Effects of Amino Acid-balanced Low-Protein Diet Supplemented with Glutamate and Arginine on Growth and Serum Indicators of Weaned Piglets
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摘要:目的 探讨较大程度降低饲粮粗蛋白质（Crude protein，CP）水平后添加必需氨基酸、谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪生长性能、腹泻率和血液生化指标的影响。方法 选用192头（26±2 d）健康的杜长大三元杂交断奶仔猪，随机分成4个处理组，每组设6个重复，每个重复8头猪。Ⅰ组为对照组，饲粮CP水平21.16%；Ⅱ组为低CP（15.97%）补充必需氨基酸（L-赖氨酸、DL-蛋氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-异亮氨酸）饲粮；Ⅲ组在Ⅱ组基础上添加1.5%谷氨酸，Ⅳ组在Ⅱ组基础上添加1.5%谷氨酸和1.0%精氨酸。试验期16 d，试验结束时，采集断奶仔猪结束体重、耗料量、腹泻天数和血液样品，测定仔猪日增重、料重比、腹泻率及血浆生化和激素指标。结果 仔猪平均日增重（ADG）Ⅱ组显著低于Ⅰ组、Ⅲ组和Ⅳ组（P＜0.05），Ⅲ组、Ⅳ组与Ⅰ组间差异不显著（P＞0.05）。平均日采食量（ADFI）各组间差异均不显著（P＞0.05）。料重比Ⅱ组显著高于其他处理组（P＜0.05）。仔猪腹泻率Ⅱ组显著低于Ⅰ组（P＜0.05），Ⅲ组和Ⅳ组均极显著低于Ⅰ组（P＜0.01），显著低于Ⅱ组（P＜0.05）。仔猪血浆乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（ALP）、谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）活性各组间差异均不显著（P＞0.05），仔猪血浆二胺氧化酶（DAO）活性Ⅱ组比Ⅰ组显著升高（P＜0.05），Ⅲ组和Ⅳ组均显著低于Ⅱ组（P＜0.05），Ⅲ组和Ⅳ组与Ⅰ组相比均差异不显著（P＞0.05）。血浆尿素氮（PUN）浓度Ⅱ组显著低于Ⅰ组、Ⅲ组和Ⅳ组（P＜0.05）。血浆CCK浓度Ⅲ组和Ⅳ组均显著高于Ⅰ组和Ⅱ组（P＜0.05），血浆IGF-1浓度Ⅳ组显著高于Ⅰ组和Ⅱ组（P＜0.05），Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组间差异不显著（P＞0.05）。结论 将饲粮CP水平降低至15.97%，断奶仔猪生长性能受到不利影响，肠道屏障通透性受到不同程度影响，但能降低断奶仔猪腹泻率和血浆PUN浓度；添加谷氨酸后，能够恢复断奶仔猪生长性能，提高胃肠激素水平。因此，断奶后饲喂低蛋白质饲粮并添加重要必需氨基酸和谷氨酸可减少断奶仔猪腹泻，降低肠黏膜屏障通透性，是一种可行的饲喂策略。Abstract:Objective Effects of a forage with reduced protein and a supplement of essential amino acids, glutamate, and arginine on the growth, diarrhea rate, and serum indicators of weaned piglets were studied.Method One-hundred-ninety-two healthy (26±2)-day-old crossbred piglets (Duroc × Landrace ×Large White) were randomly divided into a control and 3 treatment groups. Each group comprised 6 replicates of 8 piglets. They were fed for 16 days with the following forages containing 21.16% crude protein (CP) as control (Group 1), low-protein of 15.97% CP supplemented with the essential amino acids including L-Lys, DL-Met, L-Thr, L-Thr, L-Val, and L-Ile (Group 2), 15.93% CP with the same added essential amino acid plus 1.5% glutamate (Group 3), and 15.95% CP with the added essential amino acids plus 1.5% glutamate and 1.0% arginine (Group 4). At end of the feeding, body weight, forage consumption, number of days with diarrhea, and blood samples of the piglets were collected for daily gain, feed to weight ratio, diarrhea rate, and plasma biochemicals and hormones determinations.Result The average daily weight gain (ADG) of the piglets in Group 2 was significantly lower than those in other groups (P＜0.05). There were no significant ADG differences among those 3 groups, nor the average daily feed intake (ADFI) among all groups (P＞0.05). The feed/gain (F/G) of Group 2 was significant higher than other groups (P＜0.05). The diarrhea rate of Group 2 piglets was significantly lower than that of Group 1; Group 3 and Group 4 extremely significantly lower than that of Group 1; and Group 3 and Group 4 significantly lower than that of Group 2 (P
＜0.05). The activities of serum LDH, ALP, GPT, and GOT among the 4 groups did not differ significantly (P ＞0.05). The DAO of Group 2 animals was significantly higher than that of Group 1; Group 3 and Group 4 significantly lower than Group 2; while Group 3 and Group 4 not significant differed from Group 1 (P＞0.05). The PUN of Group 2 was significantly lower than the other 3 groups (P＜0.05). The CCK of Group 3 and Group 4 were significantly higher than those of Group 1 and Group 2 (P＜0.05). No significant differences on IGF-1 were found among piglets of Group 1, Group 2, and Group 3, but that of Group 4 higher than those of Group 1 and Group 2 (P＜0.05). Conclusion The reduction of CP to 15.97% in forage could adversely affect the growth as well as the intestinal barrier permeability to varying degrees of the weaned piglets. However, it also reduced the diarrhea rate and plasma PUN of the weaned piglets. Since the addition of glutamate in diet restored the growth and improved the levels of gastrointestinal hormones of piglets, feeding piglets an essential amino acid-balanced, low-protein diet with the supplementation of glutamate could be a plausible strategy to mitigate the occurrences of diarrhea and interference on the intestinal mucosal barrier permeability in the animals after weaning.-
Keywords:
- Glutamate /
- arginine /
- growth performance /
- serum indicators /
- low-protein diet /
- weaned piglets
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近年来，福建省许多具有一定研究开发价值的淡水土著品种由于原产地生态环境日益恶化，加上受经济利益驱使的滥捕等竭泽而渔的现象屡禁不止，导致这些土著品种的种群数量和质量严重衰竭。目前福建省在淡水土著特色鱼类品种的保护与开发等方面的研究工作进展缓慢，基础相对薄弱。这些土著品种的人工繁育技术、营养需求及养殖技术等方面的研究尚未突破，野生种质资源存在灭绝的风险。鉴于此，有必要对我省土著品种开展资源保护、苗种扩繁及养殖开发等研究工作，以实现其野生种质资源的恢复与延续，满足市场需求。
半刺厚唇鱼是福建省《南浦溪半刺厚唇鱼国家级水产种质资源保护区》、《松溪河厚唇鱼国家级水产种质资源保护区》的主要保护物种和溪河重要的渔业品种，为闽西北山区常见的食用鱼，因其肉质细腻，营养价值和经济价值较高，深受老百姓喜爱。
有关半刺厚唇鱼的相关研究资料极少，目前仅见有半刺厚唇鱼精子活力研究[1]、肌肉营养成分分析[2]、胚胎及胚后发育观察[3]、饥饿对其早期发育的影响[4]、扁弯口吸虫病的防治[5]、延迟投饵对仔鱼摄食、生长与存活的影响[6]，常用渔药对其幼鱼的急性毒性试验[7]等。刘丽丽等[8]利用驯养的野生半刺厚唇鱼亲本，在2008-2009年开展了其人工繁育试验，雌鱼催产率为54.0%，获得卵25 779粒；经过55~65 d的培育获得全长25~35 mm的鱼苗8 217尾，鱼苗成活率43.8%。本研究采用了新的催产药物配伍，实现了良好的催产效果；在解决生物饵料的供应问题后，形成了稳定的苗种培育技术，为半刺厚唇鱼苗种规模化生产和其种质资源的保护与养殖开发应用奠定了坚实基础。
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 亲本及来源
项目组于2014-2016年，分别从福建省南平和龙岩地区有关水域收集了平均规格约80 g·尾-1的半刺厚唇鱼野生(后备)亲本合计8 406尾，分别放入土池和水泥池进行培育。
1.1.2 催产药物
催产药物从宁波市第二激素厂购进，分别为促黄体素释放激素类似物(LRH-A2)、马来酸地欧酮(DOM)及绒毛膜促性腺激素(HCG)，药物催产时现配现用。
1.1.3 孵化系统
采用布卵框结合周转箱(流水孵化)或布卵框结合网箱(微流水充气孵化)组成孵化系统。
1.2 试验方法
1.2.1 亲本培育
将采集到的半刺厚唇鱼野生亲本分别放养于1口土池(面积1 996 m2)和2口水泥池(面积65×2 m2)驯化培育，放养密度约2.8尾·m-2，另套养适量鲢鳙鱼以调控水质。水深均维持在1.0~1.3 m，保持微流水。采用鲈鱼人工配合饲料(福建天马科技集团股份有限公司)进行培育，日投喂2~3次，日投喂量为鱼体重的1%~2%。
1.2.2 人工催产、授精与孵化
从驯化养殖的亲鱼中挑选健壮无伤的个体进行人工催产试验。性腺发育成熟的亲鱼外部形态特征为：雄鱼吻部珠星明显，轻压生殖孔有乳白色精液流出；雌鱼腹部膨大有弹性，卵巢轮廓明显，生殖孔微红，胸鳍和腹鳍呈淡黄色。催产激素采用促黄体素释放激素类似物(LRH-A2)+马来酸地欧酮(DOM)+绒毛膜促性腺激素(HCG)混合制剂，2针注射方式，第1针注射：3 mg LRH-A2+4 mg DOM+100 IU HCG；第2针注射：5 mg LRH-A2+5 mg DOM+1000 IU HCG；针距10~12 h，雄鱼不注射第1针，第2针剂量为雌鱼的1/2；在23~27℃水温条件下，效应时间为10~14 h；雌雄比例为(3~5):1。催产用雌鱼体重70~160 g，雄鱼体重55~180 g。
人工授精采用干法授精方式，具体操作为将到效应期的雌鱼腹部水分擦干，轻压其腹部将卵从生殖孔挤入干燥的塑料碗中；同时用吸管从雄鱼生殖孔吸入挤出的精液，用少量0.7%生理盐水(pH 7.0) 稀释后倒入刚挤出的卵中，再用羽毛轻轻搅拌混匀2~3 min后，加入清水将受精卵洗净去粘，然后放入孵化系统中进行孵化。
1.2.3 不同孵化方式试验
采用同一批次的亲鱼，经人工催产、挤卵和授精后，开展了不同孵化方式(静水、流水、充气)对受精卵孵化率的影响试验，孵化用水均为经至少24 h曝气的井水，孵化水温24~26℃。其中，静水孵化采用直径60 cm的塑料盆(面积约0.28 m2)，孵化时盛水30 L，每天早晚各换水1次，每次40%~50%；流水孵化过程中不间断微流水；充气孵化在20 m2水泥池中进行，水深50 cm，孵化过程中每天换水10%~20%。
1.2.4 苗种培育
仔鱼孵出后第4 d点数，并转移至水泥池中培育。仔鱼开口后，利用一种新型浮游动物采集装置[9]从饵料培育池收集浮游动物(主要为轮虫和枝角类无节幼体)，清洗过筛后投喂。10日龄前浮游动物采用80目过筛，10~25日龄则用60目过筛，20日龄开始驯食人工配合饲料，以鳗鱼料和海水鱼开口料(福建天马科技集团有限公司)为主。
1.2.5 生长特性
生长特性(全长与体重)测定自仔鱼开口后第2 d开始，以后每隔5 d从苗种培育池取样1次，每次测10尾以上。取样后立即用游标卡尺测定全长，并用感量0.1 mg的电子分析天平称重。
2. 结果与分析
2.1 人工繁育情况
2015-2016年半刺厚唇鱼人工繁育情况详见表 1。利用收集的野生亲本，经人工驯化培育后挑选性腺发育良好的亲本进行人工催产(共催产11个批次)，合计催产雌鱼679尾，平均催产率达78.9 %；获得卵子35.88万粒、受精卵26.82万粒，平均受精率74.8 %；孵化水花苗19.766万尾，平均孵化率73.7 %。在23~24℃的水温条件下，激素效应时间为12~14 h。
表 1 2015-2016年半刺厚唇鱼人工繁育情况Table 1. Artificial breeding of A. hemispinus (2015-2016)
2.2 不同孵化方式对半刺厚唇鱼受精率和孵化率的影响
结果(表 2)表明，3种孵化方式下卵子的受精率没有差异，孵化方式的不同不会对卵子的受精率产生明显影响；而3种孵化方式下受精卵的孵化率差异明显，孵化率从高到低依次为：流水孵化＞充气孵化＞静水孵化，流水孵化和充气孵化的孵化率均达到80%以上，两者之间没有差异；静水孵化的孵化率仅为40.6%，不及前者的1/2。
表 2 不同孵化方式对半刺厚唇鱼受精率和孵化率的影响Table 2. Effect of incubation on fertilization and hatching rates for A. hemispinus
2.3 苗种培育情况
2015~2016年期间，半刺厚唇鱼苗种培育情况详见表 3。经过39~51 d的培育，共获得平均规格3.25 cm的半刺厚唇鱼夏花苗约14万尾，苗种培育平均存活率达到70.9 %。
表 3 2015-2016年半刺厚唇鱼苗种培育情况Table 3. Cultivation of A. hemispinus from fertilized eggs (2015-2016)
2.4 生长特性
2.4.1 全长生长
对6~30日龄的仔、稚、幼鱼全长生长情况进行了测定，结果如图 1所示。仔、稚、幼鱼全长生长情况经点图分析，全长(YL)与日龄(X)呈指数函数关系，经计算求得YL=1.4605e0.0271x，相关系数R2=0.9982，表明二者相关非常密切。
2.4.2 体重增长
对6~30日龄的仔、稚、幼鱼的体重生长情况进行了测定，结果如图 2所示。仔、稚、幼鱼体重的生长情况经点图分析，体重(YH)与日龄(X)呈指数函数关系，经计算求得YH=0.0217e0.0967x，相关系数R2=0.9876，表明二者相关非常密切。
2.4.3 全长与体重的关系
对6~30日龄的仔、稚、幼鱼的全长与体重生长情况经点图分析，，结果如图 3所示，全长(YL)与体重(YH)呈幂函数关系，经计算求得YL=0.0059YH3.4886，相关系数R2=0.9868，表明二者相关非常密切。
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图 3 半刺厚唇鱼幼鱼全长与体重回归曲线Figure 3. Regression function on body length and weight of A. hemispinus larvae3. 讨论
实践证明，野生半刺厚唇鱼在水泥池和土池经过一段时间的驯养后，均可完全摄食人工配合饲料，通过强化培育，性腺均可发育成熟。但是，通过水泥池和土池的对比培育，土池亲本培育效果更好，主要表现在亲本体质更好、性腺发育同步性更高，而水泥池会出现少量亲本体质消瘦、性腺发育滞后的现象，其原因可能是野生亲本生性胆小，在水泥池驯化时应激反应更强烈，部分个体上台摄食成功率较低，导致其驯化效果相对较差；也可能与土池培育水体更大、水质更稳定、生物饵料和有机碎屑较丰富有关。
本研究采用了全新的催产药物配伍，催产成功率达78.9%，与以往的报道(54.0%)相比，催产率得到了大幅提高；此外，针对名贵淡水鱼品种苗种培育过程中常常遇见的生物饵料供应不足的难题，研制出一种新型浮游动物采集装置[9]应用于半刺厚唇鱼的育苗生产(主要采集生物饵料为淡水轮虫和枝角类无节幼体)，确保了生物饵料的稳定、充足供给，使苗种培育成活率达到70.9%。
在不同孵化方式试验中，静水孵化的孵化率偏低可能主要与孵化用水的水质指标变化太大、太快相关。分析认为，虽然在孵化过程中均有换水，但每天2次、每次40%~50%的换水量不足以抵消水质指标变化程度对受精卵发育进程的阻碍和抑制作用。此外，静水孵化所采用的小水体，水温变化幅度较流水和充气孵化方式的明显要大，这可能也会对受精卵的孵化率产生一定影响。因此，在半刺厚唇鱼人工育苗生产中，受精卵适宜的孵化方式为流水孵化和充气孵化，或流水结合充气孵化，而静水孵化是不可取的。
光唇鱼属鱼类的人工繁殖已有相关报道[10-12]，但半刺厚唇鱼的人工繁育除本文报道外，仅见有刘丽丽等[8]利用驯养的野生半刺厚唇鱼亲本，于2008-2009年开展了其人工繁育试验，获得了少量苗种。光唇鱼既可通过注射催产激素进行人工催产[10]，又可采用微流水刺激诱导产卵措施促使亲鱼产卵[12]；而刘丽丽等[8]的研究结果和本研究均表明：半刺厚唇鱼在人工催产后，即使加大水流刺激，亲鱼也未能自然产卵和受精。其原因固然与种类不同致使人工繁育难易程度不同相关，但是在自然界中，半刺厚唇鱼均是在激流浅滩中产卵这一习性，预示着该鱼无须人工注射催产激素亦可自然产卵受精。因此，半刺厚唇鱼人工繁育技术下一步需要攻克的技术难题在于找准其仿生态繁育条件，囤积足量的亲本，即可实现其苗种规模化繁育的目标。
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表 1 饲粮组成与营养水平（风干基础）
Table 1 Nutritional composition of basal diets (air-dry basis) （单位： %）
项目
ItemsⅠ组 (CK)
Group ⅠⅡ组
Group ⅡⅢ组
Group ⅢⅣ组
Group Ⅳ原料 Ingredient 玉米 Corn 35.12 48.00 47.00 45.00 豆粕 Soybean meal 15.00 6.30 6.20 6.60 膨化大豆 Extruded soybean 18.00 11.00 12.00 12.00 麦麸 Wheat bran 1.70 鱼粉 Fish meal 7.00 7.00 7.00 7.00 乳清粉 Whey powder 16.00 16.00 16.00 16.00 蔗糖 Sucrose 2.00 2.00 2.00 2.00 柠檬酸 Citric acid 2.00 2.00 2.00 2.00 豆油 Soybean oil 2.50 2.26 2.56 3.15 石粉 Lime stone 0.30 0.32 0.23 0.47 磷酸氢钙 CaHPO4 0.54 0.72 0.82 0.60 食盐 NaCl 0.30 0.30 0.30 0.30 氯化胆碱 Choline chloride (50%) 0.08 0.08 0.08 0.08 L-赖氨酸盐酸盐 L-lysine·HCl 0.03 0.47 0.46 0.46 DL-蛋氨酸 DL-methionine 0.09 0.24 0.24 0.24 L-苏氨酸 L-threonine 0.03 0.23 0.23 0.23 L-色氨酸 L-tryptophan 0.01 0.08 0.08 0.08 L-缬氨酸 L-valine 0.16 0.16 0.15 L-异亮氨酸 L-isoleucine 0.14 0.14 0.14 L-谷氨酸 L-glutamate 1.50 1.50 L-精氨酸 L-arginine 1.00 ①预混料 Premix 1.00 1.00 1.00 1.00 合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 ②营养水平 Nutrient levels 消化能 Digestible energy/ (MJ·kg−1) 14.99 14.42 14.39 14.39 净能 Net energy/（MJ·kg−1） 10.55 10.54 10.53 10.54 粗蛋白质 Crude protein 21.16 15.97 15.93 15.95 标准回肠可消化氨基酸
Standardized ileal digestible amino acids赖氨酸 Lys 1.30 1.30 1.30 1.30 蛋氨酸 Met 0.46 0.54 0.54 0.54 蛋氨酸+胱氨酸 Met+Cys 0.78 0.78 0.78 0.78 苏氨酸 Thr 0.85 0.85 0.85 0.85 色氨酸 Trp 0.26 0.26 0.26 0.26 缬氨酸 Val 0.97 0.88 0.88 0.88 异亮氨酸 Ile 0.88 0.78 0.78 0.78 亮氨酸 Leu 1.66 1.32 1.32 1.32 谷氨酸 Glu 3.60 2.67 4.15 4.16 精氨酸 Arg 1.36 0.95 0.95 1.95 ①每千克饲粮提供：维生素A 12500 IU，维生素D3 2500 IU，维生素E 80.00 mg，维生素K3 3.00 mg，维生素B1 2.50 mg，维生素B2 10.00 mg，维生素B6 3.00 mg，维生素B12 0.035 mg，烟酸 30.00 mg，泛酸 15.00 mg，叶酸 0.45 mg，生物素 0.50 mg，铁 140 mg，铜15 mg，锌140 mg，锰30 mg， 碘0.50 mg，硒0.25 mg；②粗蛋白质为实测值，其他营养指标为计算值。
① Premix provided following nutrients per kg of forage: VA 12 500 IU, VD3 2 500 IU, VE 80.00 mg, VK3 3.00 mg, VB1 2.50 mg, VB2 10.00 mg, VB6 3.00 mg, VB12 0.035 mg, nicotinic acid 30.00 mg, pantothenic acid 15.00 mg, folic acid 0.45 mg, biotin 0.50 mg, Fe 140.00 mg, Cu 15.00 mg, Zn 140.00 mg, Mn 30.00 mg, I 0.50 mg, Se 0.25 mg；② CP is a measured value; others, calculated.
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表 2 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪生长性能和腹泻率的影响
Table 2 Effect of low-protein diet supplemented with glutamate and arginine on growth and diarrhea rate of weaned piglets
项目
ItemsⅠ组
Group ⅠⅡ组
Group ⅡⅢ组
Group ⅢⅣ组
Group Ⅳ初始体重 IBW/kg 6.95±0.23 6.85±0.26 6.98±0.32 7.07±0.35 结束体重 FBW/kg 12.25±0.57 11.79±0.65 12.32±0.76 12.38±0.72 平均日增重 ADG/（g·d−1） 331.25±38.62 a 308.75±42.13 b 333.75±48.26 a 331.88±47.47 a 平均日采食量 ADFI/（g·d−1） 460.48±37.55 457.62±36.48 460.63±42.39 459.28±51.13 料重比 F/G 1.39±0.25 b 1.48±0.19 a 1.38±0.21 b 1.38±0.22 b 腹泻率 Diarrhea rate/% 5.21±2.35 Aa 3.65±1.04 ABb 1.96±1.62 Bc 2.17±0.98 Bc 同行数据后不同小写字母表示差异显著（P ＜0.05），不同大写字母表示差异极显著（P ＜0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P＞0.05），下表同。
Data with different lowercase letters on same row indicate significant difference at P＜0.05; those with different capital letters, extremely significant difference at P＜0.01; those with same or no letter, no significant difference at P＞0.05. Same for tables below.
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表 3 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪血浆生化指标的影响
Table 3 Effect of low-protein diet supplemented with glutamate and arginine on serum indicators of weaned piglets
项目 Items Ⅰ组 Group Ⅰ Ⅱ组 Group Ⅱ Ⅲ组 Group Ⅲ Ⅳ组 Group Ⅳ 乳酸脱氢酶 LDH/(U·L−1) 2058.12±250.54 2029.82±154.37 1960.14±238.70 2060.04±236.78 碱性磷酸酶 ALP/(U·L−1) 17.06±3.28 21.28±2.50 21.49±1.86 18.85±3.64 谷丙转氨酶 GPT/(U·L−1) 16.51±1.74 19.03±1.02 16.76±1.25 15.77±0.93 谷草转氨酶 GOT/(U·L−1) 8.36±0.48 9.76±0.48 9.58±0.73 10.43±1.13 二胺氧化酶 DAO/(U·L−1) 17.24±2.25 b 20.86±1.34 a 17.07±1.14 b 16.33±1.23 b 尿素氮 PUN/(mmol·L−1) 2.14±0.40 a 1.15±0.29 b 1.95±0.40 a 2.06±0.29 a
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表 4 低蛋白质饲粮添加谷氨酸和精氨酸对断奶仔猪血浆激素指标的影响
Table 4 Effect of low-protein diet supplemented with glutamate and arginine on serum hormone indicators of weaned piglets
项目 Items Ⅰ组 Group Ⅰ Ⅱ组 Group Ⅱ Ⅲ组 Group Ⅲ Ⅳ组 Group Ⅳ 胰岛素样生长因子-1 IGF-1/(ng·mL−1) 93.12±5.57 a 84.35±3.9 b 92.57±3.87 a 96.70±6.86 a 胆囊收缩素 CCK/(ng·L−1) 179.55±12.23 b 182.30±14.91 b 237.32±15.11 a 234.78±15.78 a
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