Efficiency Improvement of Low-grade Phosphorus Fertilizer by Phosphate-solubilizing Fungus JL-7
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摘要:目的 针对我国低品位磷矿资源利用率低、耕地土壤有效磷含量低以及传统化肥的大量使用造成的土壤易固化等一系列问题，筛选可解离低品位磷矿的高效菌株，为低品位磷矿的资源利用提供途径。方法 以砂培法从贵州铜仁烟草种植基地土壤中筛选出一株新型解磷真菌，将其命名为JL-7，经过生理生化试验和分子生物学鉴定该菌为烟曲霉菌（Aspergillus fumigatiaffinis）。采用单因素和正交试验对该菌的解磷性能进行优化，在最佳优化条件下制备微生物菌肥并通过烟草盆栽试验进行肥效验证。结果 从烟草根际土壤中筛选的真菌JL-7在优化条件（接菌量1×105 cfu·mL−1、初始pH 6、解离时间8 d、解离温度26 ℃）下对低品位磷矿的最高解磷量达到967.4 mg·kg−1，真菌解离液中pH可降低至2.9左右。以高效解磷菌株JL-7制备菌肥，通过烟草盆栽种植试验，该菌肥对烟草（云烟87）的茎围、株高、最大叶面积分别提升44.60%、57.29%、62.90%。种植后对土壤进行分析，结果表明，该菌肥对土壤中的有效磷、速效钾、碱解氮含量分别提升48.5%、3.7%、9.1%。结论 菌株JL-7解磷效果优异且性能稳定，具有制备新型微生物肥料的潜力，具备一定的推广及应用价值。Abstract:Objective A fungal strain highly efficient in dissociating low-grade phosphorus ore for fertilization was isolated to determine the applicability.Method Soil samples at Guizhou Tongren Tobacco Planting Base were screened using the sand culture method for fungi that exhibited capability to solubilize phosphate. The selected isolate was identified by physiological, biochemical, and molecular biological tests. Conditions for optimal phosphate solubilization were determined by single factor and orthogonal experiments. Effect of the fungal addition on fertilization was verified by a pot test conducted on tobacco seedlings.Result The selected isolate was code-named JL-7 and, subsequently, identified to be a strain of Aspergillus fumigatiaffinis. The optimized conditions to maximize the phosphate-solubilization of JL-7 applied an inoculation at the rate of 1×105 cfu·mL−1 with an initial pH of 6 to incubate at 26 ℃ for 8 d. The process dissolved a low-grade phosphorus ore material up to 967.4 mg·kg−1 with the resulting solution reduced to approximately pH 2.9. In the pot experiment, the Yunyan 87 tobacco seedlings grown on a medium with the addition of a JL-7-inoculated phosphorus fertilizer had the stem girth, plant height, and maximum leaf area increased by 44.60%, 57.29%, and 62.90%, respectively, over control. Meanwhile, the pot soil increased 48.5% on available phosphorus, 3.7% on available potassium, and 9.1% on alkali-hydrolysable nitrogen after the planting as well.Conclusion The identified strongly phosphate-solubilizing Fungus JL-7 displayed a significant and consistent ability of dissolving phosphate. It was considered a potential candidate to be widely promoted as a microbial fertilization enhancer.
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0. 引言
【研究意义】磷（P）是植物生长、发育所必需的关键性元素，对多种农作物的生根、发育、结果等起到促进作用[1]。目前，植物的磷源主要由工业肥料进行补充，然而，一般土壤中的磷素易被钙、铁、铝等离子固定，形成无效磷，难以被植物直接吸收利用[2-4]。作为土壤中的一类植物根际促生菌，解磷菌将土壤中的无效磷转化为植物可直接吸收利用的有效磷[5]，因此利用解磷菌制备微生物肥料可以增加土壤中的有效磷含量，在一定程度上减少工业化肥的使用。近年来解磷菌在农业方面的应用研究逐步受到重视，其中主要涉及的农作物包括花生、玉米、小麦、大豆等[6-9]。解磷菌主要通过分泌有机酸（草酸、柠檬酸、乳酸、葡萄糖酸等）、磷酸酶分别对无机磷与有机磷进行解离转化[10-12]。目前对解磷菌的开发利用主要集中于解磷细菌，研究表明，解磷真菌种类和数量在解磷菌中较少，但相较于解磷细菌而言，解磷真菌的解磷能力更强，性能也更加稳定[13]。因此，开展对解磷真菌的筛选并进行开发利用对微生物肥料的发展具有重要意义。【前人研究进展】针对土壤有效磷匮乏的现状，国内外均有一些创新性研究。Shirmohammadi等[14]使用耐旱磷酸盐假单孢菌对田间土壤进行接种，研究接种后的土壤对小麦生长的影响，结果表明接种后的土壤有效提升了小麦株高、叶绿素指数、千粒重等指标。刘洋等[15]通过接种丛枝菌根对油菜进行盆栽试验，研究结果显示，接种后的土壤有效磷、油菜产量均显著提升。因此，解磷真菌对土壤的改善以及对农作物的促生作用明显。对于低品位磷矿的利用而言，Iwasaki等[16]通过煅烧和部分酸化的方法处理低品位磷矿制备磷肥，探究了土壤水分条件与磷肥施用量及种类的关系，为低品位磷矿用于磷肥制备提供了一定的思路。此外，Calle-Castaneda等[17]使用嗜酸细菌（Acidithiobacillus thiooxidans）产生的生物酸对低品位磷矿进行磷的回收利用，结果表明该方法效率高且成本低，表明以生物方法处理低品位磷矿制备磷肥具有可操作性。【本研究切入点】目前，解磷细菌的报道相对广泛，然而解磷真菌的研究报道仍较少，其在矿产资源方面的应用研究更少。【拟解决的关键问题】本研究在当前土壤有效磷含量低且磷肥利用率低的背景下，从烟草根际土壤中筛选出一株解磷真菌，以生物学手段结合该菌形态学以及理化试验，对该菌株进行鉴定保存；基于该真菌的解离作用，将其解离低品位磷矿进行生物菌肥的制备，以烟草种植试验进行肥效验证，并用该真菌处理低品位磷矿制备微生物肥料，以期为低品位磷矿的应用寻求新途径的同时，丰富解磷菌资源库。
1. 材料与方法
1.1 菌株的分离与鉴定
1.1.1 真菌筛选及低品位磷矿概况
从贵州铜仁烟草种植基地的烟草根际（10～20 cm）获取土壤样品，装于自封袋后带回实验室，置于冰箱（4 ℃）保存。取土壤样品各1.0 g于250 mL三角瓶中（无菌带塞），加入99 mL的无菌蒸馏水，于（170±10） r·min−1、（28±1） ℃的条件下摇床振荡30 min，振荡结束后静置15 min，取上清液（1 mL）分别稀释至1×10−3、1×10−4、1×10−5、1×10−6、1×10−7，然后分别取100 µL稀释液平板涂布于难溶性无机磷固体培养基，置于30 ℃恒温培养箱中，最后使用接种针挑取长势好的真菌菌落转于马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基中进行分离纯化；纯化后的真菌再以5%的接种量接入难溶性无机磷液体培养基中，在170 r·min−1 、30 ℃的条件下摇床培养7 d，培养结束后对培养液进行离心（12 000 r·min−1），用钼锑抗比色法[18]测定上清液中的可溶性磷含量，通过对比，筛选出解磷效果明显的真菌JL-7，其复筛解磷量为264.13 mg·L−1。
供试低品位磷矿样品取自贵州省贵阳市开阳县某磷矿山废弃矿石，通过X射线荧光光谱（XRF）[19]对低品位磷矿中主要矿物成分进行分析测定，其主要矿物成分中CaO、P2O5、SiO2含量分别为35.97%、17.26%、29.02%。
1.1.2 试验培养基
难溶性无机磷液体培养基：葡萄糖10 g、(NH4)2SO4 0.5 g、NaCl 0.3 g、KCl 0.3 g、Ca3(PO4)2 5 g、MnSO4·H2O 0.03 g、MgSO4·7H2O 0.3 g、FeSO4·7H2O 0.03 g，pH=7.0～7.2。难溶性无机磷固体培养基：葡萄糖10 g、(NH4)2SO4 0.5 g、NaCl 0.3 g、KCl 0.3 g、Ca3(PO4)2 5 g、MnSO4·H2O 0.03 g、MgSO4·7H2O 0.3 g、FeSO4·7H2O 0.03 g、琼脂15～20 g、pH=7.0～7.2。PDA（活化）斜面培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂15 ～20 g、氯霉素0.2 g，pH=7.0～7.2。LB液体培养基：牛肉膏1 g、酵母粉2 g、氯化钠5 g、蛋白胨5 g、氯霉素0.2 g，pH=7.0～7.2。上述各培养基的配制总体积均为1 L。
1.1.3 菌株鉴定
真菌JL-7的形态特征：将真菌菌丝点接种于PDA固体培养基中央，恒温（30 ℃）培养并观察记录真菌菌落形态变化，同时用显微镜观察其菌落形态，并对该菌进行生理生化鉴定及生长曲线的绘制。
真菌JL-7系统发育树的构建：将菌株DNA的PCR扩增产物进行基因测序，将所得序列在美国国立生物技术信息中心（NCBI）上进行比对，并利用MEGA-X软件构建其系统发育树。
1.2 JL-7的解磷条件优化
1.2.1 JL-7的单因素试验
以无机磷液体培养基为基础，将低品位磷矿替换磷酸钙作为唯一磷源，在50 mL培养液（不含磷）中加入5 g低品位磷矿，以不同的单因素（接菌量、培养液初始pH、解离时间、解离温度）对解磷条件进行探究。
因素梯度设置：接菌量含量1×102、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107cfu·mL−1；培养液初始pH 值3、4、5、6、7、8、9、10；解离时间3、4、5、6、7、8、9、10 d；解离温度22、24、26、28、30、32、34、36 ℃。
1.2.2 JL-7的正交试验
由JL-7的单因素试验结果，采用正交设计助手ⅡⅤ3.1设计L9（3）4正交试验表[20]，以正交试验结果来确定真菌JL-7解离低品位磷矿的最佳条件。
1.3 两种菌肥的制备
1.3.1 JL-7菌肥制备
将JL-7在PDA斜面培养基活化后接种到马铃薯葡萄糖液体培养基中进行摇瓶扩大培养，于28 ℃、170 r·min−1条件下培养7 d，培养结束后分装到50 mL带盖离心管中置于冰箱（4 ℃）备用，标记为A。
1.3.2 JL-7解离低品磷矿菌肥制备
真菌JL-7在PDA斜面培养基活化后接种到磷矿粉液体培养基中进行摇瓶扩大培养，以正交试验得出的最佳条件为培养条件；培养结束后分装到50 mL带盖离心管中置于冰箱（4 ℃）备用，标记为B。
1.4 烟草种植试验
1.4.1 试验设计
烟草盆栽试验于温室大棚内进行，供试土壤取自贵州省贵阳市花溪区长期施加化肥的耕地，风干处理后经20目过筛。设置3组处理方式：①不施肥（空白对照）；②施加JL-7号真菌菌肥；③施加JL-7解离低品位磷矿菌肥。每个处理3次重复，一共9盆，每盆装土500 cm3，施用量为每盆25 mL，施用间隔为10 d。
1.4.2 种植过程及土壤测定
移栽时选取长势相当的烟苗，将移栽好的烟苗置于温室中培育，21 d后对种植培育前后的烟草长势与土壤养分进行测定，烟草的长势测定包括茎围、株高、最大叶面积，土壤养分测定包括有效磷、速效钾、碱解氮含量，测定方法参照《土壤分析技术规范》[21]。其中株高为烟苗植株根颈部到顶部之间的距离，顶部指主茎顶部，茎围为株高1/3处测量茎的周长，最大叶面积为单株烟苗中部叶片，取最大叶面积。
2. 结果与分析
2.1 JL-7的鉴定
2.1.1 JL-7的形貌特征
通过肉眼和显微镜对真菌体貌及显微形态进行观察（图1）。JL-7的初生菌丝（a）为白色，呈茸毛状，且菌落中间突起，以放射状进行扩散；5 d后菌落中间开始出现烟绿色孢子（b）；9 d左右菌丝可以布满整个平板（c），从平板背面可以看到培养基基质变成黄褐色（d）。使用光学显微镜在1 000倍放大的条件下可以观察到JL-7真菌菌丝（e）透明，呈鹿角状分生，其菌丝为有隔菌丝；其分生孢子梗（f）顶端膨大成为顶囊，呈半球形，顶囊表面生成球形分生孢子，分生孢子呈球形。
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图 1 JL-7的生长变化过程及显微图a：初生菌丝生长情况；b：5天后菌落生长情况；c、d：9天后菌落生长情况和平板背面观察到的菌落外观；e、f：光学显微镜下放大1 000倍观察到的真菌菌丝和分生孢子梗。Figure 1. Growth and change process and micrograph of JL-7a: Growth of primary mycelium; b: growth of colony after 5 d; c and d: growth of colony after 9 d and rear view of colony on plate; e and f: fungal mycelium and conidiophore under optical microscope (1 000×).2.1.2 分子生物学鉴定
菌株JL-7基于18S rRNA基因序列比对结果，以NR119934为外枝，以邻接法构建系统发育树（图2）；结合生理生化试验结果（表1），参考真菌鉴定手册[22]，将该菌鉴定为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。
表 1 JL-7的生理生化试验结果Table 1. Physiological and biochemical test results on JL-7项目
Item结果
Result项目
Item结果
Result项目
Item结果
ResultD-阿拉伯糖 − D-核糖 + 麦芽三糖 + L-阿拉伯糖 + D-棉子糖 + N-乙酰-半乳糖胺 + D-纤维二糖 + L-鼠李糖 + N-乙酰-葡萄糖胺 + L-山梨糖 − D-甘露糖 + N-乙酰-甘露糖胺 + D-果糖 + D-松三糖 + D-葡萄糖胺 + L-岩藻糖 + D-蜜二糖 + 葡糖醛酰胺 − D-半乳糖 − D-塔格糖 + 丙酸胺 + +表示阳性反应；−表示阴性反应。
+ means positive reaction; − means negative reaction.以菌株干重为指标，对菌株进行生长曲线（图3）的绘制以及pH曲线图，从图中可以看出，JL-7的对数生长期在4～6 d，6 d后到达稳定期；在菌株解离过程中，pH值随时间降低，5 d后基本稳定于2.9～3.0。
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图 3 菌株JL-7的生长曲线及真菌解离液中pH的变化曲线Figure 3. Growth curve of JL-7 and pH changes of phosphae-dissociation solution2.2 解磷条件优化结果
菌株JL-7的单因素试验结果（图4）表明，培养7 d后解磷量基本达到稳定；在pH为6、接菌量为1×105 cfu·mL−1、温度26 ℃时解离低品位磷矿的效果最佳。按照单因素最佳条件结果设计正交设计表（表2）进行正交试验。
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图 4 不同因素对真菌JL-7解磷量的影响Figure 4. Effect of various factors on phosphate solubilization of JL-7表 2 单因素设计的L9(3)4正交试验表Table 2. L9(3)4 orthogonal experiment design with single factor experiment因素
Level接菌量
Inoculation
amount/(cfu·mL−1)初始pH
Initial pH解离时间
Dissociation
time/d解离温度
Dissociation
temperature/ ℃1 1×104 5 6 26 2 1×105 6 7 28 3 1×106 7 8 30 试验结果（表3）表明，真菌JL-7解离低品位磷矿的最佳条件为：接菌量1×105 cfu·mL−1，初始pH值6，解离时间8 d，解离温度26 ℃。通过各因素的极差值大小，可得出JL-7解离低品位磷矿主要受接菌量、解离时间和初始pH的影响。这是因为适宜的菌浓度、pH环境下，菌株的活性会更高，菌株在高活性下对相关活性物质的分泌也更为积极，从而可以更好地对无机磷进行解离；同时菌株解磷过程具有一定的累积效应，最终解磷量需要一定的时间累积，而所选取的解离温度均在菌株适宜温度范围，其梯度也较小，所以试验所选用的温度对最终解磷量的影响最小。在最佳条件下进行解离低品位磷矿试验，结果表明，在最佳条件下，JL-7对低品位磷矿的溶磷量达到967.4 mg·kg−1。
表 3 正交试验对菌株JL-7解磷条件的优化结果Table 3. Orthogonal optimized conditions for JL-7 phosphate solubilization因素
Level接菌量
Inoculation amount/(cfu·mL−1)初始pH
Initial pH解离时间
Dissociation time/d解离温度
Dissociation temperature/ ℃有效磷含量
Available phosphorus/(mg·kg−1)1 1×104 5 6 26 779. 8 2 1×104 6 7 28 811.3 3 1×104 7 8 30 793.1 4 1×105 5 7 30 852.5 5 1×105 6 8 26 872.9 6 1×105 7 6 28 828.8 7 1×106 5 8 28 837.6 8 1×106 6 6 30 812.1 9 1×106 7 7 26 803.6 K1 794.733 823.300 806.900 818.767 K2 851.400 832.100 822.467 825.900 K3 817.767 805.500 834.533 819.233 极差 R 56.667 23.600 27.633 7.133 2.3 菌肥肥效验证
经A、B两种处理方式制备的菌肥，对烟草幼苗的影响结果（图5）表明，两种处理方式与对照组（CK）相比，都显著提升烟苗茎围、株高以及最大叶面积。其中，B处理对烟草幼苗的株高从4.87 cm提升至7.66 cm，约提高了57.3%；A处理对烟草幼苗的株高从4.87 cm提升至6.91 cm，约提升了41.9%，A处理提升量优于B处理。而最大叶面积表现上，A处理提升量（74.6%）略高于B处理（62.9%）；B处理方式对茎围的促进作用也较为明显，其促进量约为44.6%。总的来说，B处理略优于A处理，同时两种处理方式显著优于空白对照。
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图 5 菌肥对烟草生长促进效果图中不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。Figure 5. Effect of fungal fertilization enhancer on tobacco growthData with different lowercase letters indicate significant differences (P＜0.05).两种处理方式均为烟草提供了养分。就B处理而言，其养分主要来源于菌株对低品磷矿的解离作用以及菌株对土壤的活化；就A处理而言，推测其养分除了菌株对土壤固化的磷等营养元素的活化以外，A处理还使用了含有马铃薯、葡萄糖的培养基，这些成分为肥料提供了更多的有机质，生物有机肥可以有效改善土壤理化性质，对烟草生长具有促进作用，推测这是A处理的菌肥种植下的烟草最大叶片面积优于B处理的原因之一，这也与柴文亚等[23]研究认为施用生物有机肥可以有效提升烟叶面积系数的结论一致。B处理下的肥料种植结果在茎围和株高方面显著优于A处理，推测这是因为B处理下的肥料含磷量较高，而磷在烟草早期会促进根际生长[24]，发达的根系对烟草早期吸收养分更为有利，因此在烟草指标中表现出了更为良好的茎围以及株高。
2.4 菌肥对土壤性能的提升
对施加不同处理方式菌肥及空白组的土壤进行碱解氮、有效磷和速效钾的测定分析，结果（表4）表明，A处理与B处理均显著地提升了土壤碱解氮、有效磷和速效钾的含量。其中，B处理对土壤有效磷的提升作用最为明显，提升量达到48.5%；A处理（仅施用培养菌株）对有效磷的提升量达到了24.2%。两种处理方式对碱解氮的含量也有一定的提升作用，以A处理方式占优，提升量约为15.7%，B处理的提升量约为9.1%。对于速效钾的提升而言，A和B两种处理方式对其提升量均不高，约提高 3.7%左右。
表 4 菌肥对土壤肥力的影响Table 4. Effect of fungal fertilization enhancer on soil fertility（mg·kg−1） 处理方式
Processing method碱解氮
Alkali-hydrolyzable nitrogen有效磷
Available phosphorus速效钾
Available potassiumCK（对照） 107.47±2.09 c 58.87±2.56 c 139.20±1.06 b A（施用A菌肥） 124.43±1.94 a 73.10±2.59 b 144.45±2.17 a B（施用B菌肥） 117.17±2.65 b 87.41±0.97 a 144.42±1.88 a 同列数据后不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。
Data with different letters on the same column indicate significant differences (P＜0.05).3. 讨论与结论
近年来，利用微生物制备肥料的报道越来越多，本研究利用一株解磷真菌JL-7制备了两种微生物肥料，在烟草盆栽种植试验中，两种处理方式下的菌肥在各指标中显著优于空白对照，而两种处理方式下的菌肥间存在一定的差异性。B处理下的菌肥总体优于A处理下的菌肥，这是因为B处理下的菌肥外加一定的低品位磷矿，因此磷水平更高，而A处理下的菌肥中外加的有机质虽然可促进烟草生长，但磷含量会相对较低，低磷下的肥料，一定程度上会抑制烟草早期的生长发育；而试验测定时烟草处于早期，在烟草早期，磷对烟草的生长促进作用较为明显，尤其在促进根际生长发育方面，而磷缺乏所表现出的生长抑制在烟草早期就会出现，这也与李玥等[25]的研究结论一致。在菌株筛选方面，解磷真菌逐步受到重视，李静等[26]从小麦田土壤中筛选出一株具备解磷能力的解磷真菌，鉴定为红青霉（Penicillium rubens）；该真菌对Ca3(PO4)2的溶解能力达到328.79 mg·L−1，本试验从烟草土壤根际筛选的解磷真菌JL-7，在复筛阶段对磷酸钙的溶解量达到264.13 mg·L−1，经过解磷条件优化后，JL-7对低品位磷矿粉的溶解能力达到967.4 mg·kg−1，因此，解磷真菌JL-7具备良好的解磷能力。
解磷菌在农业领域的应用越来越广泛，其中多数以Ca3(PO4)2为处理对象进行研究[27-28]，而使用解磷微生物处理低品位磷矿的研究还较少。刘娟等[29]研究了黑曲霉 J4（Aspergillus niger J4
）在不同培养基发酵中对中低品磷矿粉的溶磷效果，结果表明，其在不同培养基中磷溶量可达到6.50～17.23 g·kg−1，JL-7处理使用磷矿为低品位磷矿，优化条件下溶磷量为967.4 mg·kg−1，对低品位磷矿有较强的溶解能力。因此，利用JL-7对低品位磷矿的解离作用制备微生物肥料，并研究其对烟草的生长促进作用意义重大。 本试验从烟草根际土壤中筛选出一株解磷效果明显的真菌JL-7，经生理生化试验和分子生物学鉴定，将JL-7菌株鉴定为烟曲霉菌（Aspergillus fumigatiaffinis）。JL-7对低品位磷矿的溶解能力较强，通过种植试验验证了JL-7对烟草的促生作用，总的来说，菌株JL-7解磷效果明显且稳定，具备微生物肥料开发的潜力。
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图 1 JL-7的生长变化过程及显微图
a：初生菌丝生长情况；b：5天后菌落生长情况；c、d：9天后菌落生长情况和平板背面观察到的菌落外观；e、f：光学显微镜下放大1 000倍观察到的真菌菌丝和分生孢子梗。
Figure 1. Growth and change process and micrograph of JL-7
a: Growth of primary mycelium; b: growth of colony after 5 d; c and d: growth of colony after 9 d and rear view of colony on plate; e and f: fungal mycelium and conidiophore under optical microscope (1 000×).
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图 3 菌株JL-7的生长曲线及真菌解离液中pH的变化曲线
Figure 3. Growth curve of JL-7 and pH changes of phosphae-dissociation solution
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图 4 不同因素对真菌JL-7解磷量的影响
Figure 4. Effect of various factors on phosphate solubilization of JL-7
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图 5 菌肥对烟草生长促进效果
图中不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。
Figure 5. Effect of fungal fertilization enhancer on tobacco growth
Data with different lowercase letters indicate significant differences (P＜0.05).
表 1 JL-7的生理生化试验结果
Table 1 Physiological and biochemical test results on JL-7
项目
Item结果
Result项目
Item结果
Result项目
Item结果
ResultD-阿拉伯糖 − D-核糖 + 麦芽三糖 + L-阿拉伯糖 + D-棉子糖 + N-乙酰-半乳糖胺 + D-纤维二糖 + L-鼠李糖 + N-乙酰-葡萄糖胺 + L-山梨糖 − D-甘露糖 + N-乙酰-甘露糖胺 + D-果糖 + D-松三糖 + D-葡萄糖胺 + L-岩藻糖 + D-蜜二糖 + 葡糖醛酰胺 − D-半乳糖 − D-塔格糖 + 丙酸胺 + +表示阳性反应；−表示阴性反应。
+ means positive reaction; − means negative reaction.
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表 2 单因素设计的L9(3)4正交试验表
Table 2 L9(3)4 orthogonal experiment design with single factor experiment
因素
Level接菌量
Inoculation
amount/(cfu·mL−1)初始pH
Initial pH解离时间
Dissociation
time/d解离温度
Dissociation
temperature/ ℃1 1×104 5 6 26 2 1×105 6 7 28 3 1×106 7 8 30
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表 3 正交试验对菌株JL-7解磷条件的优化结果
Table 3 Orthogonal optimized conditions for JL-7 phosphate solubilization
因素
Level接菌量
Inoculation amount/(cfu·mL−1)初始pH
Initial pH解离时间
Dissociation time/d解离温度
Dissociation temperature/ ℃有效磷含量
Available phosphorus/(mg·kg−1)1 1×104 5 6 26 779. 8 2 1×104 6 7 28 811.3 3 1×104 7 8 30 793.1 4 1×105 5 7 30 852.5 5 1×105 6 8 26 872.9 6 1×105 7 6 28 828.8 7 1×106 5 8 28 837.6 8 1×106 6 6 30 812.1 9 1×106 7 7 26 803.6 K1 794.733 823.300 806.900 818.767 K2 851.400 832.100 822.467 825.900 K3 817.767 805.500 834.533 819.233 极差 R 56.667 23.600 27.633 7.133
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表 4 菌肥对土壤肥力的影响
Table 4 Effect of fungal fertilization enhancer on soil fertility
（mg·kg−1） 处理方式
Processing method碱解氮
Alkali-hydrolyzable nitrogen有效磷
Available phosphorus速效钾
Available potassiumCK（对照） 107.47±2.09 c 58.87±2.56 c 139.20±1.06 b A（施用A菌肥） 124.43±1.94 a 73.10±2.59 b 144.45±2.17 a B（施用B菌肥） 117.17±2.65 b 87.41±0.97 a 144.42±1.88 a 同列数据后不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。
Data with different letters on the same column indicate significant differences (P＜0.05).
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