摘要: 【目的】犬细小病毒（Canine parvovirus，CPV）是严重威胁犬类健康的重要病毒性疾病之一，其非结构蛋白NS1在CPV复制、转录以及对宿主的致病过程中发挥至关重要的作用。然而，其分子作用机制尚未完全了解，缺乏NS1抗体是NS1功能研究的重要限制因素之一。本研究旨在通过原核表达系统高效表达并纯化CPV NS1蛋白，免疫BALB/c小鼠制备高效价、高特异性NS1多克隆抗体，为CPV致病机制研究和防控技术研发奠定基础。【方法】为研制针对CPV NS1的高特异性抗体，本研究通过设计PCR引物扩增NS1目的基因，将其插入pET28a(+)载体中，构建His标签融合NS1目的基因的原核表达载体pET28a(+)-His-NS1。使用大肠杆菌表达系统进行NS1蛋白诱导表达，并用镍柱亲和层析进行纯化。将纯化后的NS1蛋白进行圆二色谱分析并用于BALB/c小鼠免疫，通过静脉眼眶采血方式获取小鼠血清进行ELISA检测、Western blot检测和激光共聚焦显微镜分析，以此评估该多克隆抗体的抗体效价及其特异性。【结果】由双酶切鉴定结果显示，pET28a(+)-His-NS1表达载体成功构建。SDS-PAGE和Western blotting结果显示，成功表达并纯化出大小约为76 kDa的NS1重组蛋白；圆二色谱结果显示，NS1二级结构以α-helix（α-螺旋）为主，与结构预测结果相一致；使用ELISA方法测定小鼠血清效价达1∶409 600以上，说明该多克隆抗体具有良好的免疫原性；采用制备的多克隆抗体进行Western blot试验和激光共聚焦显微镜分析，结果表明其可特异性识别CPV感染细胞所产生的NS1蛋白。【结论】本研究利用原核表达系统成功获得犬细小病毒NS1重组蛋白，并制备出其鼠源多克隆抗体。该制备的多克隆抗体具有良好的特异性和免疫原性，为CPV的治疗性抗体研究提供了新的实验依据，为进一步研究NS1功能和致病性分子机制提供了必要条件。