Authentication of F1 Gerbera jamesonii Hybrids Using SSR Molecular Markers
-
摘要:目的 应用SSR分子标记技术鉴定非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus）F1代杂种的真实性，以期为非洲菊新品种（系）杂种的真实性鉴定提供方法。方法 选用非洲菊罗德里、热带草原及其65个正反交F1代杂种，部分自主选育非洲菊新品种（系）及其亲本为材料，从非洲菊转录组中发掘的65对SSR引物中筛选条带清晰、重复性好、亲本间无相同等位基因位点的引物，运用于非洲菊F1代杂种的真实性鉴定。结果 65对SSR引物中，有26对引物在非洲菊亲本罗德里、热带草原间具有多态性，多态性比例达40%，其中，g24、g32、g38、g64这4对引物扩增非洲菊亲本间无相同等位基因位点，条带清晰可辨，扩增正反交后代都包含双亲的各一条带，都能将65个正反交后代鉴定为真杂种。引物g24、g04、g44、g39扩增非洲菊新品种（系）均包含双亲的各一条带，可分别将非洲菊新品种（系）明卉粉黛、明卉红颜、魅粉、幻彩鉴定为真杂种。结论 SSR分子标记在非洲菊亲本中多态性丰富，可应用于非洲菊杂交后代真实性鉴定，能够有效辅助非洲菊新品种鉴定和选育。Abstract:Objective SSR molecular markers were used to verify the authenticity of F1 hybrids of Gerbera jamesonii Bolus. [Methods] From Rodrigo, Savannah, and their progenies, 65 reciprocal F1 hybrids of gerbera, primers with clear bands, high repeatability, and free of identical allele between parents were selected. Based on the transcriptomes, applicable means of species authentication were investigated.Results Of the 65 selected pairs of SSR primers, 26 were polymorphic at a rate of 40%. No identical alleles between the parents were found on the g24, g32, g38, and g64 primers with clear and distinct bands. They all contained a band of each parent in their amplified positive and negative F1 progenies and could correctly distinguish true from false hybrids. Meanwhile, the primer g24, g04, g44, and g39 could amplify new gerbera varieties/strains and also contained a band of each parent. However, they were limited to positively identifying genuine hybrids of Minghuifendai, Minghuihongyan, Meifen, and Huancai.Conclusion The SSR molecular markers selected could satisfactorily be used to authenticate the F1 hybrids of G. jamesonii Bolus for plant selection and commercial identification.
-
0. 引言
【研究意义】秀珍菇学名肺形侧耳[Pleurotus pulmonarius（Fr.）Quél.]，因朵型小巧，又名袖珍菇，是中温型结实食用菌[1]。秀珍菇不仅营养丰富，富含人体必需氨基酸、蛋白质等，风味独特[2-6]，还具有抗氧化、抗肿瘤、降血压、降血糖和提高免疫力等功能[7-10]。与平菇（糙皮侧耳）相比，因采收时成熟度小，质地更为鲜嫩，口感更为滑嫩，深受消费者喜爱。木霉是秀珍菇栽培上的重要竞争性杂菌，其主要与秀珍菇菌丝竞争营养，由于木霉生长快，繁殖能力强，繁殖系数高，一旦出现，极易爆发，严重时导致大量菌包废弃，造成较大经济损失[11-12]。研究秀珍菇不同菌株适宜生长条件，阐明秀珍菇与木霉共培养特性，对秀珍菇栽培菌种的选择及温度管理具有重要指导意义。【前人研究进展】秀珍菇自1998年由我国台湾地区引入大陆，并在福建罗源试种150万袋获得成功后，在福建、浙江、河南、山东、安徽、江苏等地开始大面积栽培[13-16]。秀珍菇栽培地区和面积的增加也逐渐提高了产量，2019年全国秀珍菇产量超过30万t，较上一年增长20.27%[17]。目前我国虽然已认定了多个秀珍菇品种，但许多栽培者偏好于 “台秀”57菌株[18-19]。温度是食用菌正常生长的必要条件，主要影响食用菌菌丝的生长速度，以及子实体的分化数量和质量[20]。培养基质为食用菌的生长提供必需的营养物质，培养基质是否适宜决定了菌株菌丝和子实体的质量。秀珍菇常用PDA培养基培养，菌丝生长良好[21]。冯志勇等研究发现，秀珍菇菌丝生长的最适碳源、氮源组合是酵母粉和可溶性淀粉，菌丝粗壮，生长速度快[22]。【本研究切入点】采用传统方式栽培，秀珍菇菌性变化明显，在生产上易引起菌棒满菌后退菌、开袋出菇少，甚至不出菇、易感染霉菌等现象，导致秀珍菇栽培的不稳定性，使生产者遭受经济损失。2015–2018年全国秀珍菇产值曾一度下降[23]。据栽培者经验判断，产生这些问题的主要原因可能是菌种退化，导致秀珍菇菌种退化以及秀珍菇菌丝易受木霉病菌侵染的原因有待深入研究。【拟解决的关键问题】旨从温度和培养基质方面着手，观察秀珍菇菌丝在不同培养基和温度条件下，菌丝形态和生长情况。筛选出秀珍菇菌丝生长的适宜温度和培养基条件；探寻秀珍菇与木霉菌丝适宜生长的温度差异，为秀珍菇科学栽培提供理论支撑。
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试菌株
X98ly-13、Y710-14、Xd-13菌株保存于福建省农业科学院食用菌研究所，X903-1与X86-1是多孢分离获得的新材料，亲本分别为X903与X86。木霉菌株（T001）分离自秀珍菇菌包，并经形态学鉴定为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）。
1.1.2 培养基配方
马铃薯琼脂葡萄糖培养基（PDA）：马铃薯（200 g）、琼脂粉（20 g）、葡萄糖（20 g）、水（1 000 mL）。马铃薯琼脂葡萄糖+淀粉培养基（PDSA）：马铃薯（200 g）、琼脂粉（20 g）、葡萄糖（20 g）、可溶性淀粉（5 g）、水（1 000 mL）。 马铃薯琼脂葡萄糖+酵母培养基（PDYA）：马铃薯（200 g）、琼脂粉（20 g）、葡萄糖（20 g）、酵母粉（5 g）、水（1 000 mL）。马铃薯琼脂葡萄糖+淀粉+酵母培养基（PDSYA）：马铃薯（200 g）、琼脂粉（20 g）、葡萄糖（20 g）、酵母粉（2.5 g）、可溶性淀粉（2.5 g）、水（1 000 mL）。
1.2 试验方法
1.2.1 不同温度对秀珍菇和木霉菌丝生长的影响
将秀珍菇和木霉菌丝块接种在PDA培养基质中，分别放在不同温度条件（25、28、30、32、34、36 ℃）的培养箱中，记录萌发时间，平板菌丝生长速度以平板中菌落半径日增长量计算。
1.2.2 PDA与半合成培养基对秀珍菇菌丝生长的影响
将秀珍菇菌株分别接种在PDA、PDSA、PDYA和PDSYA培养基，记录萌发时间，菌丝生长速度以平板中菌落半径日增长直径计算。
1.2.3 秀珍菇与木霉共培养
将秀珍菇和木霉菌块分别接在距培养皿边缘2 cm的两端 ，每个处理重复3次，标上菌株号，在不同温度的恒温箱中培养，定期观察。
1.3 数据分析
通过Excel 2007和DPS 7.05，对数据进行记录和差异显著性分析。
2. 结果与分析
2.1 温度对秀珍菇菌丝生长及与木霉共培养的影响
秀珍菇菌株在不同温度条件下的生长速度情况见表1。5个菌株在25、28、30 ℃萌发时间均为24 h。当温度超过30 ℃，随着温度逐渐升高，萌发时间逐渐加长。34 ℃ 5个菌株的萌发时间均为72 h以上。X98ly-13、Xd-13、903-1、86-1等4个菌株在25、28、30 ℃菌丝生长速度无显著性差异，但与30和32 ℃有极显著差异。Y710-14菌株菌丝生长最快的温度为30 ℃，与其他4个温度有极显著差异。从满皿时间来看，菌丝最快满皿的菌株为Xd-13，在25、28 ℃，均为5 d。Y710-14、Xd-13菌丝在30 ℃，均为5.33 d。86-1菌株菌丝生长最慢，在32、34 ℃，满皿时间均超过20 d。36 ℃时，秀珍菇菌丝长期处于萌发状态，生长非常缓慢。
表 1 温度对秀珍菇菌丝生长速度的影响Table 1. Effects of temperature on mycelial growth of P. pulmonarius菌株
Strain温度
Temperature/
℃萌发时间
Germination
time/h菌丝生长速度
The growth rate of
mycelia
/（mm·d−1）满皿时间
Full petri
dish time/dX98ly-13 25 24 8.63±0.01 Aa 6 28 24 8.25±0.01 Aab 6 30 24 7.96±0.05 ABbc 6 32 24 7.50±0.01 Bc 6.33 34 72 0.92±0.02 Cd ＞15 Y710-14 25 24 7.42±0.06 Bc 6.67 28 24 8.00±0.03 Bb 6 30 24 8.83±0.01 Aa 5.33 32 24～48 6.46±0.01 Cd 8.33 34 72 0.83±0.03 De ＞15 Xd-13 25 24 8.88±0.02 Aa 5 28 24 7.63±0.01 Aa 5 30 24 8.38±0.03 ABb 5.33 32 24～48 7.75±0.03 Bc 6.67 34 72 0.92±0.01 Cd ＞15 903-1 25 24 7.86±0.08 Aa 6 28 24 7.71±0.01 Aa 6 30 24 7.71±0.02 Aa 6 32 24～48 6.29±0.06 Bb 7.67 34 72 0.67±0.01 Cc ＞15 86-1 25 24 5.38±0.04 Aa 9 28 24 4.46±0.09 ABa 10 30 24 4.38±0.09 ABa 11.33 32 24～48 3.08±0.05 Bb 20.33 34 72 0.46±0.01 Cc ＞21 注：表中不同大小写字母表示同一菌株在不同温度条件下菌丝生长速度有极显著差异（P＜0.01）和显著差异（P＜0.05）。
Note: Data with different uppercase and lowercase letters on same column indicate significant differences at P＜0.01 and P＜0.05, respectively.试验结果表明，木霉在不同温度下菌丝的生长速度有差异（表2）。6种温度条件，25～32 ℃，木霉菌丝生长势旺盛，其中28 ℃木霉菌丝生长最快，约2 d长满90 mm培养皿，随着温度升高，菌丝生长速度变慢，34 ℃，木霉菌丝生长速度明显减弱，约3 d长满90 mm培养皿。36 ℃，木霉菌丝生长非常缓慢，菌丝泛黄，生长势最弱。同时测定了Xd-13菌丝、木霉菌丝在不同温度下的生长情况及秀珍菇菌丝与木霉菌丝的共培养情况（图1）。结果表明，在相同条件下，木霉菌丝的生长速度与秀珍菇菌丝的生长速度有极显著差异，秀珍菇菌丝的生长速度明显慢于木霉菌丝，且秀珍菇菌丝对木霉菌丝无拮抗现象，秀珍菇菌丝很快被完全覆盖，失去竞争力。
表 2 木霉在不同温度条件下菌丝生长情况Table 2. Mycelial growth of T. harzianum at different temperatures温度
Temperature/
℃萌发时间
Germination
time/h菌丝生长速度
Growth rate of mycelia/
（mm·d−1）满皿
时间
Full petri
dish time/d覆盖秀珍菇
菌丝时间
Infect mycelia of
Pleurotus
pulmonarius
time/h25 ＜24 19.33±0.03 Bb 2.21 48 28 ＜24 20.5±0.05 Aa 2.21 48 30 ＜24 19.33±0.03 Bb 2.5 48 32 24 18.5±0.05 Bc 3 48～54 34 24～48 14.67±0.03 Cd 3 54～72 36 72 3.17±0.03 De / / 注：表中不同大小写字母表示菌株在不同温度条件下菌丝生长速度有极显著差异（P＜0.01）和显著差异（P＜0.05）。
Note: Data with different uppercase and lowercase letters on same column indicate significant differences at P＜0.01 and P＜0.05, respectively.![]()
图 1 秀珍菇（XD-13）木霉（T001）菌丝在不同温度条件下生长及共培养情况注：①A：秀珍菇菌丝；B：木霉菌丝；C：秀珍菇和木霉菌丝共培养；②图中平皿从左到右处理温度依次为25、28、32 ℃（上排），34、36 ℃（下排）。Figure 1. Mycelial growth of P. pulmonarius (XD-13) and T. harzianum (T001) in cocultivation at different temperaturesNote: ① A: mycelia of P. pulmonarius; B: mycelia of T. harzianum; C: mycelia of P. pulmonarius and T. harzianum. ② Plate temperatures from left to right at 25 ℃, 28 ℃, and 32 ℃ on upper row; 34 ℃ and 36 ℃ on bottom row.2.2 培养基对秀珍菇菌丝生长的影响
温度为25 ℃时，5个秀珍菇菌株在四种培养基上的生长速度均无显著性差异，萌发时间均为24 h，生长情况见图2。X98ly-13菌株在PDYA培养基中的生长速度稍快于PDSYA培养基，在PDSA培养基中菌丝生长速度最慢。添加淀粉或酵母粉的培养基均可促进Y710-14、Xd-13和903-1菌株菌丝的生长，其中PDYA培养基对Y710-14菌丝日生长速度最快，PDSA培养基对Xd-13菌丝生长促进作用最明显，PDSYA培养基对903-1菌株菌丝的促进作用最大。5个秀珍菇菌株在PDYA培养基中的生长势最强，其次为PDSYA培养基，PDSA和PDA培养基中的菌丝生长势正常。加淀粉时秀珍菇菌丝普遍比正常菌丝更白，呈现乳白色。
![]()
图 2 5个菌株在不同培养基条件下菌丝的生长情况注：①A：X98ly-13菌株；B：Y710-14菌株；C：XD-13菌株；D：903-1菌株；E：86-1菌株。②平皿从左至右依次为PDA、PDSA、PDYA、PDSYA培养基。Figure 2. Mycelial growth of 5 strains of P. pulmonarius cultured on different mediaNote: ①A：X98ly-13; B: Y710-14; C: XD-13; D: 903-1; E: 86-1. ② Plates from left to right represent culture media PDA, PDSA, PDYA, and PDSYA.25 ℃条件下，秀珍菇不同菌株在4种培养基中菌丝的生长速度情况如表3所示，Xd-13菌丝生长速度均最快；86-1菌株生长速度最慢，与其他4个菌株的菌丝生长速度有极显著差异。PDSA培养基条件下，Y710-14菌株菌丝生长速度与Xd-13和X98ly-13无显著性差异，与903-1菌株有极显著差异。PDA和PDSYA培养基条件下，X98ly-13菌株菌丝的生长速度稍快于Y710-14菌株，PDSA和PDYA培养基条件下，X98ly-13菌株菌丝的生长速度稍慢于 Y710-14菌株，但它们之间均无显著性差异。
表 3 秀珍菇不同菌株在4种培养基中的菌丝生长情况分析Table 3. Mycelial growth of 5 strains of P. pulmonarius on 4 different culture media培养基
Culture
medium菌株
Strain菌丝生长速度
The growth rate
of mycelia/
（mm·d−1）菌丝特征
Mycelia characteristicsPDA X98ly-13 8.42±0.38 Aa 生长速度快、粗壮浓密、洁白 Y710-14 8.05±1.04 Aa 生长速度较快、浓密、洁白 XD-13 8.67±0.90 Aa 生长速度快、气生菌丝多、洁白 903-1 7.72±0.36 Aa 生长速度中等、较密、洁白 86-1 6.06±0.88 Bb 生长速度慢、粗壮浓密、洁白 PDSA X98ly-13 7.78±1.20 Bb 生长速度快、粗壮浓密、乳白 Y710-14 8.44±0.46 ABab 生长速度快、浓密、乳白 XD-13 9.28±0.51 Aa 生长速度快、气生菌丝多、乳白 903-1 7.56±0.58 Bb 生长速度中等、较密、乳白 86-1 6.00±0.56 Cc 生长速度慢、粗壮浓密、乳白 PDYA X98ly-13 8.58±0.66 Aab 生长速度快、粗壮浓密、洁白 Y710-14 8.78±0.75 Aa 生长速度快、浓密、洁白 XD-13 8.89±0.82 Aa 生长速度快、气生菌丝多、洁白 903-1 7.83±0.35 Ab 生长速度正常、较密、洁白 86-1 6.22±0.62 Bc 生长速度慢、粗壮浓密、洁白 PDSYA X98ly-13 8.22±0.71 Aa 生长速度快、粗壮浓密、洁白 Y710-14 8.11±0.49 Aa 生长速度快、浓密、洁白 XD-13 8.75±0.69 Aa 生长速度快、气生菌丝多、洁白 903-1 8.05±0.81 Aa 生长速度正常、较密、洁白 86-1 6.72±0.36 Bb 生长速度慢、粗壮浓密、洁白 注：表中不同大、小写字母表示不同菌株在相同培养基条件下菌丝生长速度有极显著差异（P＜0.01）和显著差异（P＜0.05）。
Note: Means within a column followed by different uppercase and lowercase letters indicate significant difference at P＜0.01 or P＜0.05, respectively.3. 讨论与结论
不同温度对5种秀珍菇菌株的菌丝生长均有不同程度的影响，同一温度条件，不同菌株生长速度有差异。其中4个菌株菌丝适宜生长温度范围均为25～30 ℃，在此温度范围菌丝生长速度无显著性差异，但与32 ℃和34 ℃条件有极显著差异，最适生长温度为25 ℃，这与王再明等的研究结果一致[19, 20]，Y710-14菌株菌丝最适生长温度为30 ℃。试验结果表明，5个菌株在32 ℃，菌丝生长速度变慢，34 ℃秀珍菇菌丝生长非常缓慢。可见，秀珍菇菌株菌丝正常生长的临界温度介于32～34 ℃。这为秀珍菇生产上菌包包心温度的控制提供重要参考。Y710-14菌株菌丝最适生长温度较高，推断其应为中温偏高型菌株。秀珍菇常规栽培的品种为中温型菌株，为适应夏季规模化生产，雷潇等筛选了适宜湖南夏季设施化栽培的秀珍菇优良菌株26和秀58高温品种[24]。可见，不同秀珍菇菌株菌丝生长对温度要求有差异，温度是影响秀珍菇菌丝生长的重要因子，在生产上应根据地区气候条件和种植模式情况，选择适宜的秀珍菇菌株。秀珍菇菌丝生长速度的快慢除了与温度有关，可能还与菌株自身特性有关系，菌株菌丝生长速度快慢是否影响栽培出菇的产量与品质，有待更进一步探究。
吴小平等曾通过PDA平板筛选，发现香菇（Lentinula edodes）、鲍鱼菇（Pleurotus cystidiosus）和杏鲍菇（Pleurotus cryngi）等食用菌菌丝对木霉都没有抗性，但发现秀珍菇部分菌株对木霉有抗性[25]。本试验结果表明秀珍菇（XD-13）菌丝对木霉（T001）无拮抗作用。由此推断，在生产中遇上高温高湿天气，菇房、菌包中潜在的木霉病菌大量快速繁殖，当菌包温度介于32～34 ℃，秀珍菇菌丝与木霉菌丝之间的生长势相差更大，秀珍菇菌丝很快就失去竞争力，于是出现“绿包”现象，造成经济损失。要想避免秀珍菇生产过程中“绿包”现象的发生，首先菌包灭菌要彻底，保持菇房环境整洁卫生，其次可筛选出对木霉有抗性的秀珍菇新品种。
半合成培养基培养试验表明，秀珍菇同一菌株在3种添加淀粉或酵母粉的不同培养基上生长速度与对照PDA培养基无显著性差异。但添加酵母粉及酵母粉与淀粉组合的培养基，菌丝的生长势明显增强，菌丝更浓密，这与冯志勇等的研究结果一致[22]，且添加淀粉培养基的菌丝普遍比正常菌丝白，呈现乳白色。有关营养物质的添加浓度，经添加营养物质培养的秀珍菇菌株活力是否更强，保藏时间是否更长，在栽培出菇阶段产量和品质表现等，有待深入研究。
-
![]()
图 1 10个非洲菊杂交亲本及4个非洲菊新品种（系）
A：罗德里；B：热带草原；C：玲珑；D：水粉；E：红胜利；F：云南红；G：拉丝6号；H：拉丝4号；I：晨光；J：菲比；k：明卉粉黛；L：明卉红颜；M：魅粉；N：幻彩。
Figure 1. Ten parents and 4 new cultivars/strains of gerbera
A: Rodrigo; B: Savannah; C: Rosalin; D: Ellymay; E: Hongshengli; F: Yunnanhong; G: Spider No. 6; H: Spider No.4; I: Chenguang; J: Febe; K: Minghuifendai; L: Minghuihongyan; M: Meifen; N: Huancai.
![]()
图 2 部分SSR引物扩增图谱
M：DNA Marker；L：罗德里；R：热带草原；红色框部分所示为SSR位点处的差异条带。
Figure 2. Partial SSR primer amplification map
M: DNA marker；L: Rodrigo; R: Savannah; Red box shows different band at SSR position.
![]()
图 3 g24引物（A）、g32引物（B）、g38引物（C）、g64引物（D）对非洲菊亲本罗德里、热带草原及65个正反交后代DNA的PCR扩增结果
M：DNA Marker；L：罗德里；R：热带草原；1～33：非洲菊正交后代单株，34～65：非洲菊反交后代单株。
Figure 3. PCR amplification results of primers g24 (A), g32 (B), g38 (C), and g64 (D) on DNA of G. jamesonii parents Rodrigo, Savannah, and 65 positive and negative progenies
M: DNA marker; L: Rodrigo; R: Savannah; 1-33：Positive cross gerbera plants; 34-65：Negative cross gerbera plants.
![]()
图 4 基于SSR标记的非洲菊新品种（系）杂种真实性鉴定结果
M：DNA marker，♀为母本，♂为父本，F1为杂交后代新品种（系），红色框部分所示为SSR位点处的差异条带；A：g24引物扩增电泳图，母本为玲珑，父本为水粉；B：g04引物扩增电泳图，母本为红胜利，父本为云南红；C：g44引物扩增电泳图，母本为拉丝6号，父本为拉丝4号；D：g39引物扩增电泳图，母本为晨光，父本为菲比
Figure 4. Identification results of SSR markers in new gerbera cultivars/strains
M: DNA marker; ♀: Female parent; ♂: Male parent; F1: New cultivars/strains of hybrids; Red box shows different band at SSR position; A: Amplification electrophoresis on g24 of Rosalin as female parent and Ellymay as male parent; B: Amplification electrophoresis on g04 of Hongshengli as female parent and Yunnanhong as male parent; C: Amplification electrophoresis on g44 of Spider NO.6 as female parent and Spider NO.4 as male parent; D: Amplification electrophoresis on g39 of Chenguang as female parent and Febe as male parent.
表 1 亲本材料相关信息
Table 1 Information about parent materials
序号
Number种质名称
Germplasm name花色
Flower color瓣型
Petal type花型
Flower type花心颜色
Color of inflorescence center1 罗德里 Rodrigo 紫色 Purple 丝状 Spider 单瓣 Simple 浅色 Light 2 热带草原 Savannah 红色 Red 舌状 Ligulate 单瓣 Simple 深色 Dark 3 玲珑 Rosalin 粉色 Pink 舌状 Ligulate 半重瓣 Semidouble 深色 Dark 4 水粉 Ellymay 粉色 Pink 舌状 Ligulate 半重瓣 Semidouble 浅色 Light 5 红胜利 Hongshengli 红色 Red 舌状 Ligulate 半重瓣 Semidouble 深色 Dark 6 云南红 Yunnanhong 红色 Red 舌状 Ligulate 半重瓣 Semidouble 浅色 Light 7 拉丝6号 Spider No. 6 粉色 Pink 丝状 Spider 半重瓣 Semidouble 深色 Dark 8 拉丝4号 Spider No. 4 橙色 Orange 丝状 Spider 单瓣 Simple 深色 Dark 9 晨光 Chenguang 橙红复色 Orange and red 舌状 Ligulate 半重瓣 Semidouble 深色 Dark 10 菲比 Febe 橙黄复色 Orange and yellow 舌状 Ligulate 半重瓣 Semidouble 深色 Dark 
下载: 导出CSV
表 2 杂交亲本组合及其杂种F1代信息
Table 2 Information on cross combinations and F1 hybrids
序号
Number杂交组合（♀×♂）
Hybrid combination （♀×♂）供试杂种F1代数量
Amount of tested F1 hybrids杂种F1编号/名称
F1 Hybrids number/cultivar1 罗德里×热带草原
Rodrigo×Savannah33 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、
25、26、27、28、29、30、31、32、332 热带草原×罗德里
Savannah×Rodrigo32 34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、
45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、
58、59、60、61、62、63、64、653 玲珑×水粉
Rosalin×Ellymay1 LA14/明卉粉黛
LA14/Minghuifendai4 红胜利×云南红
Hongshengli×Yunnanhong1 50-101/明卉红颜
50-101/Minghuihongyan5 拉丝6号×拉丝4号
Spider No. 6×Spider No.41 F6-1/魅粉
F6-1/Meifen6 晨光×菲比
Chenguang×Febe1 CF-1/幻彩
CF-1/Huancai
下载: 导出CSV
表 3 SSR引物序列
Table 3 Sequence of SSR primers
引物名称
Primer name重复单元
Repeat motif上游引物
Forward primer下游引物
Reverse primer片段长度
Fragment length/bpg01 (CT)14 GAATTCAATGAGCATCGCCT GGCGGGCAATACAAAACTTA 188 g02 (CT)12 TTCATTTCTCCCCTCGTCAC AATGGGTCAACATTCAGCGT 128 g03 (AC)11 GGATTTATTTGGTCTACGGTGC TTGGGAAGGGTTTGAAATTG 148 g04 (TG)18 TGCTAGGTGCTGTGAGGAGA TTGTGCACGCCTACTTTTTG 184 g05 (TC)11 TCCAATTCCAAGGTGTAAATCC GGAATTCTCCATTCCTGCAA 175 g06 (TA)8 CAAACGTCAAGAACACGCAC TCAACAGCGGTTGTGTATGAA 167 g07 (GA)15 GCGTAGGGTTTTCTGTGCAT TCTCTCTAAGATCGCCCTGC 206 g08 (TC)12 GCCAAGAAATGGATCCAAGA ACCCGCTCATTTTACGACC 134 g09 (AG)13 CGAACCTTCACAAGATCGGT TCGGAGATGTTCCTTTGACC 189 g10 (GT)12 GTGCGGGTGTGAACAACATA ATCACCTTCTCCGACACACC 159 g11 (GA)15 GTAGCGAAACACGGAGGAAA AGTACGGCCTCCTCCATTCT 194 g12 (GT)11 AACCTGGCATACACTTTGGC CGAACCAAACAATTACCATGAA 177 g13 (TC)12 GTTGCACGCCCTCCTATCT GTCGGTGTCGGAGAAATGTT 226 g14 (GA)9 TGCAATTGGATGTGAGTCGT GCAACGAGAGCAAACTACCC 179 g15 (TC)13 ACGGTTCAATTTCGAGAACG AAATTTTAGCGCAAAACAAGC 202 g16 (CT)9 GCTCTCAACCTGTCAAAGGC GCTTCCCTCGATTGTAGCTG 173 g17 (AG)10 TCCAACGTCAATTCCAATCA AACTCTGTCGTGGTGTCGGT 156 g18 (TA)12 CAATCATGGCTGCATTTCAC TTTTCCACGTCAAACCATCA 220 g19 (TA)10 GTGAGGTGCAAGAGGAAAGC TACCAGCAGAAGCAGACGAA 221 g20 (AG)10 ATTGCACCCTCGTTTTATGC TCTGCTGCATCTTCATGCTT 185 g21 (ATG)7 TGCCTTGAAAGTGACGATGA GCGTAAGATTCTCCACAGGG 223 g22 (TCT)12 CTCCATTTTGTAGCCAAGAGTG GCCACCACTACTGAGGCATT 163 g23 (CGG)8 CATCCCTTACGTTGGCACTT CACCCTTGAAACCCTCTCTG 167 g24 (GAT)8 AGTGGGAGAAGCTATGCCAA GGGTCGCCATAGCAAATAGA 187 g25 (TTA)8 GATTGGATGCTAGCTTTGCC GGGCATTTTGGACATTTGAT 162 g26 (GAA)5 AGAAGAGTCCGTGGTGGCTA GGTGACTTCGTCTTGAGGGA 185 g27 (AAG)13 AATCCTCAATGCCACCTTTG GAGGCAGGAATTGACTGGAA 160 g28 (TAA)7 CGTTTTACATGCAGCCTCAA CTTTGCTTCCTCTGCCTGAC 167 g29 (ACT)6 AACAATAGGATCAAACGCGG TCGGATTGAAGGTGAGAAGG 152 g30 (GAC)5 CACAAACCCTTGTAGCGGAT ACATTCTTCACCGGAGCAAC 150 g31 (AAG)9 ATCGGCTCAAGGTAAGGGAT GCTCAATGGCTTCAGACACA 186 g32 (GAT)11 ATTTTGAAGGGATTGGTGGG TCATGCCATATTCCCTCGAT 174 g33 (AAG)11 CAGGGGCAGTTAGGTTCAAA TAGAATTGGACCCGCTATGG 186 g34 (CAA)7 TGGCAATCGTGCTTGTTAAA CCCCAATTCTATTTGGGACT 158 g35 (TAC)7 GTCACACGTGGTCGCATATC ACAAATCGAACTTTGACCCG 194 g36 (AAC)9 AGCAAGATCAAAAGACCCGA CCTTTGTCGTCATAGCAATCAA 167 g37 (TCG)9 CGCCATTAAAGCCTTCTTTC GGAAGGCTTGTGTTGGTTGT 151 g38 (GCG)7 AATGGCAGCTACTGCGTCTT TCACCATTAACGGCTGATGA 158 g39 (AAT)12 ACAAAGAATCCGTCCACCAG GACCGTATTGGGCAGGTCTA 164 g40 (GAA)10 GAGGCGTTATCGGACTTTGA TTCTTCTTGGGACGTAACCG 168 g41 (TCTT)5 CGGTCACTGGGAAACTTCAT CGTCCTCAATAATTGCCGTT 199 g42 (TTGT)5 ACCCACTTGGCTTGGGTATT CTGCTGAGGCTTTCATCTCC 142 g43 (TACA)5 CGCAAAGTGTAAACTGAAGTGG CCCAGCTTGACTCATGGTTT 150 g44 (CTAT)8 TTAGGAGTGGAGTCGCTGCT CGAAAAGCTAGCAAATGGACA 200 g45 (AGGA)6 GGCGTCTTGTTTCTTTTTCG AGCTGGGACCTGGGAATACT 144 g46 (TTTA)6 TGTCCATAAAATGCGGTCAA TAAAAGCCCACCCTCAATCA 232 g47 (TGTT)5 GAAATCCGTGAAAGGTCGAA TGTACAAACCCACCTCCCTT 193 g48 (TCGA)5 AAGAAGCTCGGCCTCTGATT TACCTTCGCGGATTGTTTTC 204 g49 (TGTA)5 TACAACGGGTTATCCAAGCC GGTGCAAATACAAGGTTCGTG 190 g50 (TATG)5 TGGTTGGAAAAGTCATTCACTC TCAACACCGAACCGACAATA 143 g51 (TATT)8 AAATCTTTGATGAATGCGGC GAAGAATCCCAATTGAGCCA 186 g52 (TATG)5 GCCTCACCTGAAGACGGTAG TACATATGCGATTGGGCCTT 155 g53 (TCAA)5 CCGGTCACTCTCACATGCTA CCATCACAGACGACGAAAGA 148 g54 (ATTT)5 ATTAAAGAGTGTGCAGGCGG AAGCAACAACGTCGGAAAAT 153 g55 (TAAAA)5 AACGACTAGCGATTCCATGA TGTGGGATGTAACAAGGCAA 182 g56 (AAAAG)5 GAGTATTTGGAGCGAAAGCG TGAACACTTGTATCCGTCGC 119 g57 (ACCAA)5 CTCTTTCCTTTTCACCGCAC TTCGTCTAGATCTTCGCCGT 173 g58 (TAAAA)5 GGGTTCGTTTTGCATTTAACTC CAGGACCTTTGATTTTGGTCA 183 g59 (ACCCG)5 CTGCCGGAATCAAAATGAAT CTTTAATGGTGGCAATGGCT 166 g60 (CACCC)5 TGCTTACACTTCCGTGCAAC ATGTTAGCTCCAGTTGGGCA 189 g61 (AAAAG)5 CATGGATAAACCCGTTTTGG TTTTCTCTTTCTGTTTCGCCA 170 g62 (GTCAAA)6 GTCGCAAGAACTTCCAAAGC TCCACCGACTTTGACTTTCA 237 g63 (CGTCTT)6 TTGCAAATGCAAATCCAATC AAACAGCAGTGGTGGTTTCC 175 g64 (AATGGG)6 CGCTTCCTCCTACAACAAGC GTGTCCCCACCATTCAAGTT 163 g65 (TGCTCC)6 AGCTTGCCATGGTTATGGTC GGCTTAAAAGATCCCCAAGG 231
下载: 导出CSV
表 4 非洲菊新品种（系）及鉴定引物
Table 4 SSR primers for identifying new gerbera cultivars/strains
品种（系）名称
Cultivar/Strain材料
Material母本
Female parent父本
Male parent鉴定引物
Primer for identification明卉粉黛
Minghuifendai粉色花瓣、浅色花心非洲菊新品种
New cultivar with pink petal, light color in the center of inflorescence玲珑
Rosalin水粉
Ellymayg24 明卉红颜
Minghuihongyan红色花瓣、深色花心非洲菊新品系
New strains with red petal, dark color in the center of inflorescence红胜利
Hongshengli云南红
Yunnanhongg04 魅粉
Meifen粉色花瓣、深色花心、拉丝非洲菊新品系
New spider strains with pink petal, dark color in the center of inflorescence拉丝6号
Spider NO. 6拉丝4号
Spider NO. 4g44 幻彩
Huancai橙黄复色花瓣、深色花心非洲菊新品系
New strains with orange and yellow petal, dark color in the center of inflorescence晨光
Chenguang菲比
Febeg39
下载: 导出CSV
-
[1] 陆继亮. 云南自主选育的非洲菊新品种受宠 [J]. 中国花卉园艺, 2016(5):48. LU J L. New Gerbera jamesonii varieties independently bred in Yunnan are favored [J]. China Flowers & Horticulture, 2016(5): 48.(in Chinese)
[2] 夏朝水. 福建主栽非洲菊品种资源的综合评价与应用[D]. 福州: 福建农林大学, 2014. XIA C S. Comprehensive evaluation and application of Fujian main cultivated varieties of Gerbera jamesonii resources[D]. Fuzhou: Fujian Agriculture and Forestry University, 2014. (in Chinese)
[3] 李绅崇. 非洲菊单倍体种质创制及重组抑制基因TOP3α的克隆与表达分析[D]. 西南大学, 2020. LI S C. Haploid germplasm creation and cloning and expression analysis of recombinant suppressor gene TOP3α in Gerbera hybrida[D]. Southwest University, 2020. (in Chinese)
[4] 李金泽, 熊丽, 桂敏, 等. 非洲菊品种杂交与自交结籽的研究 [J]. 西南农业大学学报(自然科学版), 2005, 27(4):537−540. LI J Z, XIONG L, GUI M, et al. Fruitification of cross- and self-pollination for Gerbera jamesonii bolus [J]. Journal of Southwest Agricultural University, 2005, 27(4): 537−540.(in Chinese)
[5] MAURER J. Ergebnisse genetisch-züchterischer Untersuchungen bei Gerbera[J]. 1967.
[6] 李永清, 江金兰, 叶炜, 等. SSR分子标记鉴定铁皮石斛与霍山石斛的正反交后代 [J]. 福建农业学报, 2017, 32(8):870−873. DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.012 LI Y Q, JIANG J L, YE W, et al. Differentiation between reciprocal-crossed hybrids of Dendrobium officinale andD. huoshanense using SSR markers [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2017, 32(8): 870−873.(in Chinese) DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.012
[7] 李长青, 于肖夏, 鞠天华, 等. 马铃薯杂种F1的SSR鉴定 [J]. 西北植物学报, 2012, 32(7):1355−1360. DOI: 10.3969/j.issn.1000-4025.2012.07.011 LI C Q, YU X X, JU T H, et al. Identification of Solanum tuberosum hybrids by SSR molecular markers [J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica, 2012, 32(7): 1355−1360.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1000-4025.2012.07.011
[8] 丁力, 申方群, 黄红梅, 等. 芒种内F1杂交种的配制及杂种真实性的分子鉴定 [J]. 中国草地学报, 2015, 37(2):53−57,80. DING L, SHEN F Q, HUANG H M, et al. Making up intraspecific F1 hybrids among Miscanthus sinensis and identification of hybrid realness by SSR markers [J]. Chinese Journal of Grassland, 2015, 37(2): 53−57,80.(in Chinese)
[9] 王继华, 瞿素萍, 唐开学, 等. 非洲菊ESTs-SSR标记的频率和分布特点 [J]. 园艺学报, 2006, 33(5):1140. DOI: 10.3321/j.issn:0513-353X.2006.05.053 WANG J H, QU S P, TANG K X, et al. Analysis of the frequency and distribution of microsatelllites in ESTs of Gerbera hybrida (Asteraceae) [J]. Acta Horticulturae Sinica, 2006, 33(5): 1140.(in Chinese) DOI: 10.3321/j.issn:0513-353X.2006.05.053
[10] 林发壮, 李锦烨, 安慧珍, 等. 基于非洲菊转录组测序的SSR位点信息分析 [J]. 福建农业科技, 2020(11):1−6. DOI: 10.13651/j.cnki.fjnykj.2020.11.001 LIN F Z, LI J Y, AN H Z, et al. Analysis on SSR loci information in the transcriptome sequencing of Gerbera jamesonii L [J]. Fujian Agricultural Science and Technology, 2020(11): 1−6.(in Chinese) DOI: 10.13651/j.cnki.fjnykj.2020.11.001
[11] BENEMANN D P, ARGE L W P, BARROS W S, et al. Estimation of genetic variability of a Gerbera Brazilian collection based on morphological traits and EST-SSR markers [J]. Australian Journal of Crop Science, 2014, 8(5): 722−729.
[12] BENEMANN D P, MACHADO L N, ARGE L W P, et al. Identification, characterization and validation of SSR markers from the gerbera EST database [J]. Plant OMICS, 2012, 5(2): 159−166.
[13] GONG L, DENG Z N. Selection and application of SSR markers for variety discrimination, genetic similarity and relation analysis in Gerbera (Gerbera hybrida) [J]. Scientia Horticulturae, 2012, 138: 120−127. DOI: 10.1016/j.scienta.2012.02.020
[14] SONG X H, DENG Z N. Powdery mildew resistance in Gerbera: Mode of inheritance, quantitative trait locus identification, and resistance responses [J]. Journal of the American Society for Horticultural Science, 2013, 138(6): 470−478. DOI: 10.21273/JASHS.138.6.470
[15] 朱骏驰, 郭印山, 刘镇东, 等. 利用SSR分子标记鉴定葡萄F1代杂种 [J]. 沈阳农业大学学报, 2016, 47(2):148−152. ZHU J C, GUO Y S, LIU Z D, et al. Identification of the F1 hybrids of grape using SSR molecular markers [J]. Journal of Shenyang Agricultural University, 2016, 47(2): 148−152.(in Chinese)
[16] 李绅崇, 李淑斌, 蒋亚莲, 等. 非洲菊品种间杂交主要观赏性状在F1代的遗传表现 [J]. 云南农业大学学报(自然科学), 2007, 22(2):197−201. LI S C, LI S B, JIANG Y L, et al. Genetic performance of primary ornamental traits in F1 hybrids of Gerbera jamesonii bolus intervarietal hybridization [J]. Journal of Yunnan Agricultural University(Natural Science Eition), 2007, 22(2): 197−201.(in Chinese)
[17] 叶刚, 张笑笑, 陈静波, 等. 结缕草属植物杂交后代形态特征和SRAP分子标记鉴定 [J]. 草地学报, 2021, 29(7):1406−1415. YE G, ZHANG X X, CHEN J B, et al. Morphological characteristics and identification of SRAP molecular markers in hybrid progeny of Zoysia [J]. Acta Agrestia Sinica, 2021, 29(7): 1406−1415.(in Chinese)
[18] OZAKI T, SHIMADA T, NAKANISHI T, et al. RAPD analysis for parentage determination in Prunus mume sieb. et zucc [J]. Engei Gakkai Zasshi, 1995, 64(2): 235−242. DOI: 10.2503/jjshs.64.235
[19] SCARANO M T, TUSA N, ABBATE L, et al. Flow cytometry, SSR and modified AFLP markers for the identification of zygotic plantlets in backcrosses between ‘Femminello’ lemon cybrids (2n and 4n) and a diploid clone of ‘Femminello’ lemon (Citrus limon L. Burm. F. ) tolerant to mal secco disease [J]. Plant Science, 2003, 164(6): 1009−1017. DOI: 10.1016/S0168-9452(03)00088-8
[20] 苏聪聪, 金燕, 徐丰, 等. 利用SSR分子标记鉴定刺葡萄F1代杂种 [J]. 江苏农业科学, 2018, 46(17):35−38. SU C C, JIN Y, XU F, et al. Identification of F1 hybrids of Vitis davidii Foex using SSR molecular markers [J]. Jiangsu Agricultural Sciences, 2018, 46(17): 35−38.(in Chinese)
[21] 李文秀, 贺军军, 张华林, 等. SSR分子标记鉴定橡胶树F1真伪杂种 [J]. 热带作物学报, 2021, 42(5):1305−1309. DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.05.015 LI W X, HE J J, ZHANG H L, et al. Identification of F1 hybrids of Hevea brasiliensis by SSR markers [J]. Chinese Journal of Tropical Crops, 2021, 42(5): 1305−1309.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.05.015
[22] 文雁成, 王汉中, 沈金雄, 等. SRAP和SSR标记构建的甘蓝型油菜品种指纹图谱比较 [J]. 中国油料作物学报, 2006, 28(3):233−239. DOI: 10.3321/j.issn:1007-9084.2006.03.001 WEN Y C, WANG H Z, SHEN J X, et al. Comparision of cultivar fingerprints constructed with SRAP and SSR markers in Brassica napus L [J]. Chinese Journal of Oil Crop Sciences, 2006, 28(3): 233−239.(in Chinese) DOI: 10.3321/j.issn:1007-9084.2006.03.001
[23] 林榕燕, 钟淮钦, 黄敏玲, 等. 文心兰EST-SSR标记的开发及其在遗传多样性分析中的应用 [J]. 分子植物育种, 2016, 14(11):3113−3119. DOI: 10.13271/j.mpb.014.003113 LIN R Y, ZHONG H Q, HUANG M L, et al. Development of EST-SSR molecular marker and its application in genetic diversity analysis of Oncidium [J]. Molecular Plant Breeding, 2016, 14(11): 3113−3119.(in Chinese) DOI: 10.13271/j.mpb.014.003113
[24] 舒珂, 李建红, 陈璐, 等. 卷丹百合远缘杂交及杂种后代的鉴定 [J]. 湖南农业大学学报(自然科学版), 2022, 48(5):556−562. DOI: 10.13331/j.cnki.jhau.2022.05.008 SHU K, LI J H, CHEN L, et al. Distant hybridization of Lilium lancifolium Thunb. and identification of its hybrid progeny [J]. Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences), 2022, 48(5): 556−562.(in Chinese) DOI: 10.13331/j.cnki.jhau.2022.05.008
[25] 周宁宁, 李淑斌, 李远波, 等. 二倍体月季F1群体的SSR鉴定与遗传分析 [J]. 园艺学报, 2017, 44(1):151−160. ZHOU N N, LI S B, LI Y B, et al. Hybrids identification and genetic analysis in diploid roses population(F1)using SSR markers [J]. Acta Horticulturae Sinica, 2017, 44(1): 151−160.(in Chinese)
[26] 韩国辉, 向素琼, 汪卫星, 等. 沙田柚杂交后代群体的SSR鉴定与遗传多样性分析 [J]. 中国农业科学, 2010, 43(22):4678−4686. DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.22.015 HAN G H, XIANG S Q, WANG W X, et al. Identification and genetic diversity of hybrid progenies from Shatian pummelo by SSR [J]. Scientia Agricultura Sinica, 2010, 43(22): 4678−4686.(in Chinese) DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.22.015
[27] 张婧, 黄琳凯, 张新全, 等. SRAP与SSR分子标记在柳枝稷杂种鉴定中的比较分析 [J]. 草业学报, 2012, 21(5):128−133. DOI: 10.11686/cyxb20120516 ZHANG J, HUANG L K, ZHANG X Q, et al. Comparison of SRAP and SSR markers for hybrid identification of switchgrass(Panicum virgatum) [J]. Acta Prataculturae Sinica, 2012, 21(5): 128−133.(in Chinese) DOI: 10.11686/cyxb20120516
-
期刊类型引用(3)
1. 卯明娟，刘迪，周会明，白玉英，洪鹏，王佳琳，杨流波，陈真敏. 基于高产胞外粗多糖的白灵芝发酵茶培养基配方优化. 食品工业科技. 2024(04): 93-100 . 
百度学术
2. 闫静，王伟科，陆娜，宋吉玲，周祖法. 利用孢子紫外诱变选育秀珍菇新菌株. 中国食用菌. 2024(02): 38-45 . 百度学术
3. 胡佳，陈鑫. 高温天气因素对杏鲍菇不同生长阶段的影响. 中国农学通报. 2024(36): 57-62 . 百度学术
其他类型引用(0)
计量
- 文章访问数: 555
- HTML全文浏览量: 203
- PDF下载量: 13
- 被引次数: 3
