Effects of Biochar Addition in Soil on Growth and Nutrient-uptake of Monocropped Cucumber Plants
-
摘要:目的 添加生物炭在改善土壤结构、提高土壤肥力，促进微生物活性和功能等方面发挥作用，并在消减作物连作障碍中起正向调控作用，但最大程度消减连作土壤障碍的最适生物炭添加量还不清楚。因此，本试验探究添加不同比例生物炭对黄瓜生长及营养吸收的作用，以期明确适宜生物炭添加量，为消减黄瓜连作障碍及设施农业健康发展提供新思路。方法 以黄瓜（Cucumis sativus L.）为试验材料，通过盆栽试验，添加质量分数分别为0.5%、1%、2%、3%的生物炭，并以不添加生物炭处理为对照，研究添加不同量生物炭对黄瓜生长及营养吸收的影响。结果 随着生物炭施加量的增加黄瓜幼苗干鲜重呈先增加后降低的趋势，其中添加1%生物炭处理的黄瓜幼苗干鲜重最高。同时，随着生物炭施加量的增加黄瓜幼苗植株氮、磷、钾质量浓度和含量也呈现出先增加后降低的趋势，添加1%生物炭处理的黄瓜幼苗植株氮、磷、钾质量浓度最高，均显著高于对照处理（P＜0.05）。随着生物炭施加量的增加，黄瓜连作土壤pH以及土壤有机碳含量呈现上升趋势，与对照相比，添加2%生物炭显著提高了土壤速效钾的含量（P＜0.05），添加2%、3%生物炭处理显著提高了土壤有效磷的含量（P＜0.05），添加1%生物炭处理显著提高了土壤碱解氮的含量（P＜0.05）。结论 添加适宜量的生物炭在促进黄瓜生长方面发挥了重要作用，在连作土壤中添加质量分数为1%的生物炭，对黄瓜生长的促进作用最大，而添加生物炭含量过高时会抑制黄瓜的生长。Abstract:Objective Effects of adding biochar in soil on the growth and nutrient-uptake of continuous monocropped cucumber plants were studied.Methods A pot experiment was performed on cucumber seedlings grown in soil without (CK) or with various concentrations of biochar at 0.5%, 1%, 2%, and 3%. Growth and nutrients absorption by the plants were monitored to determine the effects and optimal application of the soil conditioner.Results The fresh and dry weights as well as the nitrogen, phosphorus, and potassium contents of the cucumber seedlings increased significantly as the amount of added biochar increased but declined at higher levels of the addition. With 1% added biochar in soil, the biomass and the contents of nitrogen, phosphorus, and potassium in the plants peaked. The pH and organic carbons in soil underwent an upward trend with increasing biochar. Compared to CK, adding 2% biochar to the potting soil significantly improved the contents of available potassium, 2% and 3% significantly elevated that of available phosphorus, and 1% significantly rose that of alkali hydrolysis nitrogen.Conclusion As commonly known, presence of biochar can improve the structure, fertility, and microbial activity in soil. In this study, it was found that an addition of the soil conditioner at 1% level achieved not only the desirable effects on the soil but also on the growth of continuous monocropped cucumber plants.
-
Keywords:
- Biochar /
- cucumber /
- plant growth /
- soil nutrients /
- plant nutrient uptake
-
0. 引言
【研究意义】沙门氏菌是与人类健康相关的最重要的食源性致病菌之一，因其导致的食物中毒病例占细菌性食物中毒病例的前2位[1]。据世界卫生组织不完全统计，每年至少有1600万沙门氏菌感染病例，导致约60万人死亡。仅2005 — 2011年国外发生的19起蔬菜因食源性致病菌污染而引起的疾病案例中，有11起的致病元凶是沙门氏菌[2]。在我国沙门氏菌也是食源性疾病的主要病原体，其中80%左右的细菌性食源中毒事件为沙门氏菌污染所致[3]。目前国内已发现多种蔬菜中存在沙门氏菌污染情况[4-6]。蔬菜产地环境的质量安全是蔬菜质量安全的前提，其中灌溉水源又是产地环境中最重要因素之一，但蔬菜从农田到餐桌的每个环节均可能发生沙门氏菌污染[7-8]，近年来，随着对蔬菜供应链环节中沙门氏菌污染风险和污染来源的深入研究，发现蔬菜沙门氏菌污染主要还是发生在栽培环节，特别是灌溉水源中沙门氏菌而导致的蔬菜沙门氏菌污染的风险最大，也是防控蔬菜中沙门氏菌污染重要节点[8-12]。【前人研究进展】沙门氏菌侵袭蛋白A (invA)基因是最常用的沙门氏菌分子检测靶标，根据invA基因序列已成功开发出了多个探针法的沙门氏菌实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）检测方法。González-Escalona等[13]根据invA序列设计沙门氏菌qPCR检测引物，在鲜食农产品中沙门氏菌最低检出限为0.08 cfu·g−1，鸡蛋中沙门氏菌最低检出限为0.05 cfu·g−1；Siala等[14]以invA序列为靶点设计了特异性qPCR检测引物对500种食物中沙门氏菌污染进行检测，发现禽肉、牛奶、红肉、鱼、蛋糕、乳制品、烤肉等食物中存在不同程度沙门氏菌污染；Bai等[15]采用以invA基因为靶基因的qPCR方法和富集培养方法对牛淋巴结中沙门氏菌污染进行检测，发现qPCR方法比富集培养方法具有更高的灵敏度。针对沙门氏菌的检测主要采用中华人民共和国国家标准《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）的方法[16]，不但步骤繁琐且耗时费力，而最终检测结果也仅为定性分析。而qPCR方法则可以进行定量分析，目前已成功应用于沙门氏菌、副溶血弧菌、阴沟肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌等多种病原菌的定量分析[17-23]。【本研究切入点】目前有关沙门氏菌qPCR检测方法研究多基于探针法，而基于嵌合荧光法的沙门氏菌定量检测方法却鲜有研究报道。【拟解决的关键问题】以沙门氏菌特有侵袭蛋白A（invasion protein A）基因为靶基因，建立基于SYBR Green I嵌合荧光法的沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法，以期满足灌溉水源中沙门氏菌污染的定量检测需求，为蔬菜产地环境中沙门氏菌污染的防控和蔬菜质量安全的提升提供技术支撑。
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 菌株来源
供试菌株包括7个微生物菌株，其中1个为鼠伤寒沙门氏菌作为阳性对照菌株，其余6个菌株为干扰菌株。7个菌株来自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）、中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）和美国典型培养物保存中心（ATCC）。具体菌株编号及来源等信息见表1。
表 1 供试菌株Table 1. Salmonella strains applied for experimentation序号
No.菌株名称
Strains name拉丁学名
Scientific name of strains菌株编号
Strains number菌株来源
Source of strains1 鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella typhimurium 1.1174 CGMCC 2 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 25923 ATCC 3 大肠埃希氏菌 Escherichia coli 25922 ATCC 4 阿氏肠杆菌 Enterobacter asburiae 1.876 CGMCC 5 大肠埃希氏菌O157:H7 Escherichia coli O157:H7 10907 CICC 6 单核细胞增生李斯特氏菌 Listeria monocytogenes 1.9136 CGMCC 7 英诺克李斯特氏菌 Listeria innocua 1.2990 CGMCC 1.1.2 材料与试剂
胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）、蛋白胨缓冲水（BPW）和无菌均质袋（北京陆桥技术有限责任公司）；TB Green® Premix Ex Taq™ （Tli RNaseH Plus，日本Takara公司）；细菌基因组DNA提取试剂盒（北京天根公司）；NaCl（分析纯，阿拉丁公司）；荧光定量PCR 八联管（无锡Nest公司）。
1.1.3 仪器与设备
实时荧光定量PCR仪（BIO-RAD™ CFX96 Touch，美国伯乐公司）；拍击式均质器（easyMixTM，法国AES Chemunex公司）；台式离心机（Sigma 1-14，德国希格玛公司）；超净工作台（C2HJH-C1112B，上海智城公司）；核酸蛋白定量仪（Qubit 2，美国Thermo Scientific公司）；恒温培养箱（DHP-9082型，上海一恒）。
1.1.4 灌溉水源样品
供试灌溉水源样品采集自闽清县东桥镇绿辉蔬菜种植农场，属于当地地面径流，主要为山泉和小溪汇聚而成，使用干净的矿泉水瓶采集该处灌溉水源样品600 mL，样品3次重复，放入带有冰块的保温箱中运回实验室。具体灌溉水源理化指标：pH 7.32，总氮（TN）0.85 mg·L−1，总磷（TP）0.037 mg·L−1，高锰酸钾指数（CODMn）10.51 mg·L−1，氨氮（NH4-N）0.35 mg·L−1。
1.2 试验方法
1.2.1 引物设计
以沙门氏菌侵袭蛋白A （invA）基因为靶基因（Genbank Accession: M90846.1），采用Primer Premier 5.0软件设计了1对qPCR引物用于沙门氏菌实时荧光定量检测，引物序列invA-F: 5'-TATCGTGACCCGCGTAAATG-3，'invA-R: 5'- GGGAATCCCGGCAGAGTT-3'。引物交由上海生工生物工程公司合成。
1.2.2 沙门氏菌计数及基因组DNA提取
将−70 ℃保存的沙门氏菌菌株在TSA平板内划线后，置于37 ℃培养箱倒置培养16～24 h，在5 mL TSB液体培养基中使用无菌牙签挑取TSA平板内的单个沙门氏菌菌落进行接种，置于37 ℃、160 r·min−1振荡培养16～24 h后，取1 mL震荡培养的TSB液体培养基转接于新的100 mL TSB液体培养基中，37 ℃、160 r·min−1振荡培养至OD600=0.55的对数生长期。使用无菌生理盐水以10倍浓度梯度将对数生长期菌液进行稀释后，吸取100 μL稀释液在TSA平板上进行涂布，置37 ℃培养18～24 h后计数。
吸取1 mL沙门氏菌培养菌液在台式离心机上12 000 r·min−1离心4 min，弃上清，菌体沉淀使用细菌基因组DNA提取试剂盒按步骤提取。提取的沙门氏菌基因组DNA使用Qubit 2测定DNA浓度后，置于−20 ℃保存备用。
1.2.3 qPCR反应体系和反应条件优化
qPCR反应体系：12.5 μL 2×TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)，上下游引物（10 μmol·L −1），DNA模板10 ng，灭菌超纯水补足25 μL体积；反应条件：95 ℃，30 s；95 ℃，5 s，退火温度，30 s，72 ℃，30 s，40个循环。分别对qPCR反应体系和反应条件中的引物浓度、退火温度进行优化，其中引物终浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μmol·L −1；退火温度分别设置55、56、57、58、59、60、61 ℃。每个因子设置3个重复，同时设置无菌水为模板的阴性对照，利用Bio-Rad CFX Manager软件进行数据分析，以扩增曲线获得最小的Ct值和熔解曲线不产生非特异性扩增峰为指标，确定最佳引物浓度和退火温度。
1.2.4 qPCR反应特异性检测
以鼠伤寒沙门氏菌为阳性对照菌株，其余大肠埃希氏菌、产气肠杆菌、大肠埃希氏菌O157:H7等6个菌株为干扰菌株，采取已优化的反应体系和条件对沙门氏菌qPCR反应进行特异性分析。反应结束后，以PCR管内荧光信号强弱变化来判断阴阳性，阳性具有明显的荧光扩增曲线，阴性则没有明显的荧光扩增曲线。每个菌株DNA模板均设置3个重复，同时以无菌水为模板设置阴性对照。
1.2.5 qPCR反应灵敏度检测
将沙门氏菌DNA以10倍递减稀释为1×104～1×10−2 pg·μL−1 7个质量浓度，以上述浓度的沙门氏菌DNA为模板，对沙门氏菌qPCR反应灵敏度进行检测。反应结束后，阳性应具有明显的荧光扩增曲线，阴性则没有明显的荧光扩增曲线。每个浓度的DNA模板均设置3个重复，同时以无菌水为模板设置阴性对照。
1.2.6 标准曲线的建立
取6份24 mL沙门氏菌阴性的灌溉水源样品，加入1 mL稀释至适宜质量浓度的沙门氏菌培养液，制备沙门氏菌质量浓度为0、2×100、2×101、2×102、2×103、2×104、2×105 cfu·mL−1的灌溉水源样品，然后全部转移至含225 mL蛋白胨缓冲水的无菌均质袋中，置拍击式均质器中拍打1～2 min混匀。将含不同质量浓度沙门氏菌的灌溉水源样品置37 ℃预增菌4 h后，混匀后取1 mL预增菌液10 000 r·min−1离心5 min收集菌体，使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取沙门氏菌DNA，用于灌溉水源中沙门氏菌的标准曲线建立。
以不同浓度沙门氏菌提取的DNA作为定量标准品，利用优化的qPCR反应体系和条件检测各浓度标准品的Ct值，以qPCR扩增Ct值为纵坐标，不同浓度沙门氏菌对数值为横坐标，建立Ct值与不同浓度沙门氏菌对数值线性函数关系的定量标准曲线。
1.2.7 qPCR方法与国标方法对比验证
采用qPCR方法和国标方法《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016），分别对采自全省的39份灌溉水源样品中沙门氏菌污染情况进行检测，来验证所建立的qPCR方法在灌溉水源沙门氏菌污染检测方面的准确性。
2. 结果与分析
2.1 qPCR方法的建立
分别对qPCR反应体系和反应条件中引物浓度、退火温度进行优化，确定灌溉水源中沙门氏菌qPCR检测最佳反应体系（25 μL）：12.5 μL 2×TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)，0.2 μmol·L−1 invA-F，0.2 μmol·L−1 invA-R，DNA模板10 ng，灭菌超纯水补足25 μL体积。优化退火温度后的反应条件如下：95 ℃，30 s；95 ℃，5 s，58 ℃，30 s，72 ℃，30 s，40个循环。优化的qPCR反应结果如图1所示，其扩增曲线良好反映了PCR的指数增长阶段和平台阶段，熔解曲线则只有单一扩增峰，未见非特异性扩增峰。
![]()
图 1 qPCR方法检测沙门氏菌A：qPCR荧光扩增曲线；B：qPCR溶解曲线。Figure 1. Salmonella detection by newly developed qPCR assayA: qPCR amplification curve; B: qPCR melting curve.2.2 特异性检测结果
采用优化的qPCR方法，以鼠伤寒沙门氏菌菌株和干扰菌株DNA为模板进行qPCR反应特异性分析，结果如图2所示，除鼠伤寒沙门氏菌能产生明显的扩增曲线呈现阳性结果外，其余金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌等干扰菌株DNA及无菌水阴性对照均无明显扩增曲线产生，呈现阴性结果。表明所建立的qPCR方法对沙门氏菌具有良好的特异性。
2.3 灵敏度检测结果
分别以7个不同浓度沙门氏菌DNA为模板进行扩增来验证qPCR体系的灵敏度，结果如图3所示，在每管25 μL qPCR反应体系中当沙门氏菌DNA质量浓度为1×104～1×10−1 pg·μL−1时均出现明显的荧光扩增曲线，3个平行样品间扩增曲线重复性好且Ct值＜35，而当沙门氏菌DNA质量浓度为1×10−2 pg·μL−1时，虽然也出现了荧光扩增曲线，但3个平行样品间扩增曲线重复性较差且Ct值＞35（图3），表明本qPCR反应体系的检测灵敏度为1×10−1 pg·μL−1的沙门氏菌DNA。
2.4 标准曲线结果
利用优化好的沙门氏菌qPCR反应体系和反应条件对6个10倍梯度稀释的定量标准品进行扩增，建立不同沙门氏菌浓度对数值与Ct值对应关系的定量标准曲线。结果显示，所制作的标准曲线在2×100～2×105 cfu·mL−1的Ct值相差均匀，符合qPCR的Ct值与起始浓度对数值之间的线性关系（图4）。以Ct值为纵坐标，不同沙门氏菌浓度对数值为横坐标，得出起始浓度对数值与Ct值的线性回归方程为Y=−3.3157X＋32.097，斜率约为−3.3157，截距为32.097，相关系数R2为0.999 6（图5）。在对样品进行检测时，根据其Ct值和线性方程可以计算该样品沙门氏菌浓度值。
![]()
图 4 不同浓度沙门氏菌qPCR扩增曲线Figure 4. qPCR amplification curve of detecting Salmonella at different concentrations2.5 qPCR方法与国标方法对比验证结果
采用qPCR方法和国标方法《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016），分别对采自全省的39份灌溉水源样品中沙门氏菌污染情况进行检测，来验证所建立的qPCR方法应用于蔬菜灌溉水源中沙门氏菌污染检测的准确性。结果显示（图6），2种方法均检测到1份灌溉水源沙门氏菌阳性样品，且为同一份灌溉水源样品，其余38份灌溉水源样品检测结果均显示为沙门氏菌阴性，2种方法检测结果一致，但qPCR方法在保证准确性的前提下，将检测时间由5～7 d缩短至6 h内，降低了检测强度，提高了检测效率。此外，qPCR方法检测沙门氏菌阳性灌溉水源样品的Ct值为24，根据上述灌溉水源中沙门氏菌回归方程Y=−3.3157X+32.097，计算该灌溉水源样品中污染的沙门氏菌数为277 cfu·mL−1。
![]()
图 6 qPCR扩增检测灌溉水源样品Figure 6. qPCR quantification curves of detecting Salmonella in irrigation water3. 讨论与结论
目前qPCR方法包括探针法和嵌合荧光法，探针法由于探针引物设计要求高且合成费用贵，导致探针法使用成本较高，从而限制了探针法的推广应用。而嵌合荧光法则可以使用普通PCR引物再辅以荧光染料如SYBR Green I，在引物设计上要求相对简单和使用成本上低廉，故在qPCR检测中得到越来越多应用。但SYBR Green I作为一种可结合于双链DNA（dsDNA）双螺旋小沟区域的荧光染料，在与目的扩增条带结合的同时，也会结合引物二聚体和非特异性扩增条带从而产生荧光干扰信号，因此，基于SYBR Green I嵌合荧光法的qPCR方法需要对引物浓度和退火温度进行优化，以防止引物二聚体和非特异性扩增条带的产生，同时借助溶解曲线来排除引物二聚体和非特异性扩增条带的影响。
沙门氏菌侵袭蛋白（invasion protein）基因是一类与沙门氏菌吸附和侵袭肠道上皮细胞相关的基因，包括invA-invE等多个基因，其中以invA基因的研究和应用最为广泛[13-15]。本研究根据沙门氏菌侵袭蛋白A（invA）基因序列设计1对特异性qPCR检测引物，通过对qPCR反应体系和反应条件进行优化后，建立了基于SYBR Green I嵌合荧光法的实时荧光定量PCR检测方法，其对沙门氏菌具有良好特异性，检测灵敏度为1×10−1 pg·μL−1，所制作的qPCR扩增标准曲线在2×100～2×105 cfu·mL−1有较好的线性关系，可用于沙门氏菌的定量分析。采用本qPCR方法与国标方法对39份灌溉水源样品中沙门氏菌污染进行对比检测，发现本qPCR方法与国标方法检测结果一致，表明2种检测方法具有相同的特异性和灵敏度，但在检测时间和检测效率上本qPCR方法明显优于国标方法，且能定量分析灌溉水源中沙门氏菌含量，可为蔬菜产地环境中沙门氏菌污染的防控和蔬菜质量安全的提升提供技术支撑。
-
![]()
图 1 添加生物炭对黄瓜幼苗鲜重和干重的影响
Figure 1. Effect of biochar addition on fresh and dry weights of cucumber seedlings
![]()
图 2 添加生物炭对黄瓜幼苗植株营养积累的影响
Figure 2. Effect of biochar addition on nutrient uptake by cucumber seedlings
-
[1] 张相锋, 杨晓绒, 焦子伟. 生物炭在连作障碍治理中的应用综述 [J]. 现代园艺, 2018(19):82−85. DOI: 10.3969/j.issn.1006-4958.2018.19.046 ZHANG X F, YANG X R, JIAO Z W. Review on the application of biochar in continuous cropping obstacle control [J]. Xiandai Horticulture, 2018(19): 82−85.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1006-4958.2018.19.046
[2] 石晓宇, 张婷, 贾浩, 等. 生物炭对设施土壤化学性质及黄瓜产量品质的影响 [J]. 农学学报, 2019, 9(4):59−65. SHI X Y, ZHANG T, JIA H, et al. Biochar: Effects on soil chemical properties and cucumber yield and quality in greenhouse [J]. Journal of Agriculture, 2019, 9(4): 59−65.(in Chinese)
[3] 宋为交, 贺超兴, 于贤昌, 等. 不同种植年限有机土基质的变化及其对温室黄瓜生长的影响 [J]. 应用生态学报, 2013, 24(10):2857−2862. SONG W J, HE C X, YU X C, et al. Changes of organic soil substrate properties with different cultivation years and their effects on cucumber growth in solar greenhouse [J]. Chinese Journal of Applied Ecology, 2013, 24(10): 2857−2862.(in Chinese)
[4] 武春成, 李天来, 曹霞, 等. 添加生物炭对连作营养基质理化性质及黄瓜生长的影响 [J]. 核农学报, 2014, 28(8):1534−1539. WU C C, LI T L, CAO X, et al. Physicochemical properties of nutrition medium and cucumber growth under continuous cropping [J]. Journal of Nuclear Agricultural Sciences, 2014, 28(8): 1534−1539.(in Chinese)
[5] 王彩云, 武春成, 曹霞, 等. 生物炭对温室连作土壤黄瓜生长、叶片结构及产量的影响 [J]. 北方园艺, 2018(19):23−27. WANG C Y, WU C C, CAO X, et al. Effects of biochar on growth, leaf structure and yield of cucumber in different continuous cropping years in greenhouse [J]. Northern Horticulture, 2018(19): 23−27.(in Chinese)
[6] 娄洁, 何明霞, 李晓甜, 等. 蔬菜秸秆生物炭对日光温室黄瓜连作土壤性状及植株生长的影响 [J]. 天津农业科学, 2022, 28(10):40−43,48. LOU J, HE M X, LI X T, et al. Effects of vegetable straw biochar on soil properties and plant growth of continuously cropped cucumber in solar greenhouse [J]. Tianjin Agricultural Sciences, 2022, 28(10): 40−43,48.(in Chinese)
[7] 章小勉, 刘梓毫, 郭猛, 等. 生物炭对两种植物种子萌发和幼苗生长的影响 [J]. 东北林业大学学报, 2023, 51(4):26−31, 49. ZHANG X M, LIU Z H, GUO M, et al. Effects of biochar on seed germination and seedling growth of two plants [J]. Journal of Northeast Forestry University, 2023, 51(4): 26−31, 49.(in Chinese)
[8] 武春成, 王彩云, 曹霞, 等. 不同用量生物炭对连作土壤改良及黄瓜生长的影响 [J]. 北方园艺, 2017(19):150−154. WU C C, WANG C Y, CAO X, et al. Effects of different biochar application rate on improvement of continuous cropping soil and cucumber growth [J]. Northern Horticulture, 2017(19): 150−154.(in Chinese)
[9] 陈森, 张子谦, 李婧, 等. 土壤镉污染下生物炭对白菜生长及植株镉浓度的影响 [J]. 江苏农业科学, 2018, 46(5):129−131. CHEN S, ZHANG Z Q, LI J, et al. Effects of biochar on growth and cadmium concentration of Chinese cabbage under soil cadmium contamination [J]. Jiangsu Agricultural Sciences, 2018, 46(5): 129−131.(in Chinese)
[10] 赵淑文, 胡云, 李明, 等. 生物炭对设施黄瓜根际土壤菌群结构及植株生长的影响 [J]. 中国瓜菜, 2018, 31(3):19−23. ZHAO S W, HU Y, LI M, et al. Effect of biological carbon on growth and bacterial communities of rhizosphere soil of facility cucumber [J]. China Cucurbits and Vegetables, 2018, 31(3): 19−23.(in Chinese)
[11] WANG C Y, WU C C, CAO X, et al. Effects of biochar on soil nutrition and microbial community diversity under continuous cultivated cucumber soils in greenhouse [J]. The Journal of Applied Ecology, 2019, 30(4): 1359−1366.
[12] 姜悦, 张紫涵, 贾彦哲, 等. 不同施磷水平对分蘖洋葱伴生番茄幼苗生长及菌根侵染的影响 [J]. 福建农业学报, 2022, 37(3):326−334. JIANG Y, ZHANG Z H, JIA Y Z, et al. Effects of phosphorus fertilizations on growth and root mycorrhizal infection of tomato seedlings intercropped with potato-onion [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2022, 37(3): 326−334.(in Chinese)
[13] PEZZOLESI T P, ZARTMAN R E, HICKEY M G. Effects of storage methods on chemical values of waterlogged soils [J]. Wetlands, 2000, 20(1): 189−193. DOI: 10.1672/0277-5212(2000)020[0189:EOSMOC]2.0.CO;2
[14] 王锡增, 徐浴力, 周昕, 等. 玉米青秸秆还田对土壤理化性状及连作黄瓜生长发育的影响 [J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版), 2022, 43(6):37−43,110. WANG X Z, XU Y L, ZHOU X, et al. Effects of maize straw returning on soil physicochemical properties and continuous cropping cucumber growth and development [J]. Journal of Yangzhou University (Agricultural and Life Science Edition), 2022, 43(6): 37−43,110.(in Chinese)
[15] JONES D L, ROUSK J, EDWARDS-JONES G, et al. Biochar-mediated changes in soil quality and plant growth in a three year field trial [J]. Soil Biology and Biochemistry, 2012, 45: 113−124. DOI: 10.1016/j.soilbio.2011.10.012
[16] 孙喜军, 吕爽, 高莹, 等. 蚯蚓粪对作物连作障碍抑制作用研究进展 [J]. 土壤, 2020, 52(4):676−684. SUN X J, LÜ S, GAO Y, et al. Research progresses on inhibition effect of vermicompost to continuous cropping obstacles [J]. Soils, 2020, 52(4): 676−684.(in Chinese)
[17] 冯冰, 吴英, 李磊, 等. 生物炭对土壤性质及黄瓜和生菜幼苗生长的影响 [J]. 现代农业科技, 2017(24):54−55,57. DOI: 10.3969/j.issn.1007-5739.2017.24.032 FENG B, WU Y, LI L, et al. Effect of biochar on soil properties and the growth of cucumber and lettuce seedlings [J]. Modern Agricultural Science and Technology, 2017(24): 54−55,57.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1007-5739.2017.24.032
[18] 刘学方, 仇美华, 郁洁, 等. 秸秆及生物炭部分替代化肥对温室连作黄瓜生长与土壤性质的影响 [J]. 安徽农业科学, 2022, 50(23):144−150. LIU X F, QIU M H, YU J, et al. Effects of straw biochar partially replacing chemical fertilizer on growth of continuous cropping cucumber and soil properties in greenhouse [J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2022, 50(23): 144−150.(in Chinese)
[19] 王彩云, 武春成, 曹霞, 等. 生物炭对温室黄瓜不同连作年限土壤养分和微生物群落多样性的影响 [J]. 应用生态学报, 2019, 30(4):1359−1366. WANG C Y, WU C C, CAO X, et al. Effects of biochar on soil nutrition and microbial community diversity under continuous cultivated cucumber soils in greenhouse [J]. Chinese Journal of Applied Ecology, 2019, 30(4): 1359−1366.(in Chinese)
[20] 高丹美, 吴凤芝, 周新刚. 活性炭对土壤酶活性及黄瓜幼苗生长的影响 [J]. 新疆农业科学, 2014, 51(6):1154−1161. GAO D M, WU F Z, ZHOU X G. Effects of activated carbon on soil enzyme activities and cucumber seeding growth [J]. Xinjiang Agricultural Sciences, 2014, 51(6): 1154−1161.(in Chinese)
[21] WANG F L, WANG X X, SONG N N. Biochar and vermicompost improve the soil properties and the yield and quality of cucumber (Cucumis sativus L. ) grown in plastic shed soil continuously cropped for different years [J]. Agriculture, Ecosystems & Environment, 2021, 315: 107425.
[22] 周冉冉, 马司光, 张文晶, 等. 生物炭与生物基质对设施黄瓜连作土壤改良效果研究 [J]. 江西农业大学学报, 2021, 43(3):537−546. ZHOU R R, MA S G, ZHANG W J, et al. The effect of biochar and biological substrate on soil amending under protected cucumber continuous cropping [J]. Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis, 2021, 43(3): 537−546.(in Chinese)
[23] 王雪玉, 刘金泉, 胡云, 等. 生物炭对黄瓜根际土壤细菌丰度、速效养分含量及酶活性的影响 [J]. 核农学报, 2018, 32(2):370−376. WANG X Y, LIU J Q, HU Y, et al. Effect of biochar on microorganism, nutrient content and enzyme activity of cucumber rhizosphere soil [J]. Journal of Nuclear Agricultural Sciences, 2018, 32(2): 370−376.(in Chinese)
[24] QUILLIAM R S, MARSDEN K A, GERTLER C, et al. Nutrient dynamics, microbial growth and weed emergence in biochar amended soil are influenced by time since application and reapplication rate [J]. Agriculture, Ecosystems & Environment, 2012, 158: 192−199.
[25] 张清梅, 刘金泉, 李明, 等. 生物炭对黄瓜根际土壤养分和酶活性的影响 [J]. 北方园艺, 2017(19):131−136. ZHANG Q M, LIU J Q, LI M, et al. Effect of biological carbon on soil nutrient and enzyme activity of facility cucumber [J]. Northern Horticulture, 2017(19): 131−136.(in Chinese)
[26] KLOSS S, ZEHETNER F, WIMMER B, et al. Biochar application to temperate soils: Effects on soil fertility and crop growth under greenhouse conditions [J]. Journal of Plant Nutrition and Soil Science, 2014, 177(1): 3−15. DOI: 10.1002/jpln.201200282
[27] 程效义, 兰宇, 任晓峰, 等. 生物炭对连作设施土壤酶活性及黄瓜根系性状的影响 [J]. 沈阳农业大学学报, 2017, 48(4):418−423. CHENG X Y, LAN Y, REN X F, et al. Effects of biochar on enzymatic activities and root characteristics of cucumber in continuous cropping soil of greenhouse [J]. Journal of Shenyang Agricultural University, 2017, 48(4): 418−423.(in Chinese)
[28] 杨焕焕, 李茂森, 王丽渊, 等. 生物炭对烤烟成熟期土壤养分及根际细菌群落结构的影响 [J]. 华中农业大学学报, 2021, 40(5):62−71. YANG H H, LI M S, WANG L Y, et al. Effects of biochar on soil nutrients and rhizosphere bacterial community structure of flue-cured tobacco at maturity stage [J]. Journal of Huazhong Agricultural University, 2021, 40(5): 62−71.(in Chinese)
[29] 胡云, 李明, 李登明, 等. 秸秆覆盖还田对黄瓜土壤碳氮比和微生物的影响 [J]. 北方园艺, 2016(19):180−183. HU Y, LI M, LI D M, et al. Effect of straw coverage on C/N and microorganisms of cucumber soil [J]. Northern Horticulture, 2016(19): 180−183.(in Chinese)
[30] 顾美英, 唐光木, 刘洪亮,等. 施用棉秆炭对新疆连作棉花根际土壤微生物群落结构和功能的影响 [J]. 应用生态学报, 2016, 27(01):173−181. GU M Y, TANG G M, LIU H L, et al. Effects of cotton stalk biochar on microbial community structure and function of continuous cropping cotton rhizosphere soil in Xinjiang, China [J]. Chinese Journal of Applied Ecology, 2016, 27(01): 173−181.(in Chinese)
-
期刊类型引用(1)
1. 张捷，李献，张瑞，刘雨蒙，明若阳，陈佳，周巍. SYBR Green Ⅰ染料-实时荧光定量聚合酶链式反应法检测发酵乳中的霉菌和酵母含量. 食品安全质量检测学报. 2024(16): 31-38 . 
百度学术
其他类型引用(1)
下载:
计量
- 文章访问数:
- HTML全文浏览量:
- PDF下载量:
- 被引次数: 2
