摘要: 摘要：【目的】 金黄色葡萄球菌α-溶血素（Hlα）是奶牛乳房炎的关键致病因子，本研究旨在构建其原核表达体系，制备具有天然生物学活性的重组Hlα蛋白，为靶向Hlα的药物筛选奠定基础。【方法】 将重组质粒pET30a- Hlα转化至E. coli BL21(DE3)菌株，诱导表达后对包涵体进行变性、纯化及复性。通过溶血实验、乳酸脱氢酶释放实验及Western blotting，系统评价了重组蛋白的溶血活性、细胞膜损伤能力及其对宿主膜受体ADAM10的激活效应。【结果】成功构建了pET30a-Hlα重组表达体系，获得分子量约为43 kDa的目的蛋白。功能验证表明，复性后的重组Hlα具有显著的溶血活性；在浓度≥6.3 μg/mL时可有效损伤细胞膜，当浓度≥50 μg/mL时则显著抑制细胞活力。此外，该蛋白能以剂量依赖性方式激活ADAM10的表达。【结论】本研究成功建立了一套高效、稳定的重组Hlα蛋白表达与纯化方案，获得了具有完整生物学活性的重组蛋白，为系统性研究Hlα的致病机制及开发新型抗奶牛乳房炎感染药物提供了关键的实验材料。