Genetic Diversity and Principal Components of Tea Germplasms from Shiting Plantations in Nan'an
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摘要:目的
深入了解南安石亭群体种茶树种质资源（Camellia sinensis）的遗传多样性及其直接利用价值，为南安石亭群体种茶树种质资源的创新利用提供科学依据。
方法利用SNP分子标记技术对17份南安石亭群体种茶树种质资源及福建6个代表性品种进行亲缘关系及遗传多样性分析。进一步采用高效液相色谱法（HPLC）和超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定代表性的10份南安石亭群体种茶树种质资源儿茶素及游离氨基酸等组分含量。
结果筛选出44个适用于鉴定南安石亭群体种茶树种质资源的SNP位点，构建南安石亭群体种茶树种质资源SNP指纹图谱。通过UPGMA进化树构建，发现23个样品可分为4个亚群，南安石亭群体种茶树种质资源与闽北地区的肉桂、奇丹亲缘关系较近。此外，进行了氨基酸，儿茶素含量分析，发现南安石亭群体种茶树种质资源的主要品质成分含量差异显著（P＜0.05）。儿茶素总量为107.55～177.47 mg·g−1，游离氨基酸总量为8.35～32.32 mg·g−1。其中ST2、ST3、ST6、ST17种质具有较高的EGCG或EGCG3"Me含量，ST3种质氨基酸含量最高、儿茶素苦涩味指数最低。
结论南安石亭群体种茶树种质资源丰富，与闽北地区茶树资源亲缘关系较为亲密。ST2、ST3、ST6和ST17具有较高的EGCG或EGCG3"Me含量，ST3适制绿茶，可进一步开展选育工作。
Abstract:ObjectiveGenetic diversity of the tea germplasms preserved at Shiting plantations in Nan’an was studied for promoting the utilization of the local specialty.
MethodsSNP molecular marker technology was applied to analyze the genetic diversity and relationships of 17 tea germplasms from the Shiting plantations and 6 representative varieties from Fujian. HPLC and UPLC-MS/MS were employed to determine the contents of catechins and free amino acids in 10 selected samples for a comparison among the tea varieties.
ResultsForty-four SNP loci suitable for identifying the tea plants were selected. An SNP fingerprint profile of the germplasms was constructed. The UPGMA evolutionary tree divided the 23 germplasms into 4 subgroups, which showed a close relation with Rougui and Qidan teas from northern Fujian. Significant differences were found on the contents of major amino acids and catechins among the varieties (P＜0.05) with total free amino acids from 8.46 mg·g−1 to 32.66 mg·g−1 and catechins ranging from 107.56 mg·g−1 to 177.60 mg·g−1. The germplasms coded ST2, ST3, ST6, and ST17 had high contents of EGCG or EGCG3"Me, while ST3 the most on amino acids and the least on catechin bitterness index.
ConclusionShiting plantations in Nan’an had a rich collection of tea germplasms that were closely related to those in northern Fujian. Among them, ST2, ST3, ST6, and ST17 teas had high contents of either EGCG or EGCG3"Me. ST3, specifically, appeared to be suitable for making green tea as well as in breeding programs.
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Keywords:
- Shiting, Nan’an /
- Camellia sinensis /
- germplasm /
- genetic diversity /
- component analysis /
- SNP
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抗生素是人类控制和治疗细菌感染的重要手段，但在首例耐药细菌报道的同时，抗生素治疗中的细菌持续存在(Persistence)问题也随之产生[1]。细菌可以通过基因突变对抗生素产生耐药性，但是对抗生素耐受的持留菌(Persister)及其子代并没有产生抗生素耐药性，而是在暴露于致死剂量的抗生素治疗时，它们始终以一种休眠或缓慢生长的状态存在[2]。由于抗生素只能靶向功能活跃的细胞，不能有效作用不活跃或休眠的持留菌，所以抗生素治疗结束后，持留菌又开始恢复正常生长，重新感染。
持留菌现象相当普遍，目前研究得比较清楚的主要有结核分枝杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和类鼻疽伯克氏菌等[1, 3-5]。奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)属于肠杆菌科变形杆菌属，是泌尿道感染的主要病原菌之一(仅次于大肠埃希菌)，女性第一次尿道感染后约20%会复发，80%感染过2次尿道感染的女性仍会再复发[6]。2014年Borgman CJ报道一位84岁泪囊炎病人，虽已进行经典的抗生素治疗，但是仍反复出现泪囊炎；进一步对这位病人眼部分泌物进行培养，发现导致泪囊炎反复发病的是很少在眼部出现的奇异变形杆菌[7]。临床实践显示奇异变形杆菌存在持留菌现象。奇异变形杆菌还是家禽养殖的重要病原微生物，各日龄的鸡群均可感染。在环境改变、季节更替、转群和混合感染其他病原时，鸡群抵抗力下降，病情加重，病死率升高，给家禽养殖业带来巨大的经济损失[8]。硫酸庆大霉素是奇异变形杆菌治疗常用的抗生素，研究结果显示，硫酸庆大霉素已经无法高效控制鸡源奇异变形杆菌所引起的感染[9]。这一现象可能是由鸡源奇异变形杆菌产生耐药性引起的，也可能是因为持留菌导致的。目前还没有关于硫酸庆大霉素作用下鸡源奇异变形杆菌持留菌形成特征的相关报道。本研究以本实验室分离的鸡源奇异变形杆菌PM2658为研究对象，首先分析奇异变形杆菌对抗生素的药敏性，研究奇异变形杆菌在不同条件下持留菌形成特征和抗生素耐受性，以期为控制鸡源奇异变形杆菌流行传播提供理论依据。
1. 材料与方法
1.1 菌种和培养基
鸡源奇异变形杆菌PM2658，由闽南师范大学福建省生物实验教学示范中心保存，来源于感染奇异变形杆菌的雏鸡肝。鸡源奇异变形杆菌PM2658用LB(Luria-Bertani)培养基培养。LB液体培养基配方如下：10 g蛋白胨、5 g酵母粉、10 g NaCl，调节pH值至7.4~7.6；LB固体培养基加入琼脂15 g。为了抑制奇异变形杆菌在固体培养基上的迁移生长，形成单个菌落，在LB固体培养基里加入0.1%苯酚。水解酪蛋白培养基(Mueller-Hinton，MH)用于抗生素对细菌最小抑菌浓度(Minimum inhibitory of concentration，MIC)的测定。
1.2 抗生素配制
10 mg·mL-1硫酸庆大霉素(Gentamicin sulphate，Gen)，无菌水配制，0.22 μm滤器过滤除菌；10 mg·mL-1头孢噻肟钠(Cefotaxime sodium，Cef)，二甲基亚砜配制；5 mg·mL-1氧氟沙星(Ofloxacin，Ofx)，冰醋酸配制，0.22 μm滤器过滤除菌。所有抗生素均于-20℃保存。
1.3 试验方法
1.3.1 鸡源奇异变形杆菌最小抑菌浓度(MIC)测定
利用二倍稀释法[10]，挑取鸡源奇异变形杆菌PM2658单菌落于LB培养基中，37℃培养至A600为0.5~0.8，用MH稀释A600为0.02，同时用MH培养基两倍稀释Gen、Cef和Ofx在一定的浓度范围内。取100μL上述稀释好的细菌至100 μL含有相应抗生素的MH培养基中，37℃培养24 h，岛津UV-1750分光光度计测定波长为600 nm处的光吸收值，分析MIC值。试验重复3次。
1.3.2 鸡源奇异变形杆菌在硫酸庆大霉素不同浓度下形成持留菌的比较
根据Hofsteenge等[5]的报道，LB培养基培养鸡源奇异变形杆菌PM2658至稳定期，用LB培养基稀释至A600为0.2，分别加入Gen使终浓度为16×MIC和100×MIC，在2、4、6和12 h不同处理时间点，取菌液100 μL，8 000 r·min-1离心5 min，0.85%生理盐水洗涤1次，10倍连续稀释抗生素处理过的菌液和A600为0.2未处理的菌液，取5 μL斑点培养(spot-plate)于不含抗生素LB培养基上，37℃培养，24 h后计菌落形成个数(CFU，Colony-forming unit)。GraphPad Prism 6软件分析持留菌形成率，持留菌形成率=每毫升抗生素处理过菌液的CFU/每毫升A600为0.2未处理菌液的CFU。利用软件SPSS 25分析在不同浓度下持留菌形成率是否有显著性差异。
1.3.3 奇异变形杆菌持留菌遗传特性的检测
为了检测1.3.2中及下面实验中经抗生素处理后在普通LB培养基上生长的菌落不是基因突变产生的抗生素耐药菌株，把经抗生素处理后的菌液平行地斑点培养于含有相应浓度抗生素的LB培养基上，37℃培养，24 h后观察生长情况[11]。随机挑取1.3.2中及下面经过抗生素处理后在不含有抗生素LB培养基上生长的菌落，培养至对数期，按照二倍稀释法，测定其MIC值[10]。
1.3.4 鸡源奇异变形杆菌持留菌抗生素多重耐受性的分析
取稳定期的鸡源奇异变形杆菌PM2658，按照1.3.2和1.3.3的方法测定其在不同抗生素组合下的持留菌形成情况和遗传学特性，抗生素组合如下：16×MIC Gen-4×MIC Cef、16×MIC Gen-4×MIC Ofx、4×MIC Cef-4×MIC Ofx、16×MIC Gen-4×MIC Cef-4×MIC Ofx。
1.3.5 鸡源奇异变形杆菌不同营养条件形成持留菌的研究
分别在LB培养基、1/2 LB培养基和1/5 LB培养基中，培养鸡源奇异变形杆菌PM2658至稳定期，在16×MIC Gen处理下，采用1.3.2和1.3.3的方法测定其持留菌形成率和遗传学特性。
2. 结果与分析
2.1 鸡源奇异变形杆菌PM2658药敏性分析
通过二倍稀释法测得Gen、Cef和Ofx对鸡源奇异变形杆菌PM2658的MIC值分别为1.56、0.78和3.13 μg·mL-1。
2.2 鸡源奇异变形杆菌在不同硫酸庆大霉素浓度下形成持留菌的情况
不同Gen浓度下持留菌的形成情况分析结果(图 1)表明，经16×MIC和100×MIC Gen处理，稳定期的鸡源奇异变形杆菌在最初4 h数量急剧下降，随后Gen的杀菌速率几乎为零，表明形成了数量相对稳定的具有Gen耐受能力的持留菌。PM2658在16×MIC Gen和100×MIC Gen处理下，持留菌形成率分别为8.04×10-4和1.03×10-6。在100×MIC Gen处理下持留菌形成率比16×MIC Gen处理下持留菌形成率下降了两个数量级别，并且两组间持留菌形成率有显著性差异，显示在100×MIC Gen高致死浓度下鸡源奇异变形杆菌PM2658仍然可以形成持留菌。
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图 1 不同Gen浓度下鸡源奇异变形杆菌PM2658持留菌形成情况Figure 1. Formation of P. mirabilis PM2658 persisters under various concentrations of Gen2.3 鸡源奇异变形杆菌持留菌的遗传学特性
为了确认上述研究中的鸡源奇异变形杆菌PM2658遗传特性是否发生改变，把经过16×MIC和100×MIC Gen处理的鸡源奇异变形杆菌菌液斑点培养在含有相应浓度Gen的LB培养基上，结果(图 2)显示，经16×MIC和100×MIC Gen处理的鸡源奇异变形杆菌在含有相应浓度Gen的LB培养基上都未长出菌落，但在不含抗生素培养基上都可以正常生长。除此之外，随机挑取上述的在不含抗生素培养基上生长出来的单菌落，测定得到它们对Gen的MIC值与原始出发菌株PM2658一致，均为1.56 μg·mL-1。说明鸡源奇异变形杆菌持留菌PM2658药敏性没有发生改变；在高致死浓度抗生素处理下，鸡源奇异变形杆菌生理状态发生了改变，进入了持留菌状态，能够在高致死浓度抗生素作用下生存；也显示了鸡源奇异变形杆菌PM2658持留菌的遗传学特性没有发生改变。
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图 2 鸡源奇异变形杆菌PM2658持留菌遗传学特性检测结果注：A为未经抗生素处理PM2658和经16×MIC和100×MIC Gen处理4 h后持留菌在不含抗生素培养基上的生长情况；B为经过16×MIC和100×MIC Gen处理4 h后持留菌在含有相应浓度Gen培养基上的生长情况。Figure 2. Growth of P. mirabilis PM2658 persisters on culture media containing different amount of Gen2.4 鸡源奇异变形杆菌持留菌多重抗生素耐受性
本试验还研究了Gen与其他抗生素组合下鸡源奇异变形杆菌持留菌形成情况。图 3显示鸡源奇异变形杆菌PM2658在16×MIC Gen、4×MIC Cef和4×MIC Ofx 3种抗生素环境下作用4 h后持留菌形成数量趋于稳定，形成率分别为5.77×10-4、4.29×10-3和3.12×10-4。在Cef作用下，持留菌形成率高于Gen和Ofx一个数量级，提示Cef对鸡源奇异变形杆菌的有效性正在逐渐减弱。不同抗生素组合对鸡源奇异变形杆菌PM2658的杀菌规律与单独抗生素的杀菌规律一致。稳定期的PM2658在16×MIC Gen-4×MIC Cef、16×MIC Gen-4×MIC Ofx、4×MIC Cef-4×MIC Ofx、16×MIC Gen-4×MIC Cef-4×MIC Ofx处理4 h后都能不同程度地形成持留菌，形成率分别为9.43×10-5、3.59×10-5、6.46×10-5和1.07×10-6。说明鸡源奇异变形杆菌PM2658持留菌的形成取决于特定的抗生素条件，并可以形成具有多重抗生素耐受性的持留菌。在进行上述研究的同时，还进一步分析持留菌的药敏性，均与原始出发菌株PM2658一样，表明持留菌没有因为不同抗生素条件导致遗传特性的变化。
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图 3 鸡源奇异变形杆菌持留菌多重抗生素耐受性注：A为持留菌对Gen-Cef耐受性；B为持留菌对Gen-Ofx耐受性；C为持留菌对Gen-Cef-Ofx耐受性。Figure 3. Multi-drug tolerance of P. mirabilis PM2658 persisters2.5 不同营养条件下鸡源奇异变形杆菌持留能力
用16×MIC Gen分别处理在LB培养基、1/2 LB培养基和1/5 LB培养基生长至稳定期的奇异变形杆菌PM2658，结果如图 4所示。1/2 LB和1/5 LB培养基培养条件相对于普通的LB培养基更有利于持留菌的形成，持留菌形成率分别提高了3.51和17.67倍，说明奇异变形杆菌持留菌的形成与外界营养环境密切相关。随机测定不同营养条件下形成的持留菌在普通LB培养基上生长的菌落的Gen MIC值，均为1.56 μg·mL-1，说明它们对Gen的药敏性与起始菌株一样。
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图 4 鸡源奇异变形杆菌不同营养条件下持留菌形成特征Figure 4. Formation of P. mirabilis PM2658 persisters under varied nutritional conditions3. 讨论
近些年随着广谱及超广谱抗生素的广泛应用，奇异变形杆菌对一些常见的经典抗生素的敏感性逐渐下降，给治疗带来了极大的困难，包括氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛、四环素、复方新诺明、环丙沙星、诺氟沙星、氨苄西林/舒巴坦、头孢噻肟、左旋氧氟沙星、头孢曲松、头孢克洛和庆大霉素等，提示它们均已逐渐不能再高效地控制奇异变形杆菌引起的感染[12]。在本研究中鸡源奇异变形杆菌持留菌不仅具有高致死浓度Gen的耐受性，而且还具有同时对Gen和其他抗生素的多重耐受性。这些均提示奇异变形杆菌可以通过产生耐药性，还可以通过形成持留菌，以提高对抗生素的耐受性。2008年，Pearson MM等[13]首次完成了奇异变形杆菌HI4320的全基因组测序，为奇异变形杆菌持留菌形成特征和抗生素耐受机制的分析提供了有利条件。
为了降低细菌持续存在的危害，目前最为行之有效的办法之一就是针对持留菌生物学形成特征及其抗生素耐受机制进行研究，筛选新的药物作用靶点，阻断持留菌的产生和抗生素耐受性。持留菌现象相当普遍，除了抗生素条件之外的一些其他不利环境，包括氧化胁迫、营养缺失、群体效应、DNA损伤和胞内胁迫等也会促进持留菌的产生[14-18]。在本试验中，1/5 LB培养基中鸡源奇异变形杆菌持留菌形成率比LB和1/2 LB培养基中均有不同程度的提高，说明鸡源奇异变形杆菌持留菌的形成确实与营养环境密切相关。持留菌的产生是细菌瞬时获得和胁迫信号双重作用下的应激反应(Stringent response, SR)。研究结果表明大肠杆菌hipA7突变株持留菌数量增加了100~1 000倍，HipA毒素可以影响核酸和蛋白质的合成，破坏对于细菌利用营养物质构建蛋白质至关重要的化学“信号”过程，细菌将其解读为一种“饥饿信号”，使得细菌进入到失活的状态，从而促进产生持留菌的应激反应[19-20]。但是，当大肠杆菌和铜绿假单胞菌relA和spoT基因缺失后，持留菌的产生却减少了[19, 21]。持留菌产生的应激反应还依赖于RelA和SpoT介导的(p)ppGpp的合成，(p)ppGpp可以调控基因的表达来促进细菌的存活[22]。持留菌形成及其抗生素耐受机制涉及细菌生存进化的复杂过程，目前关于持留菌及其抗生素耐受机制的相关报道相对于细菌耐药机制少之又少。本研究初步揭示了奇异变形杆菌持留菌在Gen作用下的形成特性，为今后进一步研究持留菌抗生素耐受机制、重要致病菌奇异变形杆菌药物靶位的筛选提供科学的理论依据和实践基础，为新型、高效药物的研发，以及重大细菌性疾病的防治奠定基础。
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图 1 南安石亭群体种茶树种质资源成熟叶片形态
Figure 1. Morphology of mature tea leaves of Shiting plantation germplasms
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图 2 南安石亭群体种茶树种质资源指纹图谱
Figure 2. Fingerprint map of polymorphic sites of Shiting plantation tea germplasms
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图 3 17份南安石亭群体种茶树种质资源及6个福建代表性栽培品种聚类图
Figure 3. Cluster analysis on 17 Shiting plantation tea germplasms and 6 representative cultivated varieties from Fujian
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图 4 南安石亭群体种茶树种质资源主要成分主成分分析
Figure 4. Principal component analysis on Shiting plantation tea germplasms
表 1 17份南安石亭群体种茶树种质资源
Table 1 Germplasm resources of 17 C.sinensis plants planted in Shiting population, Nan'an
编号
Code茶树种质
Germplasm resour测s长宽比
Aspect ratio叶面积
Leaf area/cm2叶形
Blade shape叶色
Leaf color1 ST1 2.87 10.63 长椭圆形 黄绿色 2 ST2 2.83 10.47 长椭圆形 黄绿色 3 ST3 2.54 10.25 长椭圆形 黄绿色 4 ST4 2.32 10.15 椭圆形 黄绿色 5 ST5 2.61 14.31 长椭圆形 黄绿色 6 ST6 3.10 9.56 披针形 黄绿色 7 ST7 2.82 9.55 长椭圆形 深绿色 8 ST8 2.20 6.16 椭圆形 黄绿色 9 ST9 2.25 16.13 椭圆形 深绿色 10 ST10 2.37 5.99 椭圆形 深绿色 11 ST11 2.35 6.58 椭圆形 黄绿色 12 ST12 2.18 17.61 椭圆形 黄绿色 13 ST13 2.44 10.68 椭圆形 深绿色 14 ST14 2.52 9.34 长椭圆形 黄绿色 15 ST15 2.26 8.37 椭圆形 深绿色 16 ST16 2.17 13.65 椭圆形 黄绿色 17 ST17 2.50 11.83 椭圆形 黄绿色 
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表 2 南安石亭群体种茶树种质资源儿茶素组分含量
Table 2 Catechins of Shiting plantation tea germplasms
（单位：mg·g−1） 儿茶素类
CatechinsST2 ST3 ST5 ST6 ST8 ST10 ST11 ST12 ST14 ST17 非酯
型儿
茶素
Non-ester
catechinsGC 0.35±0.02f 0.96±0.05a 0.42±0.01ef 0.48±0.02def 0.85±0.02ab 0.49±0.06def 0.76±0.03bc 0.61±0.12cde 0.88±0.02ab 0.65±0.30cd EGC 23.68±1.41f 28.91±2.25e 38.57±2.38c 24.79±2.07ef 56.41±3.73a 29.40±3.30d 38.44±3.66c 45.12±3.11b 44.39±1.16b 31.80±0.40d C 1.72±0.06 2.15±0.18a 1.93±0.09ab 1.98±0.25ab 1.95±0.30ab 1.36±0.31 c 1.78±0.27ab 0.83±0.09de 0.91±0.08d 0.51±0.01e EC 13.83±1.40cd 11.89±0.79e 15.06±0.36c 7.06±0.49f 18.72±0.55a 8.13±0.34f 13.29±0.88d 17.44±1.07b 10.96±0.47e 7.82±0.13f 总量 39.58±2.06de 43.91±3.34d 55.98±2.77c 34.31±2.88e 77.93±4.35a 39.38±3.83de 54.27±4.77c 64.00±4.44b 57.14±1.74c 40.78±0.38d 酯型儿
茶素
Ester
catechinsEGCG 92.51±6.53a 52.21±3.22d 57.99±1.27cd 98.30±6.29a 61.37±2.20c 76.02±4.76b 40.30±3.97e 57.12±5.35cd 63.94±2.28c 39.60±0.91e EGCG3" Me 12.97±0.88b 13.27±0.66b 1.66±0.11e — 7.11±0.18c — 6.02±0.52d 6.55±0.48cd 6.36±0.25cd 18.18±0.14a ECG 31.75±2.02a 14.82±0.58e 17.63±0.43c 19.92±0.96b 17.16±0.47cd 14.93±0.70e 11.18±0.85f 15.77±1.11de 11.64±0.38f 7.58±0.12g CG 0.66±0.03c 0.94±0.05b 0.65±0.03c 0.62±0.02c — 0.65±0.02c — — — 1.41±0.08a 总量 137.89±9.45a 81.24±4.49d 77.93±1.79d 118.84±7.25b 85.64±2.86cd 91.6±5.44c 57.50±5.35f 79.44±6.88d 81.94±2.89d 66.77±0.88e 总儿茶素
Total
catechins177.47±11.15a 125.15±7.81ef 133.91±4.28de 153.15±9.93bc 163.57±6.84ab 130.98±7.64de 111.77±10.00fg 143.44±11.29cd 139.08±4.56cde 107.55±1.02g 儿茶素
苦涩味指数
Catechins
bitterness and
astringency index9.54±1.07c 6.90±0.13d 6.74±0.07de 15.87±0.07a 6.57±0.16de 12.73±0.30b 6.02±0.16e 6.49±0.15de 10.18±0.15c 9.56±0.18c 儿茶素
品质指数
Catechin
quality index524.60±7.00a 232.12±5.47d 196.46±10.04e 477.71±17.2b 139.46±6.84gh 311.54±33.00c 133.99±3.89h 161.41±3.74fg 170.25±2.58f 148.39±4.63fgh 数值表示3个样品均值±标准差；同行不同小写字母表示差异显著（P ＜ 0.05）；“—”表示未检测出。表3 同。
Data are standard deviation ± mean of triplicated samples; those with different lowercase letters on same row indicate significant differences at P＜0.05; "—" indicates not detected. Same for Table 3.
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表 3 南安石亭群体种茶树种质资源氨基酸的组分含量
Table 3 Amino acids of Shiting plantation tea germplasms
（单位：mg·g−1） 氨基酸组分
Amino acid
componentsST2 ST3 ST5 ST6 ST8 ST10 ST11 ST12 ST14 ST17 鲜味类
FlavorThea 3.27±0.14e 9.98±0.13a 5.54±0.17d 2.07±0.12g 1.61±0.28h 7.17±0.38b 6.50±0.36c 2.62±0.19f 2.37±0.06fg 2.10±0.00g Pro 0.29±0.01e 0.69±0.02a 0.31±0.01e 0.52±0.04bc 0.37±0.18de 0.36±0.02de 0.47±0.04cd 0.60±0.02ab 0.40±0.04de 0.38±0.03de Glu 2.27±0.15bc 2.53±0.29b 0.61±0.05f 1.13±0.04e 0.97±0.14ef 1.93±0.00cd 1.76±0.23d 3.90±0.65a 4.09±0.13a 0.14±0.02g GABA 0.06±0.00a 0.06±0.00a 0.06±0.00a 0.06±0.00a 0.06±0.00a 0.06±0.00a 0.07±0.00a 0.07±0.00a 0.07±0.00a 0.07±0.00a Asp 0.30±0.14cd 0.59±0.01b 0.24±0.03de 0.88±0.04a 0.15±0.02ef 0.31±0.08cd 0.17±0.04ef 0.34±0.05cd 0.39±0.07c 0.12±0.01f 总量 6.20±0.26f 13.85±0.24a 6.76±0.19e 4.66±0.13g 3.16±0.35g 9.83±0.29b 8.96±0.2c 7.54±0.49d 7.31±0.09d 0.81±0.01h 甜味类
SweetnessAla 0.13±0.04f 0.28±0.01de 0.14±0.03f 0.18±0.04ef 0.46±0.1c 0.47±0.06c 0.93±0.09b 0.39±0.02cd 0.16±0.04ef 2.00±0.17a Thr 0.22±0.03e 0.53±0.03a 0.27±0.02d 0.41±0.03b 0.17±0.04e 0.35±0.02c 0.36±0.03c 0.36±0.02c 0.35±0.04c 0.21±0.02e Asn 0.28±0.03cd 0.57±0.2a 0.24±0.07cd 0.6±0.01a 0.19±0.04d 0.37±0.12bc 0.29±0.04cd 0.35±0.02bcd 0.48±0.06ab 0.24±0.02cd Ser 0.37±0.01f 1.24±0.06a 0.47±0.05ef 0.8±0.08c 0.55±0.03def 1.00±0.08b 0.66±0.31cde 0.8±0.02c 0.75±0.05cd 0.43±0.07f Gly 0.04±0.01d 0.06±0.02cd 0.25±0.03a 0.09±0.02cd 0.12±0.07c 0.06±0.04cd 0.19±0.01b 0.05±0.03d 0.06±0.05cd 0.1±0.04cd Gln 3.15±0.27b 3.10±0.02b 0.47±0.10f 1.59±0.08e 1.00±0.17e 3.76±0.18a 2.58±0.34c 2.99±0.27b 3.69±0.13a 0.18±0.03f 总量 4.22±0.13d 5.80±0.05ab 1.85±0.03g 3.96±0.22d 2.45±0.28f 5.94±0.37a 4.88±0.17c 4.93±0.3c 5.40±0.35b 3.03±0.19e 芳香类
AromaticLys 0.21±0.04cd 0.62±0.03a 0.15±0.02de 0.42±0.03b 0.19±0.08cd 0.24±0.02c 0.25±0.01c 0.38±0.02b 0.23±0.03c 0.11±0.04e Tyr 0.53±0.05cd 0.61±0.03c 0.49±0.04de 0.81±0.07b 0.54±0.1cd 0.41±0.04ef 0.85±0.07b 2.24±0.03a 0.55±0.01cd 0.36±0.08g Trp 0.47±0.04a 0.27±0.02c 0.16±0.04e 0.33±0.03b 0.17±0.04e 0.16±0.00e 0.17±0.01e 0.28±0.02c 0.22±0.01d 0.08±0.02f 总量 1.21±0.13c 1.5±0.02b 0.79±0.03e 1.56±0.04b 0.90±0.16de 0.81±0.06e 1.27±0.08c 2.9±0.05a 1.00±0.02d 0.55±0.11f 苦味类
BittersArg 2.81±0.15d 8.25±0.46a 4.93±0.13c 1.86±0.12e 0.98±0.36f 5.91±0.27b 6.30±0.31b 2.18±0.3e 2.11±0.25e 0.14±0.01g Leu 0.28±0.01ef 1.07±0.02a 0.45±0.06bc 0.5±0.04b 0.33±0.04de 0.27±0.02ef 0.24±0.03fg 0.39±0.06cd 0.34±0.02de 0.2±0.04g Ile 0.31±0.02cd 0.91±0.21a 0.45±0.09bc 0.48±0.03b 0.06±0.03f 0.22±0.00def 0.22±0.05def 0.29±0.11cde 0.38±0.09bcd 0.14±0.03ef His 0.11±0.02cd 0.15±0.02b 0.09±0.01d 0.19±0.00a 0.11±0.04cd 0.11±0.02cd 0.12±0.02bcd 0.14±0.01bc 0.11±0.02bcd 0.09±0.02d Val 0.18±0.03e 0.49±0.02a 0.12±0.01f 0.40±0.01b 0.06±0.03g 0.22±0.03d 0.21±0.02de 0.33±0.02c 0.23±0.01d 0.06±0.02g 总量 3.68±0.18d 10.86±0.36a 6.04±0.29c 3.43±0.15de 1.54±0.38f 6.73±0.22b 7.09±0.29b 3.33±0.27de 3.17±0.31e 0.62±0.08g 其他
Otherβ-ABA 0.09±0.01e 0.11±0.01e 2.42±0.27b 0.08±0.01e 0.85±0.26d 0.16±0.04e 2.67±0.22a 1.24±0.13c 0.07±0.01e 0.90±0.04d sar 0.17±0.01c 0.22±0.04bc 0.23±0.00bc 0.31±0.13abc 0.19±0.03bc 0.34±0.14ab 0.33±0.09abc 0.28±0.06abc 0.41±0.06a 0.32±0.10abc 总氨基酸 15.55±0.39f 32.32±0.44a 18.09±0.7e 13.70±0.08g 9.15±0.68h 24.87±0.57c 25.32±0.19b 20.21±0.52d 17.47±0.8e 8.35±0.27i
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