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滇杨性别连锁的SSR标记

李启少, 雷瀚, 沈伟祥, 赵文植, 王飞, 徐剑, 瞿绍宏, 董章宏, 辛培尧

李启少,雷瀚,沈伟祥,等. 滇杨性别连锁的SSR标记 [J]. 福建农业学报,2023,38(8):953−959. DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2023.08.009
引用本文: 李启少,雷瀚,沈伟祥,等. 滇杨性别连锁的SSR标记 [J]. 福建农业学报,2023,38(8):953−959. DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2023.08.009
LI Q S, LEI H, SHEN W X, et al. SSR Markers Associated with Sex-difference of Populus yunnanensis Dode [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2023,38(8):953−959. DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2023.08.009
Citation: LI Q S, LEI H, SHEN W X, et al. SSR Markers Associated with Sex-difference of Populus yunnanensis Dode [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2023,38(8):953−959. DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2023.08.009

滇杨性别连锁的SSR标记

基金项目: 云南省科技人才与平台计划项目(202205AF150022)
详细信息
    作者简介:

    李启少(1999 —),男,硕士研究生,主要从事林木遗传育种与良种繁育研究,E-mail:975025664@qq.com

    通讯作者:

    辛培尧(1975 —),男,博士,教授,博士生导师,主要从事植物遗传育种与分子生物学研究,E-mail:xpytgyx@163.com

  • 中图分类号: S792

SSR Markers Associated with Sex-difference of Populus yunnanensis Dode

  • 摘要:
      目的  在滇杨幼苗时期和开花前利用形态差异对雌雄株进行性别鉴定极为困难,因此亟需探明对其性别进行快速鉴定的分子标记方法。
      方法  以滇杨雌雄各30株为材料,利用简单重复序列(SSR)筛选与滇杨性别相关的分子标记,并利用所获得的SSR标记对未知性别滇杨幼苗进行鉴定,分析滇杨苗期的性别分化情况。
      结果  从已报道的相关文献中选出15对与植物性别连锁的SSR引物,经试验筛选出1对(BPCA90)在琼脂糖凝胶检测中显现清晰条带且反应稳定的SSR引物,并将这对引物经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行复筛,经PCR扩增后在滇杨雄株中出现1条特异性条带,大小在680 bp左右。利用这对SSR引物对30株滇杨幼苗进行性别鉴定,结果表明雄株明显多于雌株,且比例为13∶2。
      结论  试验筛选所得到的SSR引物可以用于滇杨早期进行性别鉴定。研究结果可作为滇杨早期性别鉴定的遗传标记,为今后滇杨在生产中的分性别利用提供技术支持。
    Abstract:
      Objective   Means utilizing molecular markers to differentiate rapidly and accurately male and female Populus yunnanensis plants at young stages was investigated.
      Method   Using simple sequence repeats (SSR), molecular markers were screened for those might associate with the sex of P. yunnanensis at seedling stages and before flowering.
      Result   Fifteen pairs of SSR primers were selected from the reported literatures. One of them, coded BPCA90, showed clear bands and stable reaction in agarose gel detection. After rescreening the primer by polyacrylamide gel electrophoresis, a specific band of approximately 680 bp appeared in the PCR amplification of male P. yunnanensis. Subsequent testing on 30 plants using these SSR primers showed significantly more males than females in a ratio of 13 to 2.
      Conclusion  Short of a visible morphological sign for the determination, the SSR primers screened by this study appeared to suffice the general purpose of differentiating the sex of P. yunnanensis at early growth stage.
  • 【研究意义】丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi, AMF)可以与地球上90%的陆生高等植物建立起共生模式,形成特定的“菌根”结构。丛枝菌根作为最常见的内生菌根,与植物构建共生关系后,可以促进植物对周围根系土壤营养元素的吸收,从而促进植物自身的生长发育 [1],提高植物耐旱、耐盐碱和抗病能力[2]。红豆杉是珍贵的用材树种,具有较高的观赏价值,红豆杉中的紫杉醇是一种抗癌活性成分,能够有效抑制癌细胞的生长和繁殖,具有很高的药用价值 [3]。南方红豆杉(Taxus wallichiana var. mairei)为中国红豆杉的变种,高20 m,是中国分布最为广泛的红豆杉 [4],主要分布于湖南、台湾、福建、广西等南方各省。现代医药中具有抗癌作用的成分紫杉醇,其主要来源于红豆杉属植物,是一种二萜生物碱类化合物,Lun等 [5]研究发现可以作用于癌细胞增殖转移过程中的蛋白质,并明显阻止癌细胞增殖。对于药用植物红豆杉而言,红豆杉的质量和产量对其入药至关重要,如何提高红豆杉产量和有效药用成分含量一直是重要的研究方向。【前人研究进展】王海娟 [6]研究发现,接种AMF,使植物与AMF形成一种共生关系,可以提高植物根系周围土壤的微生物含量,促进植物对土壤周围营养的吸收,改善植物生长速率和生长状况。马放等[7]研究发现AMF可以促进小麦的生长,耿云芬等[8]研究表明接种AMF的国家二级濒危植物铁力木的侵染率、苗高、地径、叶片数、干重、鲜重等均增加,丛枝菌根能和铁力木幼苗形成共生关系,促进铁力木幼苗生长,提高幼苗的光合效率。研究还发现AMF对与之形成共生关系的植物具有促进生长的作用,可以为次生代谢合成提供底物,同时AMF与植物共生能够显著影响植物次生代谢的合成与积累 [9]。目前人为的过度采伐等原因导致大部分南方红豆杉呈现濒危趋势 [10],故对南方红豆杉的研究较为热门。付晓峰等 [11]研究发现接种AMF对南方红豆杉的生长具有促进作用,接种AMF还促进了南方红豆杉根际重要土壤酶(酸性磷酸酶、脱氢酶、转化酶)活力的增加。【本研究切入点】目前AMF对南方红豆杉重要药用成分影响的系统研究鲜见报道。【拟解决的关键问题】本研究以南方红豆杉幼苗和AMF为试验材料,将两种不同的AMF单独接入或混接于南方红豆杉实验条件下的盆栽苗根际,研究其对南方红豆杉的生长指标、土壤理化性质以其次生代谢产物的影响,旨在揭示不同接种处理在南方红豆杉生长过程中产生的作用,探究是否能通过微生物与植物的互作来提高其紫杉醇含量,筛选可以更有效提高次生代谢物紫杉醇含量的AMF,从而为促进红豆杉体内有效药用成分生产提供重要的理论依据。

    供试材料为一年半生南方红豆杉直生苗(成都中医药大学药用植物园提供),供试AMF菌种为根内根孢囊霉菌Rhizophagus intraradices(RI)和摩西斗管囊霉菌Funneliformis mosseae(FM),菌剂购自北京市农林科学院植物营养与资源研究所,菌剂为干燥全培养物(基质菌丝、孢子、真菌侵染的根段以及培养基质的混合物)。供试基质河沙用自来水冲洗干净后与蛭石、土壤按体积1∶1∶1混匀,于灭菌锅121 ℃、0.1 MPa下灭菌2 h(灭菌土pH=7、呈中性,呈粉末状)。

    试验用塑料盆(25 cm×19 cm×17 cm)进行种植,塑料盆提前经过0.2%高锰酸钾浸泡过夜备用。试验前提前将供试基质混合并分装,挑选大小一致且长势良好的南方红豆杉幼苗,使用无菌水浸泡苗木的根部10遍。本试验播种和接种同步进行,每盆装入适量混合灭菌土,接种处理每盆加10 g菌种,每盆播种苗木1株。设置4个处理,分别为:CK(不接种)、GM(单独接种F. mosseae)、GI(单独接种R. intraradices)、MA(F. mosseaeR. intraradices共同接种),每个处理6个栽植盆;分别贴好标签,移至室外进行培养并在生长期内定期浇灌无菌水。

    接种60 d后,对侵染率进行检测来筛选优势AMF。利用台盼蓝对植物根系进行染色,用于 AMF 观察和侵染率的测定 [12]。根系侵染率/%=(被侵染的根段/检测的总根段)×100。

    测量生长6月的南方红豆杉幼苗的各项生长指标,利用测量尺测定株高和主根长度;利用游标卡尺(精确到0.1 mm)测量地径,计算南方红豆杉幼苗一级分支数。

    生长10月后在栽培盆内进行采样,每个培养盆内取5个样点,各取样点间隔5 cm,去掉表层 1 cm 厚的表土,采集距地表2~10 cm 土层的根围土壤,5个样点土壤混合。将土壤中的石块、树枝、树叶等剔除干净后,根据不同测定方法要求将土壤适当研磨、充分混匀、过16目筛后分装。在实验室中分别测定土壤含水量[13]、土壤速效磷含量[14]、土壤碱解氮[15]和土壤速效钾含量[16]

    采用高效液相色谱法测定。色谱条件为WATERS 2695 高效液相色谱仪2996DAD检测器;甲醇∶水=45∶55,检测波长228 nm;流速l.0 mL·min−1;检测温度:室温;进样量:30 μL。精密称取12.5 mg紫杉醇对照品,将其用甲醇溶液溶解于25 mL容量瓶并进行定容,最终制成紫杉醇标准溶液0.5 mg·mL−1。然后分别用移液管取0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL标准溶液到10 mL容量瓶中,以甲醇溶液进行定容、摇匀,最后分别制成质量浓度为5、10、20、40、80 μg·mL−1的标准品溶液,以供制作标准曲线时使用。

    每组处理随机取样,剪取幼苗的叶片以及枝条,所有样品在 105 ℃ 的烘箱中干燥 30 min,再于70 ℃ 的温度下烘 48 h,直到质量稳定为止,随后用研钵研成粉末。用电子天平精密称取苗木干枝叶粉末1 g,置于试管中,加入20 mL无水乙醇,在45 ℃的恒温水浴条件下,浸提3 h,然后进行静置过滤,滤渣再以20 mL无水乙醇在相同的条件下浸提3 h,过滤后把2次滤液合并,通过旋转蒸发仪旋转蒸发,蒸至墨绿色浸膏状。最后以适量的甲醇溶解浸膏,完全溶解成液体状,再将全部的液体溶液转移至10 mL的容量瓶中,用甲醇完全定容。经过0.45 μm微孔滤膜过滤,得到样品溶液。将供试样品分别进行高效液相色谱检测,按最佳的洗脱条件进行洗脱,记录峰的面积和保留时间,通过标准曲线计算各个样品中相应的紫杉醇含量。

    采用IBM SPSS 26.0软件(Armonk,NY, USA)对数据进行单因素方差分析(ANOVA)和LSD多重比较检验。数据显示为平均值±标准误差(SEM)。使用Origin 2023进行图表绘制。

    图1A~D依次为空白对照组、接种摩西斗管囊霉菌、接种根内根孢囊霉菌和混合接种摩西和根内根孢囊霉菌的菌根侵染情况图,其侵染率依次为2%、18%、28%、17%,发现接种处理的侵染率显著高于对照组。图中还可以观察到AMF的泡囊和菌丝。

    图  1  不同处理组对南方红豆杉幼苗侵染效果
    Figure  1.  AMF infection rates on T. chinensis seedlings by different treatments

    不同的AMF对其土壤理化性质的影响有所不同(表1),GM、GI组对pH的影响显著小于CK组和MA组,说明接种摩西斗管囊霉菌或根内根孢囊霉菌可以显著降低根围土壤的pH值;从土壤含水量分析,AMF对土壤含水量的影响不显著;对于土壤速效钾、碱解氮含量来说,GI组和GM组的土壤速效钾和碱解氮含量显著大于CK组和MA组,说明GI和GM真菌对土壤的速效钾和碱解氮具有显著影响作用;从速效磷含量来看,GM、GI对土壤速效磷含量显著小于其余组,说明GM、GI两组植物对磷的吸收量显著高于对照组;从侵染率分析,GI的侵染率最大,在其余组中,侵染率GM>MA>CK,不同AMF对土壤理化性质影响不同;土壤中的速效钾、碱解氮和速效磷3个指标中,接种组的含量与对照组的含量相比差异显著,且GI组和GM组与CK组和MA组相比影响较为显著,其中速效钾和碱解氮含量呈增加,而速效钾含量呈减少,也进一步说明接种AMF更有利于植物吸收土壤中的速效磷,相对而言, GI组和GM组对土壤理化性质影响比较显著。

    表  1  不同 AM 真菌的土壤理化性质(平均值+标准误)
    Table  1.  Soil physicochemical properties under AMF treatments (mean+SE)
    处理
    Treatment
    酸碱度
    pH
    含水量
    Moisture
    content/%
    速效钾
    Rapidly available
    potassium/
    (μg·mL−1)
    碱解氮
    Alkali hydrolyzable
    nitrogen/
    (mg·kg−1)
    速效磷
    Rapidly available
    phosphorus/
    (mg·L−1)
    侵染率
    Colonization
    rate/%
    CK 6.57±0.52b 41.02±3.61a 1.46±0.56c 1.58±0.76b 6.13±0.12a 2.03±0.10c
    GM 6.01±0.29d 41.12±5.33a 1.76±0.25b 2.85±1.16a 4.67±0.05b 18.56±5.81b
    GI 6.31±0.92c 42.09±1.94a 2.14±0.38a 3.11±3.16a 4.48±0.50b 28.34±3.35a
    MA 6.99±0.32a 41.27±3.47a 1.81±1.20b 1.93±1.91b 6.88±0.13a 17.82±9.07b
    同一列数据后字母不同者表示差异显著(P < 0.05)。
    Date with different letters are significantly different (P < 0.05) in the same column.
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    生长指标可以更直接表现出培养期间幼苗的生长状况。通过试验数据分析,不同AMF培养下的南方红豆杉幼苗的株高、根长、一级枝数、地径都不同(图2)。在为期6个月的幼苗培养期间,发现接种AMF组的各项生长指标均优于未接种组;其中南方红豆杉株高GM、GI显著高于其余各组(P < 0.05);GI组幼苗地径显著高于其余各组(P < 0.05);GI、GM组的苗木根长显著高于其余各组(P < 0.05);GM组苗木一级枝数响显著大于其余各组,而GM和GI组之间不存在显著性差异。

    图  2  不同处理组对南方红豆杉幼苗生长指标的影响
    具有不同字母的处理差异显著(P<0.05)。下同。
    Figure  2.  Effect of AMF inoculation on growth of T. chinensis seedlings
    Panel containing different letters indicates significantly difference at P<0.05. Same for below.

    通过生长指标和土壤理化性质指标的相关性分析,结果(表2)表明,速效钾与侵染率和地径之间呈现极显著正相关性(P < 0.01),与碱解氮、根长呈显著正相关(P < 0.05);碱解氮与侵染率、根长、地径和株高呈现极显著正相关(P < 0.01),但与速效磷呈极显著负相关(P < 0.01);速效磷与碱解氮、根长、地径和株高之间呈现极显著负相关性(P < 0.01),与侵染率呈现显著负相关(P < 0.05),与pH呈极显著正相关(P < 0.01);pH与根长、地径和株高呈极显著负相关,与速效磷呈极显著正相关;侵染率与pH之间存在极弱的相关关系,菌根的侵染率与植物的根长、地径、速效钾和碱解氮之间呈现极显著正相关(P < 0.01),与速效磷呈现显著负相关性(P < 0.05),与株高呈显著正相关(P < 0.05);根长与碱解氮、侵染率、地径和株高呈呈极显著正相关(P < 0.01),与pH和速效磷呈极显著负相关(P < 0.01);地径与速效钾、碱解氮、侵染率和根长呈极显著正相关(P < 0.01)。

    表  2  土壤理化性质与生长指标相关性分析
    Table  2.  Correlation between soil physicochemical property and seedling growth
    项目
    Item
    速效钾
    Rapidly
    available
    potassium
    碱解氮
    Alkali
    hydrolyzable
    nitrogen
    速效磷
    Rapidly
    available
    phosphorus
    酸碱度
    pH
    侵染率
    Colonization
    rate
    根长
    Root
    length
    地径
    Ground diameter
    株高
    Plant
    height
    速效钾 Rapidly available potassium 1
    碱解氮 Alkali hydrolyzable nitrogen 0.618* 1
    速效磷 Rapidly available phosphorus −0.493 −0.818** 1
    酸碱度 pH −0.230 −0.559 0.814** 1
    侵染率 Colonization rate 0.855** 0.789** −0.618* −0.336 1
    根长 Root length 0.683* 0.812** −0.868** −0.795** 0.747** 1
    地径 Ground diameter 0.709** 0.868** −0.883** −0.781** 0.821** 0.917** 1
    株高 Plant height 0.534 0.782** −0.837** −0.795** 0.621* 0.845** 0.878** 1
    *表示显著相关(P < 0.05),**表示极显著相关P < 0.01。
    * Indicates significant correlation at P<0.05; **Indicates extremely significant correlation at P<0.01.
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    从色谱图中查得峰面积并计算其浓度,如图3所示。将样品检测所得到的峰面积带入标准紫杉醇标准曲线中,计算得CK、GM、GI、MA的紫杉醇含量分别为37.50 、62.42 、76.43 、44.89 μg·mL−1;对比可以发现,接种AMF的处理组紫杉醇含量均显著高于空白对照组;而在接种的3个处理中紫杉醇含量由大到小分别是根内根孢囊霉菌、摩西斗管囊霉菌、混合接种。其中接种根内根孢囊霉菌的红豆杉紫杉醇含量高于其他处理组,且高达未接种组红豆杉紫杉醇含量的两倍,可以说明接种根内根孢囊霉菌对南方红豆杉次生代谢物紫杉醇含量的促进效果最好;同时,接种摩西斗管囊霉菌的红豆杉紫杉醇含量次之,也高达未接种组红豆杉紫杉醇含量的1.5倍,这都说明接种AMF对红豆杉紫杉醇含量有显著促进作用;混合接种组红豆杉紫杉醇含量高出未接种组红豆杉紫杉醇含量不多,说明两种不同的AMF混合接种的效果不如单独接种。

    图  3  不同处理对南方红豆杉幼苗紫杉醇质量浓度的影响
    Figure  3.  Effects of AMF treatments on paclitaxel content in T. chinensis seedlings

    将根内根孢囊霉菌和摩西斗管囊霉菌单独接入或混接于苗木根系进行南方红豆杉和AMF的共培养试验,发现AMF具有促进幼苗根系生长的功能,其中根内根孢囊霉菌促进效果更佳。AMF在植物根系成功定殖后,会形成庞大的菌丝网络,不仅可以提高根系对水分、营养物质的吸收和利用效率,还可以加强植物体内营养元素的运输,从而促进植物的生长发育。当土壤环境发生变化时,根系会首先感受并随之产生一系列的生理生化变化 [17],在适磷条件下,接种AM真菌提高根系体积48%,在低磷条件下,接种AM真菌显著提高根系总长、投影面积、表面积、平均直径和体积[18],根茎上的根毛被AMF侵染后与植物共生形成菌根,汲取土壤中的氮、磷、钾等营养物质,使得植物根茎获得更多的营养成分 [19]

    AMF与南方红豆杉根系形成共生形成菌根有利于土壤无机元素的活化、养分的积累等。Liu等[20]将红豆杉定为内生菌根植物,并指出南方红豆杉可与丛枝菌根真菌形成丛枝-囊泡型菌根。AMF能够通过与南方红豆杉共生来增强其生长能力,AMF能够在植物根部形成菌根,活化土壤里的无机元素,促使有机元素增多,同时也增加根系周围土壤的微生物数量,促进植物吸收养分和水分[21]。Qiu 等 [22]研究发现接种AMF提升了固氮植物的固氮作用,增加了土壤中的总氮。同时,该研究还发现,AMF复垦土壤中根系菌根侵染率与速效钾含量呈正相关关系,表明根系菌根侵染率高的AMF复垦土壤具有积累土壤速效钾的潜力。李佳齐等 [23]研究发现AMF可以通过多种方式提高酸化和盐碱化土壤中的养分含量,如碳、氮、磷等固定土壤的养分使之更容易被植物吸收,改良土壤pH。在本研究中所测定的速效钾、碱解氮的含量是明显高于CK和MA组的。潘龙等[24]研究表明AMF活化了无机元素,而速效磷的含量却减少,是因为AMF能够和土壤中的解磷细菌互作,促进土壤中无效磷向有效磷的转化,进而促进植物对磷的高效吸收。

    接种AMF可显著提高南方红豆杉根际土壤微生物数量及土壤酶活力,提高土壤微生物碳源利用率和土壤肥力,增加土壤中的生物多样性,从而达到间接促进宿主植物南方红豆杉生长的目的 [11]。AMF能显著影响南方红豆杉次生代谢物紫杉醇的合成以及含量变化,对紫杉醇的积累也产生了明显的积极影响,其中根内根孢囊霉菌促进效果更佳。AMF作为土壤生态系统中广泛分布的优质微生物资源,能够直接或间接影响植物次生代谢过程,引起药用植物次生代谢产物含量的变化 [25]。南方红豆杉菌根具有不同于其他器官组织内生真菌的菌群,其原始根组织中有远高于普通根及其他器官组织的紫杉醇含量,且愈伤组织与菌根菌互作可提高其紫杉醇含量 [26]。AMF可以促进南方红豆杉中倍半萜类次生代谢物的积累,其中包括紫杉醇、伽玛-谷甾醇等化合物 [3],本研究结果表明接种AMF的南方红豆杉所积累的紫杉醇含量远远大于未接种的,其中根内根孢囊霉菌组的紫杉醇含量最高。

    综上所述,AMF能够显著影响南方红豆杉的次生代谢物,包括促进生长期产生的次生代谢物合成和增加次生代谢物含量等,这对深入了解南方红豆杉与AMF共生的机制、开发南方红豆杉的药用价值具有重要的理论和应用意义。本文探究了根内根孢囊霉菌、摩西斗管囊霉菌对南方红豆杉生长状况以及代谢产物紫杉醇的影响,但对其侵染南方红豆杉的机制还有待研究。今后可应用分子技术以及同位素标记法探讨丛枝菌根共生体系,为接种丛枝菌根真菌提高紫杉醇的含量分子机制研究提供理论基础。同时,本研究仅涉及AMF对南方红豆杉苗期的影响,在种植的过程中,可能会有其他菌种与南方红豆杉形成共生关系,从而影响南方红豆杉的生长状况及代谢产物紫杉醇的含量,关于接种AMF后对土壤其他微生物的影响有待进一步研究。

  • 图  1   部分样品DNA质量检测

    Figure  1.   Determination on DNA quality of some specimens

    图  2   SSR引物BPCA90琼脂糖凝胶检测结果

    Figure  2.   Agarose gel test on SSR primer, BPCA90

    图  3   SSR引物BPTGG82琼脂糖凝胶检测结果

    Figure  3.   Agarose gel test on SSR primer, BPTGG82

    图  4   SSR引物BPCA90与样品扩增产物的变性聚丙烯酰胺凝胶检测图

    Figure  4.   Modified polyacrylamide gel detection on amplification products of BPCA90 and specimens

    图  5   SSR引物BPCA90检测未知性别滇杨

    Figure  5.   Detection on P. yunnanensis of unknown sex using SSR primer, BPCA90

    表  1   滇杨样品采集信息

    Table  1   Specimen collection of P. yunnanensis

    编号
    Code
    性别
    Sex of the individual
    采集地
    Location
    1-10雄性(♂)香格里拉
    11-20雄性(♂)大理
    21-25雄性(♂)禄劝
    25-30雄性(♂)昆明
    1-15雌性(♀)香格里拉
    16-28雌性(♀)大理
    29-30雌性(♀)禄劝
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    表  2   SSR扩增引物信息

    Table  2   Primers for SSR amplification

    引物名称
    Locus name
    引物序列
    Primer sequence(5′-3′)
    退火温度
    Ta(annealing temperature)/℃
    参考文献
    Reference
    Bmsat95 F:ATTGTAACCGATTTGAGAGA
    R:ATTCGCACAATAAGTTCACT
    54.0 NAGARAJA[19]
    Bmsat153 F:TGCTGTCGTCTGCTTCCTAA
    R:CACGGTGCTGACTGTTGTTT
    60.0 NAGARAJA[19]
    Bmsat155 F:AGGGATGATGGGTAAAGAGC
    R:GCAGTAGGCATTTGGAAGGAG
    60.0 NAGARAJA [19]
    Bmsat156 F:CTCCTTATCCATCCGTTT
    R:CTCTCGGATCATAGATACG
    56.0 NAGARAJA[19]
    Bmsat159 F:ATCTGGTGCTCAAAAACGGA
    R:CGGAACCAAACAAGAACGAT
    58.0 NAGARAJA[19]
    Bmsat208 F:ACATGAAATGGGCAAACGACG
    R:GCTCATATTTGCTTGCCGGTT
    55.8 NAGARAJA[19]
    SSR-8 F:TGCATATCGTCCAGGGTGTTTTC
    R:CCCAGCCAGGGTCTTGTTTC
    64.0 SHAN[20]
    BPCA90 F:CCTAGCCTTCATTCTCATTCAGC
    R:GGTTGCTAGTCAGCTTCTTACC
    58.4 PAKULL B[21]
    BPTTG60 F:CAAGAACTCAGACATGATCAGATC
    R:CTTTGCACGTTAATAAGGAGACTG
    56.9 PAKULL B[21]
    BPTGG82 F:CTTGAAGAGCGAAAACTCAGCAG
    R:CTCTAAATCCAAGGTTGGTTACC
    58.4 PAKULL B[21]
    BPTG50 F:CTAGCTGTCGAACGTAATTGGCAC
    R:CTTGCACGAGCCTCCATCACTC
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    35 F:GAGGCCGACAGGATCGTAC
    R:TACGACGTACTCCGGTGGTTTT
    62.0 CHEN[24]
    下载: 导出CSV
  • [1] 王德新, 张晏, 段安安, 等. 滇杨优树无性系物候期观测 [J]. 西南林学院学报, 2009, 29(6):20−23,27.

    WANG D X, ZHANG Y, DUAN A A, et al. Observation on phenological phase of Populus yunnanensis plus tree clones [J]. Journal of Southwest Forestry University, 2009, 29(6): 20−23,27.(in Chinese)

    [2]

    CHEN L H, ZHANG S, ZHAO H X, et al. Sex-related adaptive responses to interaction of drought and salinity in Populus yunnanensis [J]. Plant, Cell & Environment, 2010, 33(10): 1767−1778.

    [3]

    LI L, ZHANG Y B, LUO J X, et al. Sex-specific responses of Populus yunnanensis exposed to elevated CO2 and salinity [J]. Physiologia Plantarum, 2013, 147(4): 477−488. DOI: 10.1111/j.1399-3054.2012.01676.x

    [4]

    LI X, YANG Y Q, SUN X D, et al. Comparative physiological and proteomic analyses of poplar (Populus yunnanensis) plantlets exposed to high temperature and drought [J]. PLoS One, 2014, 9(9): e107605. DOI: 10.1371/journal.pone.0107605

    [5]

    LIAO L Q, LIU J, DAI Y X, et al. Development and application of SCAR markers for sex identification in the dioecious species Ginkgo biloba L. [J]. Euphytica, 2009, 169(1): 49−55. DOI: 10.1007/s10681-009-9913-8

    [6] 李仕金, 辛培尧, 郭鸿彦, 等. 大麻雄性相关RAPD和SCAR标记的研究 [J]. 广东农业科学, 2012, 39(24):151−154. DOI: 10.3969/j.issn.1004-874X.2012.24.047

    LI S J, XIN P Y, GUO H Y, et al. Study of male-specific RAPD and SCAR marker in Cannabis sativa L [J]. Guangdong Agricultural Sciences, 2012, 39(24): 151−154.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1004-874X.2012.24.047

    [7]

    JIANG C X, SINK K C. RAPD and SCAR markers linked to the sex expression locus M in asparagus [J]. Euphytica, 1997, 94(3): 329−333. DOI: 10.1023/A:1002958007407

    [8]

    MIDGLEY J J. Causes of secondary sexual differences in plants—Evidence from extreme leaf dimorphism in Leucadendron (Proteaceae) [J]. South African Journal of Botany, 2010, 76(3): 588−592. DOI: 10.1016/j.sajb.2010.05.001

    [9]

    ZIETKIEWICZ E, RAFALSKI A, LABUDA D. Genome fingerprinting by simple sequence repeat (SSR)-anchored polymerase chain reaction amplification [J]. Genomics, 1994, 20(2): 176−183. DOI: 10.1006/geno.1994.1151

    [10]

    SALIH KAFKAS S K, SELIM CETINER G D, PERL-TREVES R, et al. Development of sex-associated RAPD markers in wildPistaciaspecies [J]. The Journal of Horticultural Science and Biotechnology, 2001, 76(2): 242−246. DOI: 10.1080/14620316.2001.11511358

    [11]

    XU W J, WANG B W, CUI K M. RAPD and SCAR markers linked to sex determination in Eucommia ulmoides Oliv. [J]. Euphytica, 2004, 136(3): 233−238. DOI: 10.1023/B:EUPH.0000032741.99885.c4

    [12]

    GAO W J, LI R L, LI S F, et al. Identification of two markers linked to the sex locus in dioecious Asparagus officinalis plants [J]. Russian Journal of Plant Physiology, 2007, 54(6): 816−821. DOI: 10.1134/S1021443707060143

    [13] 刘嘉艺, 岳俊阳, 刘永胜. 基于毛花猕猴桃基因组的性别相关SSR分子标记的开发 [J]. 合肥工业大学学报(自然科学版), 2022, 45(8):1135−1138,1146.

    LIU J Y, YUE J Y, LIU Y S. Development of sex-related SSR molecular markers based on the genome of Actinidia eriantha [J]. Journal of Hefei University of Technology (Natural Science), 2022, 45(8): 1135−1138,1146.(in Chinese)

    [14] 黄海燕, 杜红岩, 乌云塔娜, 等. 基于杜仲转录组序列的SSR分子标记的开发 [J]. 林业科学, 2013, 49(5):176−181. DOI: 10.11707/j.1001-7488.20130523

    HUANG H Y, DU H Y, WU Y, et al. Development of SSR molecular markers based on transcriptome sequencing of Eucommia ulmoides [J]. Scientia Silvae Sinicae, 2013, 49(5): 176−181.(in Chinese) DOI: 10.11707/j.1001-7488.20130523

    [15] 马霞霞. 基于BSA分析的山葡萄性别位点定位研究[D]. 沈阳: 沈阳农业大学, 2018.

    MA X X. Mapping of sex locus based on BSA analysis in Vitis amurensis[D]. Shenyang: Shenyang Agricultural University, 2018. (in Chinese)

    [16] 王洪梅, 李春明, 白卉, 等. 一种鉴定山杨性别的SSR分子标记的筛选 [J]. 东北林业大学学报, 2017, 45(10):17−19,29. DOI: 10.3969/j.issn.1000-5382.2017.10.005

    WANG H M, LI C M, BAI H, et al. Screening SSR markers for sex identification in Populus davidiana dode [J]. Journal of Northeast Forestry University, 2017, 45(10): 17−19,29.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1000-5382.2017.10.005

    [17] 雷瀚, 刘成, 唐军荣, 等. 滇杨性别相关的SRAP分子标记 [J]. 中南林业科技大学学报, 2020, 40(8):139−146.

    LEI H, LIU C, TANG J R, et al. SRAP molecular markers related to sexuality of Populus yunnanensis Dode [J]. Journal of Central South University of Forestry & Technology, 2020, 40(8): 139−146.(in Chinese)

    [18] 陈学军, 周坤华, 宗洪霞, 等. 中国灌木辣椒种质遗传多样性的SRAP和SSR分析 [J]. 西北植物学报, 2012, 32(11):2201−2205. DOI: 10.3969/j.issn.1000-4025.2012.11.009

    CHEN X J, ZHOU K H, ZONG H X, et al. Genetic diversity of Capsicum frutescens in China as revealed by SRAP and SSR markers [J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica, 2012, 32(11): 2201−2205.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1000-4025.2012.11.009

    [19]

    NAGARAJA G M, MAHESH G, SATISH V, et al. Genetic mapping of Z chromosome and identification of W chromosome-specific markers in the silkworm, Bombyx mori [J]. Heredity, 2005, 95(2): 148−157. DOI: 10.1038/sj.hdy.6800700

    [20]

    SHAN T F, PANG S J. Sex-linked microsatellite marker detected in the female gametophytes of Undaria pinnatifida (Phaeophyta) [J]. Phycological Research, 2010, 58(3): 171−176. DOI: 10.1111/j.1440-1835.2010.00575.x

    [21]

    PAKULL B, GROPPE K, MECUCCI F, et al. Genetic mapping of linkage group XIX and identification of sex-linked SSR markers in a Populus tremula × Populus tremuloides cross [J]. Canadian Journal of Forest Research, 2011, 41(2): 245−253. DOI: 10.1139/X10-206

    [22]

    PAKULL B, GROPPE K, MEYER M, et al. Genetic linkage mapping in aspen (Populus tremula L. and Populus tremuloides Michx. ) [J]. Tree Genetics & Genomes, 2009, 5(3): 505−515.

    [23]

    JAKSE J, STAJNER N, KOZJAK P, et al. Trinucleotide microsatellite repeat is tightly linked to male sex in hop (Humulus lupulus L. ) [J]. Molecular Breeding, 2008, 21(2): 139−148. DOI: 10.1007/s11032-007-9114-x

    [24]

    CHEN S L, JI X S, SHAO C W, et al. Induction of mitogynogenetic diploids and identification of WW super-female using sex-specific SSR markers in half-smooth tongue sole (Cynoglossus semilaevis) [J]. Marine Biotechnology, 2012, 14(1): 120−128. DOI: 10.1007/s10126-011-9395-2

    [25]

    CHARLESWORTH D. Plant sex chromosome evolution [J]. Journal of Experimental Botany, 2013, 64(2): 405−420. DOI: 10.1093/jxb/ers322

    [26]

    BOUALEM A, TROADEC C, CAMPS C, et al. A cucurbit androecy gene reveals how unisexual flowers develop and dioecy emerges [J]. Science, 2015, 350(6261): 688−691. DOI: 10.1126/science.aac8370

    [27]

    RENNER S S. Pathways for making unisexual flowers and unisexual plants: Moving beyond the “two mutations linked on one chromosome” model [J]. American Journal of Botany, 2016, 103(4): 587−589. DOI: 10.3732/ajb.1600029

    [28]

    CHARLESWORTH D. Plant sex determination and sex chromosomes [J]. Heredity, 2002, 88(2): 94−101. DOI: 10.1038/sj.hdy.6800016

    [29] 董莉娜, 苏雪, 孙坤, 等. DNA分子标记在雌雄异株植物性别鉴定中的应用 [J]. 广西植物, 2006, 26(1):63−68. DOI: 10.3969/j.issn.1000-3142.2006.01.015

    DONG L N, SU X, SUN K, et al. Applications of DNA molecular markers on sex identification of dioecious plants [J]. Guihaia, 2006, 26(1): 63−68.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1000-3142.2006.01.015

    [30]

    PAKULL B, KERSTEN B, LÜNEBURG J, et al. A simple PCR-based marker to determine sex in aspen [J]. Plant Biology, 2015, 17(1): 256−261. DOI: 10.1111/plb.12217

    [31] 任朝兴, 黄建昌, 肖艳, 等. 番木瓜雄性性别的RAPD和SCAR标记 [J]. 果树学报, 2007, 24(1):72−75.

    REN C X, HUANG J C, XIAO Y, et al. RAPD and SCAR molecular markers for male trait in Caric papaya [J]. Journal of Fruit Science, 2007, 24(1): 72−75.(in Chinese)

    [32] 唐美玲, 孔瑾, 许雪峰, 等. 山葡萄性别相关AFLP标记筛选及SCAR标记转化 [J]. 园艺学报, 2008, 35(2):195−200. DOI: 10.3321/j.issn:0513-353X.2008.02.007

    TANG M L, KONG J, XU X F, et al. Screening of the AFLP markers associated to the sex locus of Vitis amurensis rupr. and its conversion to SCAR marker [J]. Acta Horticulturae Sinica, 2008, 35(2): 195−200.(in Chinese) DOI: 10.3321/j.issn:0513-353X.2008.02.007

    [33] 董娜, 唐晓姗, 唐琳. 毛叶山桐子性别相关ISSR分子标记的筛选与分析 [J]. 四川大学学报(自然科学版), 2016, 53(2):465−470.

    DONG N, TANG X S, TANG L. Screening and analysis of sex-related ISSR molecular marker in Idesia polycarpa Maxim. var. vestita Diels [J]. Journal of Sichuan University (Natural Science Edition), 2016, 53(2): 465−470.(in Chinese)

    [34] 邓传良, 任映雪, 张卫丽, 等. 葎草性别相关SRAP分子标记的鉴定 [J]. 植物研究, 2014, 34(6):798−802.

    DENG C L, REN Y X, ZHANG W L, et al. Identification of sex related SRAP molecular marker in Humulus scandens [J]. Bulletin of Botanical Research, 2014, 34(6): 798−802.(in Chinese)

    [35] 齐凤慧, 孙宏冉, 詹亚光. EST-SSR标记在水曲柳雌雄鉴定中的应用 [J]. 西北植物学报, 2015, 35(3):472−479. DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2015.03.0472

    QI F H, SUN H R, ZHAN Y G. Application of EST-SSR markers in the sex identification of Fraxinus mandshurica rupr [J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica, 2015, 35(3): 472−479.(in Chinese) DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2015.03.0472

    [36]

    HOU W W, FAN J F, ZHOU F M, et al. RAPD markers related to sex locus in Populus tomentosa [J]. Frontiers of Forestry in China, 2009, 4(2): 223−226. DOI: 10.1007/s11461-009-0037-z

    [37] 张洪福. 对PCR引物设计问题的研究[D]. 济南: 山东大学, 2005.

    ZHANG H F. Study on PCR Primer Design[D]. Jinan: Shandong University, 2005. (in Chinese)

    [38] 许玉兰, 康向阳, 张瑞丽, 等. 木本植物中EST-SSR的通用性及其多态性研究 [J]. 西南林业大学学报, 2012, 32(4):94−99. DOI: 10.3969/j.issn.2095-1914.2012.04.020

    XU Y L, KANG X Y, ZHANG R L, et al. Study on versatility and polymorphism of EST-SSR application to woody plants [J]. Journal of Southwest Forestry University, 2012, 32(4): 94−99.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.2095-1914.2012.04.020

    [39] 徐杨, 邓丽丽, 周丽, 等. 云南松EST-SSR引物在其近缘种中通用性的研究 [J]. 西南林业大学学报, 2016, 36(1):16−20.

    XU Y, DENG L L, ZHOU L, et al. The transferability analysis of microsatellite markers from expressed sequence tags of Pinus yunnanensis to its close related species [J]. Journal of Southwest Forestry University, 2016, 36(1): 16−20.(in Chinese)

    [40] 杨彦伶, 张亚东, 张新叶. 杨树SSR标记在柳树中的通用性分析 [J]. 分子植物育种, 2008, 6(6):1134−1138. DOI: 10.3969/j.issn.1672-416X.2008.06.018

    YANG Y L, ZHANG Y D, ZHANG X Y. Transferability analysis of Populus SSR markers in Salix [J]. Molecular Plant Breeding, 2008, 6(6): 1134−1138.(in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1672-416X.2008.06.018

    [41] 盛文涛. 芦笋性别决定基因分子标记的筛选与开发[D]. 南昌: 南昌大学, 2010

    SHENG W T. Identification and development of molecular makers associated with sex determining gene in Asparagus[D]. Nanchang: Nanchang University, 2010. (in Chinese)

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出版历程
  • 收稿日期:  2023-01-11
  • 修回日期:  2023-06-25
  • 网络出版日期:  2023-08-15
  • 刊出日期:  2023-08-27

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