；离心机（Anke TDL-5-A），上海安亭科学仪器厂。
1.3 试验方法
1.3.1 农药喷施试验
银耳栽培试验在古田县建宏农业开发有限公司实施，工厂化模式栽培，环境参数可控。试验共有4种农药喷施模式：原基形成时，20 d后采摘（M1）；原基形成10 d，10 d后采摘（M2）；原基形成时喷药1次，间隔5 d后第2次喷药，15 d后采摘（M3）；原基形成后10 d时喷药1次，间隔5 d后第2次喷药，5 d后采摘（M4）。农药喷施浓度为1 000、2 000、4 000 mg·L−1，喷施量为1 800 mL。试验共12个处理。每个处理含3个重复，每个重复10个菌棒，共360个菌棒。以喷施同样体积的纯净水作为空白对照。
1.3.2 银耳生长指标
喷施试验后，随机选取5个菌棒，采用游标卡尺随机测定银耳子实体直径（n=5）。数据以“Mean±SD”表示。
1.3.3 农药残留测定
每组随机选取银耳5朵，匀浆，待测。农药及其代谢物提取、分析参照GB 23200.113[15]和文献[9]。方法线性良好（R2＞0.995）、低中高3个添加水平回收率70%～110%、定量限为0.01 mg·kg−1，满足试验的要求。
1.3.4 长期膳食暴露风险评估
按公式（1）计算普通人群长期摄食银耳的农药慢性暴露风险（%ADI）。
%ADI=C×Fbw×ADI×100 (1) 式中：C为银耳中农药残留水平（mg·kg−1），F为每日膳食量（30 g）[16, 17]，bw为平均体重（53.23 kg）[18]。ADI为每日容许摄入量（Acceptable daily intake, mg·kg−1 bw day−1）[15]。%ADI越小风险越小，当%ADI＜100%时，健康风险可接受；当%ADI≥100%时，表示健康风险不可接受。
1.3.5 全膳食暴露风险评估
本研究采用农药残留试验值（C）或最大残留限量（Maximum residual limit, MRL），按公式（2）～（5），分别估算国家每日摄入量（National estimated daily intake, NEDI）、理论每日最大摄入量（Theory maximum daily intake, TMDI）、慢性风险商（Chronic Risk Quotient, RQc）、消费者保护水平（Protection levels against the chronic dietary risk for consumers, CPLc）。其中RQc＜100%时，农药残留对一般人群的膳食健康风险可接受；CPLc值越高，保护水平越高，大于1表明建议的MRL值达到可接受的保护水平。
式（2）：NEDI=
∑[Ci(MRLi)×Fi] 式（3）：TMDI=
∑(MRLi×Fi) 式（4）：RQc=NEDI/（ADI×bw）×100%
式（5）：CPLc=（ADI×bw）/TMDI
式中：Ci为银耳农药残留水平，其他类食物用MRLi代替。
1.4 数据统计与分析
通过SPSS22.0比较试验组与对照组间的差异性（差异水平a=0.05）。
2. 结果与分析
2.1 农药对银耳生长的影响
农药对银耳Tr21生长的影响见图1。喷施模式为M1，喷施浓度为1 000～4 000 mg·L−1时，吡虫啉粉剂，哒螨灵、啶虫脒微乳剂，丁硫克百威、毒死蜱颗粒剂处理组和1 000、2 000 mg·L−1异丙威乳油处理组的银耳子实体直径显著高于CK（P＜0.05）；喷施模式为M2，喷施浓度为1 000～4 000 mg·L−1时，吡虫啉粉剂，丁硫克百威、毒死蜱颗粒剂处理组和2 000 mg·L−1联苯菊酯、啶虫脒微乳剂，4 000 mg·L−1阿维菌素乳油，阿维菌素乳油，1 000 mg·L−1异丙威乳油处理组银耳子实体直径显著高于CK（P＜0.05），而高于2 000 mg·L−1哒螨灵、啶虫脒微乳剂的处理会导致银耳子实体生长停滞、溃烂；喷施模式为M3，喷施浓度为1 000～4 000 mg·L−1的联苯菊酯、啶虫脒微乳剂和4 000 mg·L−1阿维菌素乳油，1 000、2 000 mg·L−1丁硫克百威、毒死蜱颗粒剂处理组银耳子实体直径显著高于CK（P＜0.05），而施用咪鲜胺乳油或高于2 000 mg·L−1的哒螨灵、啶虫脒微乳剂，4 000 mg·L−1的丁硫克百威、毒死蜱颗粒剂会导致银耳子实体生长停滞，造成绝收；喷施模式为M4，喷施浓度为1 000～4 000 mg·L−1的丁硫克百威、毒死蜱颗粒剂，1 000～2 000 mg·L−1的联苯菊酯、啶虫脒微乳剂或阿维菌素乳油，1 000 mg·L−1的吡虫啉粉剂或哒螨灵、啶虫脒微乳剂，2 000～4 000 mg·L−1的异丙威乳油会显著促进银耳子实体生长（P＜0.05），而施用咪鲜胺乳油或高于2 000 mg·L−1的哒螨灵、啶虫脒微乳剂会导致银耳子实体生长停滞，造成绝收。
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图 1 农药对银耳生长的影响注：*表示与对照组有显著性差异（P＜0.05）Figure 1. Effects of pesticides on snow fungus growthNote: Asterisk indicates that significantly different was found between the experiment group and control group（P＜0.05）.2.2 银耳中农药残留
10种农药及其代谢物在银耳中的最终残留水平如表2示。受采摘间隔期影响，银耳中农药残留量在4种喷施模式下，基本呈现M1、M3、M2、M4递增趋势，其中吡虫啉、异丙威在M4模式的残留水平远高于其他3种模式。在采摘间隔期较短的M4、M2、M3组，喷施农药的浓度是影响银耳中农药残留水平的关键因素。乙酰甲胺磷乳油处理组，农药及其代谢物（甲胺磷）的残留水平均低于检测方法定量限（0.01 mg·kg−1）。丁硫克百威、毒死蜱颗粒剂处理组，农药及其代谢物（克百威）的残留水平也较低。其中丁硫克百威残留水平低于检测方法定量限（0.01 mg·kg−1），克百威残留水平为ND～0.03 mg·kg−1，毒死蜱残留水平为ND～0.28 mg·kg−1。但鉴于国内已禁止在蔬菜等作物上使用乙酰甲胺磷、丁硫克百威、毒死蜱且其或代谢物具有中高毒性，故也不建议其在银耳栽培中使用。阿维菌素在M2、M3、M4喷施模式下，4 000 mg·L−1的喷施浓度会导致银耳中残留水平分别达到1.14、1.80、3.56 mg·kg−1。按我国农药毒性分级标准，阿维菌素属于高毒农药，在使用过程应注意控制施用量。连续2次喷施咪鲜胺会造成银耳中咪鲜胺残留水平明显上升（M2）。
表 2 不同喷施模式下银耳农药及其代谢产物残留Table 2. Pesticide and metabolite residues on Tr21 sprayed with pesticides by different methods农药
Pesticide浓度
Concentration/（mg·L−1）残留水平 Residue level/（mg·kg−1） M1 M2 M3 M4 联苯菊酯、啶虫脒 Bifenthrin, Acetamiprid 1 000 0.02 ND 0.12 0.06 0.10 0.06 0.82 0.29 2 000 0.02 ND 0.27 0.17 0.10 0.06 0.84 0.43 4 000 0.02 0.04 0.99 0.37 1.67 0.42 3.23 0.69 阿维菌素 Abamectin 1 000 ND 0.21 0.20 2.44 2 000 ND 0.25 0.88 3.04 4 000 ND 1.14 1.80 3.56 乙酰甲胺磷 Acephate 1 000 NDa NDa NDa NDa 2 000 NDa NDa NDa NDa 4 000 NDa NDa NDa NDa 咪鲜胺 Prochloraz 1 000 0.01 3.99 − − 2 000 0.10 6.84 − − 4 000 1.22 7.39 − − 吡虫啉 Imidacloprid 1 000 0.03 1.32 0.22 6.23 2 000 0.11 2.06 0.48 11.70 4 000 0.17 3.71 1.91 14.91 异丙威 Isoprocarb 1 000 0.05 0.14 0.07 1.23 2 000 0.05 0.27 0.07 2.17 4 000 0.10 0.83 − 13.30 哒螨灵、啶虫脒 Pyridaben, Acetamiprid 1 000 ND ND − − 0.09 0.05 1.28 0.35 2 000 ND ND − − − − − − 4 000 ND ND − − − − − − 丁硫克百威、毒死蜱 Carbosulfan, Chlorpyrifos 1 000 NDa ND NDa 0.04 NDa 0.02 NDa ND 2 000 NDa ND NDa 0.05 NDa 0.03 NDa ND 4 000 NDa ND NDa 0.11 0.02b 0.04 0.03b 0.28 注：ND表示该农药未检出；NDa表示该农药及其主要代谢物均未检出；“−”表示该试验组银耳生长受到抑制，未采集到样品；b检出值为克百威。
Note: ND, not detected. NDa, both pesticide and its metabolites were not detected. The symbol（−）means that the snow fungus fruit growth was inhibited by corresponding pesticide. b, the level of carbofuran residue in snow fungus samples.2.3 长期膳食暴露风险评估
对除乙酰甲胺磷乳油，丁硫克百威、毒死蜱颗粒剂2组农药外的6组农药开展普通人群长期膳食暴露评估，结果见表3。银耳中联苯菊酯、啶虫脒、吡虫啉、哒螨灵残留最高水平的慢性膳食摄入风险（%ADI）分别为18%、0.56%、14%、7%，远小于100%，表明这4种农药的风险水平可接受。异丙威、阿维菌素残留最高水平的慢性膳食摄入风险（%ADI）分别为375%、200%，远超过100%，表明在部分施用模式下，这2种农药的风险水平不可接受。因银耳一种食物咪鲜胺残留的膳食风险已分别达到22%、38%、41%。故在M2模式下的咪鲜胺残留慢性膳食摄入风险（%ADI）也应予以注意。
表 3 银耳膳食导致的农药及代谢物暴露风险Table 3. Health risk of dietary exposure to pesticide and metabolite residues in fungi农药 Pesticide 浓度 Concentration/（mg·L−1） 慢性膳食摄入风险 Chronic dietary exposure risk/（%ADI） M1 M2 M3 M4 联苯菊酯、啶虫脒 Bifenthrin, Acetamiprid 1 000 1 0.004 1 0.05 1 0.05 5 0.23 2 000 1 0.004 2 0.14 1 0.05 5 0.35 4 000 1 0.035 5 0.30 9 0.34 18 0.56 阿维菌素 Abamectin 1 000 0.28 12 11 101 2 000 0.28 14 50 171 4 000 0.28 64 101 200 咪鲜胺 Prochloraz 1 000 0.056 22 − − 2 000 0.56 38 − − 4 000 7 41 − − 吡虫啉 Imidacloprid 1 000 0.028 1 0.21 6 2 000 0.10 2 0.45 11 4 000 0.16 3 2 14 异丙威 Isoprocarb 1 000 1 4 2 35 2 000 1 8 2 61 4 000 3 23 − 375 哒螨灵、啶虫脒 Pyridaben, Acetamiprid 1 000 0.028 0.004 − − 0.51 0.04 7 0.28 2 000 0.028 0.004 − − − − − − 4 000 0.028 0.004 − − − − − − 为了建议银耳中农药残留限量值（MRL），根据日均膳食数据、农药在已登记的可食作物中的MRL值[15]及银耳农药残留水平（表4），计算得到普通人群对联苯菊酯、啶虫脒、阿维菌素、咪鲜胺、吡虫啉、异丙威、哒螨灵等7种农药的全膳食摄入RQc，分别为29.7%～134.3%、18.4%～21.6%、47.0%～417.1%、78.7%～319.2%、5.2%～86.0%、41.3%～387.0%、82.5%～124.0%。可知，在部分喷施模式下，银耳中这7种农药的残留水平导致农药全膳食摄入RQc低于85%。该结果表明，银耳栽培中合理使用联苯菊酯等7种农药通常不会造成不可接受的长期膳食暴露慢性风险。
表 4 不同食物日均膳食量及农药膳食风险评估Table 4. Average daily dietary intake and risk assessment of pesticide residues食物
种类a膳食
量/kg联苯菊酯
(ADI:0.01 mg·kg−1 )啶虫脒
(ADI:0.07 mg·kg−1 )阿维菌素
(ADI:0.001 mg·kg−1 )咪鲜胺
(ADI:0.01 mg·kg−1 )登记作物 MRL or
STMR/
（mg·kg−1）NEDI/mg 登记作物 MRL or
STMR/
（mg·kg−1）NEDI/mg 登记作物 MRL or
STMR/
（mg·kg−1）NEDI/mg 登记作物 MRL or
STMR/
（mg·kg−1）NEDI/mg 米及
制品0.1766 水稻 0.5 0.088 水稻 0.02 0.004 水稻 0.5 0.088 面及
制品0.1422 小麦 0.5 0.071 小麦 0.5 0.071 小麦 0.01 0.001 小麦 0.5 0.071 薯类 0.0357 深色
蔬菜0.0884 番茄等 0.5 0.044 菠菜等 5 0.442 茄子等 0.2 0.018 蒜苔等 2 0.177 浅色
蔬菜0.1735 银耳等 0.02～3.23 0.003～0.560 银耳等 ND～0.69 0.001～0.120 银耳等 ND～1.14 0.001～0.198 银耳等 0.01～7.39 0.002～1.282 水果 0.0406 苹果等 0.5 0.020 柑橘等 2 0.081 苹果等 0.02 0.001 苹果等 2 0.090 植物油 0.0371 棉籽 0.5 0.018 棉籽 0.1 0.004 棉籽 0.01 0.001 糖 0.0021 甘蔗 0.05 0.001 合计 0.158～0.715 0.687～0.806 0.025～0.222 0.419～1.699 RQc (%) 29.7～134.3 18.4～21.6 47.0～417.1 78.7～319.2 食物种类a 膳食量/kg 吡虫啉
(ADI:0.06 mg·kg−1 )异丙威
(ADI:0.002 mg·kg−1 )哒螨灵
(ADI:0.01 mg·kg−1 )登记作物 MRL or
STMR/
（mg·kg−1）NEDI/ mg 登记作物 MRL or
STMR/
（mg·kg−1）NEDI/ mg 登记作物 MRL or
STMR/
（mg·kg−1）NEDI/ mg 米及制品 0.1766 水稻 0.05 0.009 水稻 0.2 0.035 水稻 1 0.177 面及制品 0.1422 小麦 0.05 0.007 小麦 NA − 薯类 0.0357 马铃薯 0.5 0.018 深色蔬菜 0.0884 茄子等 1 0.088 甘蓝等 2 0.177 浅色蔬菜 0.1735 银耳等 0.03～14.91 0.005～2.587 银耳等 0.05～2.17 0.009～0.376 银耳等 ND～1.28 0.001～0.222 水果 0.0406 苹果等 0.5 0.020 苹果等 2 0.081 植物油 0.0371 棉籽等 0.5 0.018 棉籽等 0.1 0.004 糖 0.0021 甘蔗 0.2 0.001 合计 0.167～2.748 0.044～0.412 0.439～0.660 RQc (%) 5.2～86.0 41.3～387.0 82.5～124.0 注：（1）表中除银耳农药残留数据外，其余农产品信息参考GB2763-2019[15]；（2）a因研究的农药种类未在动物性食物、豆制品、坚果、乳及乳制品、饮料中登记，故未列出；（3）MRL，最大残留限量；（4）NA，GB2763-2019中未列出小麦的异丙威MRL值；（5）STMR，规范残留试验中值；（6）NEDI，国家估算每日摄入量。
Note: Except the data of pesticide residues on snow fungus, others are available in GB2763-2019[15]. Because these pesticides had not been registered in animal foods, bean products, nuts, beverage, and milk products, consumption amount for them were not listed. MRL, maximum residual limit. NA, the MRL value of isoprocarb for wheat was not available in GB2763-2019. STMR, the supervised trial median residue. NEDI, national estimated daily intake.2.4 农药使用建议和拟建议的残留限量
根据农药对银耳生长的影响、农药毒性和风险评估结果，银耳中农药使用方式建议详见表5。阿维菌素乳油，咪鲜胺乳油，哒螨灵、啶虫脒微乳剂只能在模式M1下使用，但咪鲜胺施用浓度应低于1 000 mg·L−1；异丙威乳油可在M1和M3模式下施用，浓度分别不得超过4 000 mg·L−1和2 000 mg·L−1；当浓度低于4 000 mg·L−1时，吡虫啉粉剂可在M1、M2、M3模式下施用。联苯菊酯、啶虫脒微乳剂可在4种模式下施用，浓度应分别低于4 000 mg·L−1（M1、M2）和2 000 mg·L−1（M3、M4）。
表 5 银耳栽培过程农药使用建议Table 5. Suggested pesticide applications for Tr21 cultivation农药 Pesticide 剂型 Dosage form 方式、浓度范围 Modes/（mg·L−1） 3%联苯菊酯、3%啶虫脒 Bifenthrin, acetamiprid 微乳剂 Micro-emulsion M1、M2（≤4000）M3、M4（≤2000） 5%阿维菌素 Abamectin 乳油 Emulsifiable concentrate M1（≤4000） 45%咪鲜胺 Prochloraz 乳油 Emulsifiable concentrate M1（≤1000） 10%吡虫啉 Imidacloprid 粉剂 Dustpowder M1、M2、M3（≤4000） 20%异丙威 Isoprocarb 乳油 Emulsifiable concentrate M1（≤4000）M3（≤2000） 5%哒螨灵、5%啶虫脒 Pyridaben, acetamiprid 微乳剂 Micro-emulsion M1（≤4000） 在农药全膳食摄入RQc低于85%的条件下，根据农业农村部食品中农药最大残留限量制定指南[19]，建议银耳中7中农药MRL值为：哒螨灵0.01 mg·kg−1、咪鲜胺0.02 mg·kg−1、阿维菌素和异丙威0.1 mg·kg−1、啶虫脒0.7 mg·kg−1、联苯菊酯1 mg·kg−1、吡虫啉5 mg·kg−1（表6）。MRL建议值的CPLc为3.07～306.92，具有较高的保护水平。
表 6 银耳农药残留限量建议值Table 6. Recommended MRLs on 7 pesticides for Tr21 cultivation序号 No. 农药 Pesticide MRL/（mg kg−1） RQc/% CPLc 1 联苯菊酯 Bifenthrin 1.00 61.57 3.07 2 啶虫脒 acetamiprid 0.70 21.66 30.69 3 阿维菌素 Abamectin 0.10 77.34 3.07 4 咪鲜胺 Prochloraz 0.02 79.07 153.46 5 吡虫啉 Imidacloprid 5.00 32.22 3.68 6 异丙威 Isoprocarb 0.10 49.47 6.14 7 哒螨灵 Pyridaben 0.01 82.64 306.92 3. 讨论与结论
与多数人工栽培的食用菌不同，银耳必须有香灰菌伴生才能完成整个生活史，且香灰菌活力会直接影响银耳产量[20]。本研究发现部分喷施模式下，咪鲜胺、哒螨灵、啶虫脒、异丙威会不同程度地抑制银耳子实体或导致子实体畸形、腐烂。其中咪鲜胺可能是因为其为广谱性杀菌剂，不当使用可能会对银耳菌丝或香灰菌菌丝造成影响，进而导致子实体生长停滞。温志强等[21]也发现，甲基托布津和多菌灵等杀菌剂会导致银耳菌丝生长受到影响，子实体无法形成。但哒螨灵、啶虫脒、异丙威对抑制银耳子实体生长的机理尚待进一步研究。此外，在评估银耳膳食引起的农药暴露风险时，本研究直接采用银耳子实体中的农药残留水平，未考虑到银耳烹饪过程等不确定性因素对农药残留水平的影响，可能造成风险水平的高估。在我国多数可食作物均要通过清洗、烹饪等程序后方才食用，这可大幅度降低农药全膳食摄入的慢性风险商（RQc）。有研究表明，清洗可以去除西红柿中的农药残留，如腐霉利的去除率可以达到68%[22]。烹饪能有效降低豇豆中的哒螨灵等农药残留[23]。烹饪后蔬菜中的三唑磷含量降低了72%[24]。但是高估的风险评估结果反而有利于提高建议的农药MRL值对消费者的保护水平。
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图 1 桉树枝瘿姬小蜂各虫态发育速率与温度的关系
Figure 1. Growth rate of L. invasa as affected by temperature
表 1 不同温度下桉树枝瘿姬小蜂各虫态的发育历期
Table 1 Durations of development stages of L. invasa under varied temperatures
虫态
Insect state发育历期 Developmental duration/d 19℃ 22℃ 25℃ 28℃ 31℃ 卵 Egg 10.33±1.56 aD 7.40±1.99 bD 6.33±1.73 cC 5.23±1.57 dC 4.33±1.24 eC 幼虫 Larva 66.13±4.58 aA 51.43±4.49 bA 43.27±4.65 cA 34.47±3.75 dA 28.17±3.21 eA 蛹 Pupa 19.63±2.41 aC 12.27±2.53 bC 9.37±1.77 cB 7.27±1.89 dB 5.40±1.30 eBC 产卵前期 Pre-oviposition 12.30±1.53 aD 5.13 ±2.34 bD 2.03 ±0.82 cD 1.05 ±0.52 dD 0.48 ±0.35 dD 成虫 Adult 23.97±3.23 aB 14.23±2.57 bB 10.33±1.63 cB 8.20±1.77 dB 6.27±1.57 eB 全世代 Generation 108.40±6.12 a 76.23±7.31 b 60.99±6.05 c 48.02±5.27 d 38.38±4.52 e 注：同行数据后不同小写字母表示同一阶段不同温度间差异显著，同列数据后不同大写字母表示同一温度不同世代间差异显著（SNK法, P＜0.05）；表中“成虫历期”指的是成虫寿命，世代历期=卵历期+幼虫历期+蛹历期+产卵前期，表2～4同。
Note: Different lowercase letters in the same row show significant difference, and different capital letters in the same column show significant difference（SNK, P＜0.05）；In the table, "adult duration" refers to adult life span；Generation duration = egg stage + larva stage + pupa stage + pre spawning stage. The same as Table 2–4.
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表 2 桉树枝瘿姬小蜂各虫态发育速率及成虫寿命与温度的关系模型
Table 2 Regression models on growth rate and adult lifespan of L. invasa as affected by temperature
虫态
Insect state图测法 Graph method 线性回归 Linear regression Logistic回归 Logistic regression 模型
Model决定系数（R2）
Determination coefficient模型
Model决定系数（R2）
Determination coefficient模型
Model决定系数（R2）
Determination coefficient卵 Egg v=0.011 5t−0.124 0.983 2 v=0.012 1t−0.128 0 0.488 9 v=0.366 4/（1+e3.554 7−0.138 4t） 0.487 7 幼虫 Larva v=0.001 7t−0.017 5 0.986 3 v=0.001 7t−0.018 5 0.833 6 v=0.154 8/（1+e3.834 6−0.149 5t） 0.843 8 蛹 Pupa v=0.010 8t−0.158 1 0.985 0 v=0.011 8t−0.176 7 0.682 5 v=0.461 2/（1+e4.659 8−0.189 6t） 0.688 7 产卵前期 Pre-oviposition v=0.273t-5.645 7 0.790 1 v=0.273t-5.645 7 0.349 4 v=0.898 6/（1+e2.709 5−0.109 3t） 0.497 3 成虫 Adult v=0.009 6t−0.141 4 0.994 7 v=0.010 4t−0.156 9 0.733 9 v=0.305 9/（1+e4.792 7−0.181 4t） 0.736 0 全世代 Generation v=0.001 4t−0.017 8 0.992 4 v=0.001 4t−0.017 8 0.898 1 v=0.684 8/（1+e3.145 1−0.131 9t） 0.901 1
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表 3 赣南桉树枝瘿姬小蜂各虫态的发育适温区范围
Table 3 Temperature ranges for optimal development at various stages of L. invasa in southern Jiangxi
虫态
Insect stateLogistic模型参数
Parameters of logistic model最适温Tmid
Optimum temperature/℃适温下限Tmin
Lower limit of temperature/℃适温上限Tmax
Upper limit of temperature/℃a b 卵 Egg 3.554 7 0.138 4 25.68 13.58 37.79 幼虫 Larva 3.834 6 0.149 5 25.65 13.85 37.45 蛹 Pupa 4.659 8 0.189 6 24.58 14.05 35.11 产卵前期 Pre-spawn 2.709 5 0.109 3 24.79 12.25 37.33 成虫 Adult 4.792 7 0.181 4 26.42 15.23 37.61 全世代 Generation 3.145 1 0.131 9 23.84 12.21 35.48
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表 4 桉树枝瘿姬小蜂发育历期预测值与观测值的相关性分析
Table 4 Predicted and observed durations of L. invasa development stages
虫态
Insect state观测值 Observed value/d 预测值 Predicted value/d 相关系数（r）
Correlation coefficientP值
P Value19℃ 22℃ 25℃ 28℃ 31℃ 19℃ 22℃ 25℃ 28℃ 31℃ 卵 Egg 10.33 7.40 6.33 5.23 4.13 10.58 7.75 6.12 5.05 4.30 0.995 8 0.000 3 幼虫 Larva 66.13 51.43 43.27 34.47 28.17 67.57 50.25 40.00 33.22 28.41 0.994 3 0.000 5 蛹 Pupa 19.63 12.27 9.37 7.27 5.40 21.23 12.58 8.94 6.93 5.66 0.997 4 0.000 2 全世代 Generation 108.40 76.25 60.99 48.02 38.38 113.64 76.92 58.14 46.73 39.06 0.997 5 0.000 2
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表 5 桉树枝瘿姬小蜂的LDT和SET （文献资料[10-13]及本试验）
Table 5 LDT and SET of L. invasa （data from literatures and this experiment）
地点
Position起点温度 LDT/℃ 有效积温 SET/（d·℃） 食料、温度
Food, Temperature卵
Egg幼虫
Larva蛹
Pupa成虫
Adult卵
Egg幼虫
Larva蛹
Pupa成虫
Adult福建福州
Fuzhou, Fujian 26.09°N8.65 6.57 13.94 14.83 101.80 807.16 105.43 114.53 巨桉8号, 21～36℃, 6个恒温[13]
E. grandis, 21～36℃, 6 constant temperatures江西赣州
Ganzhou, Jiangxi 25.85°N10.78 10.29 14.64 14.73 86.96 588.24 92.59 104.17 DH201-2, 19～31℃, 5个恒温(本研究结果)
DH201-2, 19～31℃, 5 constant temperatures [this experiment]广东广州
Guangzhou,Guangdong 23.08° N13.00 19.71 17.07 – 128.10 284.24 201.22 – 尾赤桉[12]
E. urophylla × E. camaldulensis广东广州
Guangzhou,Guangdong 23.08° N0.00 0.00 0.00 0.00 146.57 1228.01 161.67 205.17 DH201-2，室外，变温[11]
DH201-2, Outdoor, variable temperature广西南宁
Nanning, Guangxi 22.84°N10.25 10.79 749.43 53.42 20.5，27.5，28.6℃, 3个恒温[11]
20.5，27.5，28.6℃, 3 constant temperatures
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