Anti-TMV Activity of Chemicals in Leaves and Branches of Ailanthus altissima
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摘要:目的 对臭椿（Ailanthus altissima）化学成分及其抗烟草花叶病毒（TMV）活性进行研究，为开发新型植物病毒抑制剂提供理论依据。方法 综合运用硅胶、凝胶、MCI等多种柱层析方法对臭椿枝叶正丁醇提取物化学成分进行分离，利用NMR、MS鉴定其结构；以TMV为供试病毒，采用半叶枯斑法从保护活性、治疗活性、钝化活性等3个方面评估化合物的生物活性。结果 从臭椿枝叶正丁醇提取物中分离鉴定了17个化合物，根据其理化性质以及波谱数据分别鉴定为：山奈酚（Kaempferol） (1)、(2S)-3-O-Octadeca-9Z,12Z,15Z-trienoylgycery-O-β-D-galactopyranoside (2)、正二十六烷（Hexacosane） (3)、6,9,12-Octadecatrienoic acid (4)、Eichlerianic acid (5)、 Colocasinol A (6)、咖啡酸二十烷酯（Caffeic acid eicosanyl ester） (7)、Acernikol (8)、(-)-Sakuyayesinol (9)、(14S,17S,20S,24R)-20,24,25-trihydroxy-14,17-cylomalabarican-3-one (10)、Pinnata E(11)、morin-3-O-α-rhamnopyranoside(12)、Trans-syringin (13)、姜糖脂A（Gingerglycolipid A） (14)、姜糖脂B（gingerglycolipid B）(15)、benzyl 2-O-β-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-2,6-dihydroxy-benzoate (16)、picrorhizoside C (17)。化合物2、14、15为首次从该植物中分离得到。在质量浓度为50 μg·mL-1时，化合物6、8、13、14对TMV的钝化活性较为显著，抑制率均在50%以上，与阳性对照药剂宁南霉素无显著差异，分别为木脂素类化合物、木脂素类化合物、苯丙素类化合物和半乳糖脂类化合物。结论 从臭椿枝叶中分离得到的17个化合物，均对TMV具有抑制作用，部分半乳糖脂类化合物、木脂素类化合物、苯丙素类化合物对TMV有显著的钝化作用，研究结果丰富了臭椿抗TMV活性物质的范畴，也为今后开发新型植物病毒抑制剂提供了科学依据。Abstract:Objective Chemical composition and anti-tobacco mosaic virus (TMV) activity of Ailanthus altissima were studied to pave the way for developing an effective viral inhibitor.Methods Substrates in the n-butanol extract of leaves and branches of A.altissima plants were separated using silica gel, Sephadex LH-20, and MCI column chromatography.Chemical structures of the substrates were determined based on NMR and MS data, and anti-TMV activity of the compounds examined using the half-leaf method.Results The 17 compounds isolated from the n-butanol extract were identified to be: (1) kaempferol, (2) (2S)-3-o-octadeca-9Z, 12Z, 15Z-trienoylgycery-O-β-D-galactopyranoside, (3) hexacosane, (4) 6,9,12-octadecatrienoic acid, (5) eichlerianic acid, (6) colocasinol A, (7) caffeic acid eicosanyl ester, (8) acernikol, (9) (-)-Sakuyayesinol (10), (14S,17S, 20S, 24R)-20,24,25-trihydroxy-14,17-cylomalabarican-3-one, (11) 4-(3-butoxy-1-hydroxy-2-methoxypropyl) benzene-1, 2-diol, (12) pinnata, (13) trans-syringin, (14) gingerglycolipid A, (15) gingerglycolipid B, (16) benzyl 2-o-β-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-2,6-dihydroxy-benzoate, and (17) picrorhizoside C.Among them, Compounds 2, 14, and 15 were isolated from the plant for the first time.And the lignans, phenylpropanoids, or galactose lipids, such as Compounds 6, 8, 13, and 14 at concentration of 50 μg·mL−1 displayed a TMV inactivation rate greater than 50%, which was similar to that of the positive control, ningnamycin.For Compounds 6, 13, and 14, the rates were even higher than that of ningnamycin.Conclusion All 17 substances isolated from the leaves and branches of A.altissima exhibited varying degrees of inhibitory effect on TMV.The efficacy was more significant as shown by certain Lignans, phenylpropanoids, and galactose lipids.
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0. 引言
【研究意义】植物病毒病害分布在世界各地，每年都对现代农业造成严重威胁和巨大的经济损失[1]。烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）属披盖病毒科（Togaviridae）烟草花叶病毒属（Tobamovirus）病毒，是目前世界上研究最为深入的模式病毒[2]。自100多年前被发现以来一直是烟草研究的热点，它寄主范围广，已发现可被感染的植物超过500种，每年造成巨大的经济损失[3,4]。烟草花叶病毒（TMV）是一种相当持久和稳定的植物病毒[4]，它的预防和治疗仍然是一个世界性的难题。目前，传统的抗病毒制剂往往效果不佳，或者对植物有毒害作用，研究和开发具有低抗药性、生态友好、机制新颖等特点的高效抗病毒药物是迫切和持续需要的。植物源活性物质抗病毒效果良好，其治疗效果不亚于化学合成制剂，且资源丰富，绿色环保，不会造成环境污染和残留毒性问题，具有广阔的发展前景[3,5]，目前已报道多种植物中的生物碱、萜类、木脂素和黄酮类成分有抗烟草花叶病毒活性，如紫草（Lithospermum erythrorhizon ）中的萘醌类化合物；钩吻（Gelsemium elegans）中的生物碱；蟛蜞菊（Wedelia chinensis）中的内酯类化合物；鸦胆子（Brucea javanica ）中的苦木素类化合物；罗氏盐肤木（Rhus javanica L. var. Roxburghiana）中的木脂素及其配糖体；三尖杉（Cephalotaxus fortunei Hook.f.）中的苯丙氨酸三尖杉酯碱等[6]，但得到实际应用的却很少，因此，继续探寻结构新颖、作用机理独特的植物源活性物质具有十分重要的意义。【前人研究进展】植物提取物被发现具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗疟疾、抗病毒、抗寄生虫、除草和杀虫等特性[7]。臭椿（Ailanthus altissima）是苦木科（Simaroubaceae）臭椿属（Ailanthus Desf.）植物，属于落叶乔木，又名木砻树或椿树，古称樗，植物资源丰富。臭椿的种子、叶、茎皮、根皮中含有甾醇、萜类、黄酮类、生物碱类、苦木苦味素类及其他挥发性成分，有丰富多样的药理和生物活性[8]。沈建国等研究发现，臭椿根皮的乙醇提取物、甲醇提取物和丙酮提取物均有较好的抗烟草花叶病毒作用[9]，之后许多学者对臭椿抗烟草花叶病毒成分展开了进一步研究，谭庆伟从臭椿根皮的乙醇提取物中分离鉴定并验证了苦木素B2-dihydroailanthone是臭椿中具有抗活性的有效成分之一 [10]；Tan等从臭椿翅果中分离得到20个苦木素类化合物化合物，并发现所有苦木素均表现出显著的抗TMV活性[3, 11]；倪建成明确了苦木素类化合物是臭椿果实中抗TMV增殖的主要活性成分，从臭椿果实甲醇提取物的氯仿萃取相提取物和正丁醇萃取相提取物中分离鉴定了80个单体化合物并测定了化合物的抗TMV活性，发现了抗烟草花叶病毒显著的苦木素类化合物，除苦木素类化合物外，一些木脂素类和酚类化合物也具有明显的抗TMV活性[12]；邹正彪等对臭椿种子乙酸乙酯提取物的各馏分进行了研究，发现所有馏分都对TMV具有一定的抑制作用[13]。【本研究切入点】臭椿抗烟草花叶病毒化学成分研究多集中在根皮、果实，我们前期通过对臭椿不同部位提取物进行抗TMV活性筛选，发现臭椿枝叶提取物也具有显著的抗病毒活性，但关于臭椿枝叶抗TMV的具体活性成分还有待深入研究。【拟解决的关键问题】对臭椿枝叶化学成分及其抗TMV活性进行系统研究，为今后更好地利用臭椿资源提供参考，并为进一步开发新型植物病毒抑制剂提供理论依据。
1. 材料与方法
1.1 试验材料
植物材料：臭椿[Ailanthus altissima (Mill.) Swingle]采集于辽宁朝阳，标本存放于西南林业大学林学楼森林灾害预警与控制重点实验室。
供试病毒：TMV（U1）普通株系，繁殖于普通烟K326上，采用Googing[14]的方法进行提纯，保存于−80 ℃冰箱中，备用。
供试寄主：TMV局部枯斑寄主心叶烟（Nicotiana glutinosa），漂盘育苗，在无虫温室中培育，待烟苗长至4～6片真叶时进行活性测定。
1.2 仪器和试剂
仪器：Bruker DRX 500/600核磁共振波谱仪、Bruker HTC/ Esquire质谱仪（瑞士布鲁克公司）；N-1100旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；DL-1万用电炉（天津市赛得利斯实验分析仪器制造厂）；ZF-6三用紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）。
试剂： 8%宁南霉素水剂（德强生物股份有限公司）；MCI小孔树脂、40~70 μm葡聚糖凝胶Sephadex LH-20（瑞典Amersham Pharmacia Biotech AB公司）；正丁醇、硫酸、二甲基亚砜（DMSO）为分析纯；工业石油醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、甲醇重蒸后使用。
1.3 试验方法
1.3.1 化合物分离鉴定
臭椿枝叶30.00 kg，风干粉碎，甲醇回流提取3次，每次3 h，合并提取液，减压浓缩所得浸膏溶于蒸馏水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，减压浓缩萃取液得到正丁醇浸膏1.61 kg，经大孔树脂柱层析乙醇-水（0∶100-100∶0）梯度洗脱，获得8个馏分（Fr.1-Fr.8），洗脱比例分别为Fr.1：100%纯水洗脱得到；Fr.2:20%乙醇洗脱得到；Fr.3:30%乙醇洗脱得到；Fr.4:40%乙醇洗脱得到；Fr.5:50%乙醇洗脱得到；Fr.6:60%乙醇洗脱得到；Fr.7:80%乙醇洗脱得到；Fr.8:100%乙醇洗脱得到。前期工作表明，馏分Fr.7对TMV表现出了显著的抑制作用，所以对Fr.7进行了下一步的分离与鉴定。Fr.7通过硅胶柱层析、RP-18反向柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析、半制备高效液相色谱等方法分离得到化合物，测定化合物的NMR、MS数据并与文献进行比较确定化合物的结构。详细的分离流程见图1。
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图 1 化合物1-17的分离流程Figure 1. Flow diagram on separating chemicals in n-butanol extract of A.altissima leaves and branches1.3.2 化合物对TMV的抑制活性
采用活体半叶枯斑法测定[15]。化合物用DMSO配制成10 mg·mL−1的母液于 4 ℃保存备用，使用时用水稀释至50 μg·mL−1。选用宁南霉素作为阳性对照药物。挑选健康长势一致的心叶烟，每株挑选叶龄和叶片大小相似的3片上部叶片，用化合物处理左半叶，右半叶用相同浓度的DMSO处理作为对照，以市售宁南霉素作为阳性对照。采用3种处理方式：（1）先施药。在接种病毒前6 h将化合物涂抹在叶片上，测定化合物对寄主植物烟草的保护作用；（2）后施药。在接种病毒后6 h将化合物涂抹在叶片上，测定化合物对接种病毒烟苗的治疗作用；（3）混合施药。将化合物与病毒充分混匀30 min后接种病毒，测定化合物对病毒本身的钝化作用。用金刚砂摩擦接种病毒，接种10 min后用蒸馏水将金刚砂洗净，将烟苗置于无虫温室中培养，3～4 d后待枯斑症状明显时，统计试验结果，并按以下公式计算抑制率。 抑制率/%=[（对照平均枯斑数-处理平均枯斑数）/对照平均枯斑数]×100。
1.3.3 数据处理
采用 SPSS 20.0 统计软件（One-Way ANOVA，Duncan post hoc test P＜0.05）进行多重比较分析。
2. 结果与分析
2.1 化合物分离鉴定
从臭椿枝叶正丁醇萃取物中分离并鉴定化合物17个：山奈酚（Kaempferol） (1)、(2S)-3-O-Octadeca-9Z,12Z,15Z-trienoylgycery-O-β-D-galactopyranoside (2)、正二十六烷（Hexacosane） (3)、6,9,12-Octadecatrienoic acid (4)、Eichlerianic acid (5)、 Colocasinol A (6)、咖啡酸二十烷酯（Caffeic acid eicosanyl ester） (7)、Acernikol (8)、(−)-Sakuyayesinol (9)、(14S,17S,20S,24R)-20,24,25-trihydroxy-14,17-cylomalabarican-3-one (10)、Pinnata E(11)、morin-3-O-α-rhamnopyranoside(12)、Trans-syringin (13)、姜糖脂A（Gingerglycolipid A） (14)、姜糖脂B（Gingerglycolipid B） (15)、benzyl 2-O-β-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-2,6-dihydroxy-benzoate (16)、picrorhizoside C (17)[16-31]。其中化合物1、12为黄酮类化合物；化合物2、14、15为半乳糖脂类化合物；化合物4为脂肪酸类化合物；化合物5、10为三萜类化合物；化合物6、8、9为木脂素类化合物；化合物7、13为苯丙素类化合物。
2.2 化合物对TMV的抑制活性
2.2.1 保护作用
先施药结果（表1）表明，17个化合物对TMV均有一定抑制作用，化合物10对TMV侵染烟草的保护作用最强，抑制率为39.77%；显著差异分析表明，化合物4、11、14与化合物10无显著差异，抑制率分别为35.65%、37.02%、36.02%，其余化合物抑制率12.66%~34.25%，均低于阳性对照宁南霉素（55.19%），化合物2、4、10对TMV初侵染的保护作用结果如图2所示，可以看出这三个化合物对TMV具有一定的抑制作用。
表 1 化合物1～17对TMV的保护作用Table 1. Anti-TMV effects of 17 compounds化合物
Compound处理平均
枯斑数
Local lesions of
treatment对照平均
枯斑数
Local lesions of
controlP值
P value抑制率
Inhibition
rate/%1 18.33±5.51 24.00±7.55 0.35 23.42±1.63 g 2 16.33±8.02 24.67±12.01 0.37 34.25±4.71 cd 3 12.33±4.04 14.33±5.03 0.62 13.41±2.34 h 4 13.33±4.04 21.00±7.21 0.18 35.65±4.35 bc 5 17.67±6.51 23.00±7.55 0.41 23.89±3.47 g 6 14.33±7.09 22.00±12.12 0.40 33.14±5.19 cd 7 19.67±4.04 29.00±5.57 0.07 32.30±0.96 de 8 22.00±7.00 29.33±9.87 0.35 24.56±2.16 fg 9 12.67±7.37 17.67±10.02 0.52 28.72±1.21 ef 10 14.67±6.51 24.33±11.06 0.26 39.77±4.36 b 11 15.67±7.02 25.00±11.53 0.30 37.02±1.14 bc 12 27.33±14.74 31.00±15.87 0.78 12.66±2.85 h 13 20.33±5.03 31.00±9.17 0.16 33.80±5.78 cd 14 12.33±4.16 19.00±4.58 0.14 36.02±5.96 bc 15 11.33±5.69 15.67±6.66 0.44 29.69±8.90 de 16 11.00±3.00 15.00±4.00 0.24 26.75±0.48 ef 17 13.00±6.00 18.33±9.50 0.46 27.38±4.97 ef 宁南霉素
（Ningnanmycin）3.67±1.73 8.33±3.79 0.02 55.19±1.30 a 数据为3次重复取平均值；化合物质量浓度为50 μg·mL−1；不同字母表示在5%水平显著，下同。
Data are averages of triplicate; mass concentration at 50 μg·mL−1; data with different letters indicate significance at 5% level.Same for below.![]()
图 3 化合物2、7和11对TMV侵染的治疗效应a：化合物2 的治疗作用；b：化合物7的治疗作用；c：化合物11的治疗作用。Figure 3. Curative effects of Compounds 2, 7, and 11 against TMV infectiona: Curative effect of Compound 2; b: Curative effect of Compound 7; c: Curative effect of Compound 11;2.2.2 治疗作用
后施药结果（表2）表明，各化合物对TMV的侵染都具有一定的治疗作用，抑制率介于17.41%~47.11%，均低于宁南霉素53.01%，其中化合物2和12的治疗作用较好，抑制率分别为46.45%、47.11%，显著高于其他化合物，由图3可以看出化合物2、7、11对TMV的侵染具有一定的治疗作用，化合物2的抑制作用最为明显。
表 2 化合物1～17对TMV的治疗作用Table 2. Anti-TMV effects of 17 compounds on infected tissue化合物
Compound处理平均
枯斑数
Local lesions of
treatment对照平均
枯斑数
Local lesions of
control
抑制率
Inhibition
rate/%1 17.33±4.73 22.67±5.86 23.74±1.41 f 2 16.67±8.33 31.00±15.13 46.45±0.81 b 3 16.00±6.83 22.25±10.40 27.06±3.33 f 4 13.33±6.81 17.67±8.33 25.39±2.76 f 5 13.33±4.04 17.67±5.13 24.68±1.82 f 6 17.67±6.51 24.00±8.54 26.56±1.50 f 7 23.33±6.35 34.33±10.02 31.70±3.56 ef 8 19.00±3.00 26.67±5.03 28.48±2.40 f 9 14.00±6.56 21.33±10.07 34.24±0.84 de 10 26.33±4.51 41.67±8.62 36.50±2.35 d 11 18.67±3.79 33.33±7.57 43.81±1.26 c 12 16.50±5.26 31.50±10.41 47.11±4.21 b 13 23.00±4.00 28.67±5.69 19.50±4.18 g 14 14.33±8.02 19.00±11.00 24.24±2.88 f 15 26.00±7.55 36.33±10.50 28.38±1.92 f 16 12.67± 5.51 15.33±6.66 17.41±0.76 g 17 10.33± 4.16 14.00±6.25 25.26±3.18 f 宁南霉素
（ningnanmycin）16.00± 2.00 34.33±6.51 53.01±3.05 a 2.2.3 钝化作用
混合施药结果（表3）表明，化合物6、8、13、14对TMV具有较强的钝化活性，钝化的抑制率分别达64.02%、57.87%、65.18%、63.40%，与阳性对照宁南霉素（61.72%）差异不显著，表明化合物6、8、13、14在体外能作用于病毒，由图4可以看出化合物6、13、14对TMV具有显著的钝化作用，其中化合物14为从臭椿中首次分离得到的半乳糖脂化合物，其他化合物对TMV均具有一定的抑制作用，抑制率介于18.74%~45.86%。
表 3 化合物1-17对TMV的钝化作用Table 3. TMV inactivation effects of 17 compounds化合物
Compound处理平均
枯斑数
Local lesions of
treatment对照平均
枯斑数
Local lesions of
controlP值
P
value抑制率
Inhibition
rate/%1 12.33±3.51 27.67±6.43 0.02 55.72±4.61 b 2 21.33±3.79 29.00±6.08 0.13 26.04±2.9 ef 3 14.67±3.51 22.00±7.00 0.18 32.14±5.64 de 4 9.33±4.51 15.00±7.55 0.32 37.45±1.71 cd 5 13.67±7.51 20.67±12.01 0.44 33.23±3.18 de 6 10.33±3.51 28.33±7.51 0.02 64.02±2.79 a 7 22.00±6.25 40.33±9.29 0.04 45.86±3.64 c 8 22.33±5.69 53.00±13.53 0.02 57.87±2.01 ab 9 19.00±2.00 30.00±4.36 0.02 36.33±4.31 cd 10 24.67±8.33 42.00±10.82 0.09 42.03±4.42 c 11 14.67±3.21 26.33±5.51 0.03 44.39±0.92 c 12 26.33±10.02 40.00±16.52 0.28 33.65±3.05 de 13 9.00±1.00 26.00±3.61 0.001 65.18±3.79 a 14 16.33±3.21 45.33±6.81 0.002 63.40±9.21 ab 15 25.67±1.53 31.67±3.06 0.03 18.74±3.61 f 16 27.00±8.19 43.67±15.04 0.16 37.55±3.32 cd 17 20.00±3.61 30.67±5.51 0.04 34.77±2.47 cd 宁南霉素
（ningnanmycin）5.67±1.53 15.00±1.53 0.07 61.72±1.98 ab ![]()
图 4 化合物6、13和14对TMV侵染的钝化作用a化合物6 的钝化作用；b化合物13 的钝化作用；c化合物14的钝化作用Figure 4. TMV-inactivation effects of Compounds 6, 13, and 14a: TMV-inactivation effect of Compound 6; b: inactivation effect of Compound 13; c: inactivation effect of compound 14.3. 讨论与结论
从植物中分离化合物，筛选具有抗病毒活性的化合物，已经被证实是一种有效对抗植物病毒的方法[4]。臭椿中含有生物碱、苦木素、三萜、黄酮、酚酸、苯丙素、木脂素等多种化学成分，苦木素被认为是臭椿的化学分类指标和主要活性成分，研究发现一些苦木素、木脂素和分类化合物对TMV具有显著的抑制作用[12]，但以往对臭椿抗TMV化学成分的研究主要集中在臭椿树皮、枝叶提取物，对臭椿枝叶抗TMV活性成分未见相关报道，本研究在前人研究的基础上，发现臭椿枝叶提取物对TMV也具有一定的抑制作用，并对其具体化学成分进行分离鉴定，从臭椿叶的正丁醇提取物中分离得到17个单体化合物，其中化合物2、14、15为首次从该植物中分离得到，发现了木脂素类化合物、苯丙素类化合物、半乳糖脂类化合物也具有潜在的抗TMV活性。通过半叶枯斑法首次对从臭椿枝叶中分离得到的化合物1~17从保护、治疗、钝化等3个方面进行抗TMV活性测定，结果表明17个化合物对TMV均具有一定的保护作用，其中保护作用最好的是三萜类化合物10，抑制率为39.77%，在TMV侵染前施用化合物10能够起到预防的作用，提高植物的耐病性，降低TMV的侵染力；半乳糖脂类化合物2对TMV的治疗作用最好，抑制率为46.45%，病毒的增殖过程包括核酸复制、病毒蛋白表达等，通过施用化合物2作用于病毒核酸，使其不能复制，从而抑制病毒增殖[32]。本研究的3种作用方式中，抗TMV活性较为显著的是钝化作用，化合物可将病毒暂时或永久性的钝化来阻止TMV对寄主植物的侵染[33]，17个化合物对TMV都有一定的钝化作用，其中木脂素类化合物6、木脂素类化合物8、苯丙素类化合物13和半乳糖脂类化合物14 对TMV具有较强的钝化活性，钝化的抑制率分别达64.02%、57.87%、65.18%、63.40%，与阳性对照宁南霉素（61.72%）钝化效果相当，差异不显著。先前的学者对臭椿根皮、果实化学成分的研究发现的抗TMV活性显著的化合物大部分都是苦木素类、木脂素和酚酸类化合物，本研究首次对臭椿枝叶的化学成分进行了抗烟草花叶病毒活性研究，化学成分主要为三萜、黄酮、脂肪酸、苯丙素、木脂素、半乳糖脂，并发现首次从臭椿枝叶中分离得到半乳糖脂类化合物14对TMV具有显著的钝化作用，抑制率为65.18%，与前人从臭椿根皮中分离得到的抗TMV活性显著的苦木素的相当[10]，丰富了臭椿植物的抗烟草花叶病毒活性成分。目前的研究结果显示，臭椿根皮、果实中已经发现了大量抗TMV活性显著的苦木素类等化合物，而对于臭椿枝叶中发现的抗TMV活性物质还相对较少，有待于进一步的研究。
植物源化合物能使病毒核酸、外壳蛋白、病毒粒子及其相关酶，使其不能复制，从而抑制病毒增殖。在钝化作用中，活性物质可能在植物体外通过作用于病毒本身和其侵染位点来抑制TMV的初侵染[32]；多数植物病毒抑制剂的作用方式是直接作用于病毒，将病毒钝化，或多种机理制共同起作用，本研究中木脂素类化合物6、木脂素类化合物8、苯丙素类化合物13和半乳糖脂类化合物14对TMV具有显著的体外钝化作用的同时，对TMV也具有一定的保护、治疗作用，具体的作用机制有待进一步研究。本研究丰富了臭椿中的化学成分及生物活性内容，发现木脂素类化合物、苯丙素类化合物和半乳糖脂类化合物具有潜在的抗TMV活性，今后可深入研究其抗病毒机制。
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图 1 化合物1-17的分离流程
Figure 1. Flow diagram on separating chemicals in n-butanol extract of A.altissima leaves and branches
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图 3 化合物2、7和11对TMV侵染的治疗效应
a：化合物2 的治疗作用；b：化合物7的治疗作用；c：化合物11的治疗作用。
Figure 3. Curative effects of Compounds 2, 7, and 11 against TMV infection
a: Curative effect of Compound 2; b: Curative effect of Compound 7; c: Curative effect of Compound 11;
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图 4 化合物6、13和14对TMV侵染的钝化作用
a化合物6 的钝化作用；b化合物13 的钝化作用；c化合物14的钝化作用
Figure 4. TMV-inactivation effects of Compounds 6, 13, and 14
a: TMV-inactivation effect of Compound 6; b: inactivation effect of Compound 13; c: inactivation effect of compound 14.
表 1 化合物1～17对TMV的保护作用
Table 1 Anti-TMV effects of 17 compounds
化合物
Compound处理平均
枯斑数
Local lesions of
treatment对照平均
枯斑数
Local lesions of
controlP值
P value抑制率
Inhibition
rate/%1 18.33±5.51 24.00±7.55 0.35 23.42±1.63 g 2 16.33±8.02 24.67±12.01 0.37 34.25±4.71 cd 3 12.33±4.04 14.33±5.03 0.62 13.41±2.34 h 4 13.33±4.04 21.00±7.21 0.18 35.65±4.35 bc 5 17.67±6.51 23.00±7.55 0.41 23.89±3.47 g 6 14.33±7.09 22.00±12.12 0.40 33.14±5.19 cd 7 19.67±4.04 29.00±5.57 0.07 32.30±0.96 de 8 22.00±7.00 29.33±9.87 0.35 24.56±2.16 fg 9 12.67±7.37 17.67±10.02 0.52 28.72±1.21 ef 10 14.67±6.51 24.33±11.06 0.26 39.77±4.36 b 11 15.67±7.02 25.00±11.53 0.30 37.02±1.14 bc 12 27.33±14.74 31.00±15.87 0.78 12.66±2.85 h 13 20.33±5.03 31.00±9.17 0.16 33.80±5.78 cd 14 12.33±4.16 19.00±4.58 0.14 36.02±5.96 bc 15 11.33±5.69 15.67±6.66 0.44 29.69±8.90 de 16 11.00±3.00 15.00±4.00 0.24 26.75±0.48 ef 17 13.00±6.00 18.33±9.50 0.46 27.38±4.97 ef 宁南霉素
（Ningnanmycin）3.67±1.73 8.33±3.79 0.02 55.19±1.30 a 数据为3次重复取平均值；化合物质量浓度为50 μg·mL−1；不同字母表示在5%水平显著，下同。
Data are averages of triplicate; mass concentration at 50 μg·mL−1; data with different letters indicate significance at 5% level.Same for below.
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表 2 化合物1～17对TMV的治疗作用
Table 2 Anti-TMV effects of 17 compounds on infected tissue
化合物
Compound处理平均
枯斑数
Local lesions of
treatment对照平均
枯斑数
Local lesions of
control
抑制率
Inhibition
rate/%1 17.33±4.73 22.67±5.86 23.74±1.41 f 2 16.67±8.33 31.00±15.13 46.45±0.81 b 3 16.00±6.83 22.25±10.40 27.06±3.33 f 4 13.33±6.81 17.67±8.33 25.39±2.76 f 5 13.33±4.04 17.67±5.13 24.68±1.82 f 6 17.67±6.51 24.00±8.54 26.56±1.50 f 7 23.33±6.35 34.33±10.02 31.70±3.56 ef 8 19.00±3.00 26.67±5.03 28.48±2.40 f 9 14.00±6.56 21.33±10.07 34.24±0.84 de 10 26.33±4.51 41.67±8.62 36.50±2.35 d 11 18.67±3.79 33.33±7.57 43.81±1.26 c 12 16.50±5.26 31.50±10.41 47.11±4.21 b 13 23.00±4.00 28.67±5.69 19.50±4.18 g 14 14.33±8.02 19.00±11.00 24.24±2.88 f 15 26.00±7.55 36.33±10.50 28.38±1.92 f 16 12.67± 5.51 15.33±6.66 17.41±0.76 g 17 10.33± 4.16 14.00±6.25 25.26±3.18 f 宁南霉素
（ningnanmycin）16.00± 2.00 34.33±6.51 53.01±3.05 a
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表 3 化合物1-17对TMV的钝化作用
Table 3 TMV inactivation effects of 17 compounds
化合物
Compound处理平均
枯斑数
Local lesions of
treatment对照平均
枯斑数
Local lesions of
controlP值
P
value抑制率
Inhibition
rate/%1 12.33±3.51 27.67±6.43 0.02 55.72±4.61 b 2 21.33±3.79 29.00±6.08 0.13 26.04±2.9 ef 3 14.67±3.51 22.00±7.00 0.18 32.14±5.64 de 4 9.33±4.51 15.00±7.55 0.32 37.45±1.71 cd 5 13.67±7.51 20.67±12.01 0.44 33.23±3.18 de 6 10.33±3.51 28.33±7.51 0.02 64.02±2.79 a 7 22.00±6.25 40.33±9.29 0.04 45.86±3.64 c 8 22.33±5.69 53.00±13.53 0.02 57.87±2.01 ab 9 19.00±2.00 30.00±4.36 0.02 36.33±4.31 cd 10 24.67±8.33 42.00±10.82 0.09 42.03±4.42 c 11 14.67±3.21 26.33±5.51 0.03 44.39±0.92 c 12 26.33±10.02 40.00±16.52 0.28 33.65±3.05 de 13 9.00±1.00 26.00±3.61 0.001 65.18±3.79 a 14 16.33±3.21 45.33±6.81 0.002 63.40±9.21 ab 15 25.67±1.53 31.67±3.06 0.03 18.74±3.61 f 16 27.00±8.19 43.67±15.04 0.16 37.55±3.32 cd 17 20.00±3.61 30.67±5.51 0.04 34.77±2.47 cd 宁南霉素
（ningnanmycin）5.67±1.53 15.00±1.53 0.07 61.72±1.98 ab
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